譚 娟， 黃 靜， 歐立軍

(生命科學(xué)系湘西藥用植物與民族植物學(xué)湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室懷化學(xué)院，湖南懷化418008)

天門冬Asparagus cochinchinensis (Lour. )Merr. ，百合科天門冬屬植物，在我國(guó)分布較廣，其塊根有養(yǎng)陰潤(rùn)燥、清肺生津的作用，是多個(gè)民族使用的中藥材，同時(shí)可以作為滋補(bǔ)品使用［1］。目前對(duì)天門冬抗氧化能力的研究主要集中在體內(nèi)，有研究發(fā)現(xiàn)，天門冬醇提液和水提液均可顯著降低小鼠肝細(xì)胞膜MDA 水平［2］，醇提取液能顯著提高小鼠腦組織中NOS 和SOD 活性，使NO 水平增加［3］，水提液能顯著增強(qiáng)小鼠血清中NOS 活性，提高NO 水平［4］。天門冬屬植物被報(bào)道有一定的抑菌作用，如蘆筍［5］和長(zhǎng)刺天門冬［6-7］，而對(duì)該屬中的主要藥用植物天門冬的體外抗氧化和抑菌的研究少見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過分析天門冬水提液體外對(duì)DPPH、ABTS、羥基自由基和超氧陰離子等的清除及對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌和銅綠假單胞菌的抑制作用，探討天門冬水提液體外抗氧化和抑菌能力，為開發(fā)天門冬深加工產(chǎn)品提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料 天門冬，實(shí)驗(yàn)室自產(chǎn)，經(jīng)曾漢元教授鑒定為百合科天門冬屬天門冬物種。將天門冬烘干后，粉碎成粗粉。取20 g，加水160 mL 煮提3 次，1 h/次，合并3 次提取液，抽濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得天門冬水提液，冷藏備用。參照《中國(guó)藥典》［8］和熊大勝等［9］，以人體實(shí)際所用天門冬生藥劑量為標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)定天門冬水提液的生藥低、中和高質(zhì)量濃度分別為1.0、2.0 和4.0 mg/mL。以BHT、Vc、青霉素和羅紅霉素作為陽性對(duì)照，其配制方法如下:分別稱取1g BHT 和Vc 溶于10 mL 的酒精中得到100 mg/mL 的BHT和Vc 溶液;分別稱取0.1 g 羅紅霉素和青霉素溶于10 mL的酒精中得到10 mg/mL 溶液，用10 倍稀釋法稀釋得到10 μg/mL羅紅霉素和青霉素溶液。

1.2 方法

1.2.1 體外抗氧化作用

1.2.1.1 DPPH 自由基清除作用的測(cè)定 參考Jiang 等［10］，取樣品溶液2 mL，加入2 mL 1.25 ×10-4mol/L 的DPPH 溶液，迅速混勻后，室溫下避光靜置30 min，在517 nm 下測(cè)定溶液的吸光值，以無水乙醇代替樣品作為空白，BHT 和Vc 作為陽性對(duì)照，根據(jù)公式，測(cè)出清除率:D% = ［1 -(Ai-Aj)/Ac］ ×100%，Ai為加入樣品后的吸光值，Aj為樣品本底吸光值，Ac為空白吸光值。

1.2.1.2 ABTS 自由基清除作用的測(cè)定 參考程超等［11］，稍做修改，用2.45 mmol/L 的過硫酸鉀配制7 mmol/L 的ABTS 貯備液，室溫、避光條件下靜置12 ～16 h，將ABTS貯備液用10 mmol/L pH 7.4 磷酸緩沖液稀釋制備ABTS 測(cè)試液，使其在734 nm 的吸光度為(0.7 ±0.02)，取4 mL ATBS 測(cè)試液，加入40 μL 樣品溶液，振搖30 s，反應(yīng)6 min 后，測(cè)定734 nm 波長(zhǎng)處的吸光度，根據(jù)公式，測(cè)出清除率:清除率/% = (1 -A樣品/0.700) ×100)。

1.2.1.3 羥基自由基和超氧陰離子的測(cè)定 按照南京建成生物工程研究所研制的試劑盒進(jìn)行。

1.2.2 天門冬提取液抑菌作用

1.2.2.1 菌種活化 將融化的培養(yǎng)基裝入試管，滅菌后擺斜面。在無菌條件下用劃線法將供試菌種移接入相應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上，于37 ℃下培養(yǎng)18 ～24 h，進(jìn)行菌種斜面活化。

1.2.2.2 供試菌株懸浮液的制備 麥?zhǔn)媳葷岱ㄖ谱骶鷳乙?9.8 mL 的1%的硫酸和0.2 mL 的0.25%的氯化鋇溶液，制得的菌懸液含菌量為2.0 ×108CFU/mL):將活化好的菌種，在無菌條件下，每種分別挑取兩環(huán)菌苔，各用生理鹽水稀釋，再與麥?zhǔn)媳葷嵋簩?duì)比(調(diào)節(jié)生理鹽水的用量)，使菌液的渾濁度與麥?zhǔn)媳葷嵋簻啙岫然疽粯印?/p>

1.2.2.3 含菌平板制作 將新鮮配制的培養(yǎng)基于121 ℃條件下滅菌，當(dāng)培養(yǎng)基冷至50 ～60 ℃時(shí)，超凈工作臺(tái)上將培養(yǎng)基倒入滅菌的90 mm 培養(yǎng)皿中，每皿15 ～20 mL 培養(yǎng)基，待平板冷卻后，每皿中加入0.1 mL 菌懸液，用三角玻璃涂棒均勻涂成薄板備用。

1.2.2.4 抑菌作用測(cè)定 無菌操作，用鑷子取無菌濾紙片在各個(gè)藥液中浸濕，在容器壁瀝去多余的溶液，在標(biāo)記的相應(yīng)位置的平板上貼好濾紙片(每組平行3 次，取平均值)，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并測(cè)量抑菌環(huán)直徑，比較抑菌效果(注:抑菌圈在15 mm 以上，抑菌能力強(qiáng);抑菌圈在10 ～15 mm，抑菌能力較強(qiáng);抑菌圈在10 mm 以下，抑菌能力弱)。

2 結(jié)果與分析

2.1 天門冬水提液體外抗氧化作用分析

2.1.1 天門冬水提液對(duì)DPPH 自由基的清除作用 天門冬水提液對(duì)DPPH 自由基的清除作用隨著質(zhì)量濃度的提高而增強(qiáng)，低、中和高質(zhì)量濃度天門冬水提液對(duì)其的清除效果存在顯著差異，但3 個(gè)質(zhì)量濃度的提取液的清除效果都不如BHT 和Vc，這表明天門冬水提液有一定的DPPH 自由基的清除效果，但清除能力不如BHT 和Vc (表1)。

表1 天門冬水提液對(duì)DPPH 自由基的清除作用

2.1.2 天門冬水提液對(duì)ABTS 自由基的清除作用 天門冬水提液對(duì)ABTS 自由基的清除作用隨著質(zhì)量濃度的提高而增強(qiáng)，低和中質(zhì)量濃度提取液的清除效果無明顯差異，高質(zhì)量濃度的水提液的清除效果與Vc 的清除效果接近，但低于BHT 的作用效果，這說明高質(zhì)量濃度天門冬提取液對(duì)ABTS 自由基的清除作用較強(qiáng)，但不如BHT (表2)。

表2 天門冬水提液對(duì)ABTS 自由基的清除作用

2.1.3 天門冬水提液對(duì)羥基自由基的清除作用 天門冬水提液對(duì)羥基自由基的清除能力隨著質(zhì)量濃度的提高而增強(qiáng)，且不同質(zhì)量濃度提取液的清除效果存在顯著差異，高質(zhì)量濃度水提液的清除效果顯著高于BHT 和Vc，中質(zhì)量濃度水提液的清除效果顯著高于Vc，低質(zhì)量濃度提取液的清除效果與Vc 接近，這說明天門冬提取液對(duì)羥基自由基的清除作用較強(qiáng)(表3)。

表3 天門冬水提液對(duì)羥基自由基的清除作用

2.1.4 天門冬水提液對(duì)超氧陰離子的清除作用 天門冬水提液對(duì)超氧陰離子的清除能力隨著質(zhì)量濃度的提高而增強(qiáng)，且不同質(zhì)量濃度提取液的清除效果存在顯著差異，高質(zhì)量濃度水提液的清除效果顯著高于BHT 和Vc，中質(zhì)量濃度水提液的清除效果顯著高于Vc，低質(zhì)量濃度提取液的清除效果弱于Vc，這說明天門冬提取液有較強(qiáng)的清除超氧陰離子能力(表4)。

表4 天門冬水提液對(duì)超氧陰離子的清除作用

2.2 天門冬水提液體外抑菌作用分析 天門冬水取液對(duì)供試的細(xì)菌都有抑菌活性，且其隨質(zhì)量濃度的提高，抑菌作用增強(qiáng)，其中對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用較強(qiáng)，最低抑菌質(zhì)量濃度為0.5 g/mL，對(duì)大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌和銅綠假單胞菌抑制作用較差，最低抑菌質(zhì)量濃度為2 g/mL(表5)。

表5 不同濃度的天門冬水提液對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制(抑菌圈直徑單位cm)

3 討論

有研究報(bào)道，天門冬的70%乙醇提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黑曲霉有較強(qiáng)的抑制作用［12］。本研究卻表明，天門冬水提液對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌效果相對(duì)較好外，對(duì)其他3 種菌的抑制效果都較差，可能與天門冬的提取溶劑有關(guān)，這與嚴(yán)寒靜等［13］對(duì)金櫻子，歐陽蒲月等［14-15］對(duì)頂芽狗脊莖、華南十大功勞的不同提取物體外抑菌活性研究結(jié)果類似，即不同提取物的抑菌效果不一致，且有研究認(rèn)為，天門冬水提液的體內(nèi)抗氧化效果優(yōu)于其他提取液的效果［16］，這可能與不同提取方法對(duì)不同化學(xué)成分的提取效果不一相關(guān)。同時(shí)，本研究認(rèn)為，天門冬水提液的自由基清除能力隨質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng);高質(zhì)量濃度提取液對(duì)DPPH 和ABTS 自由基清除能力低于BHT 和Vc，中和高質(zhì)量濃度提取液對(duì)羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除能力不低于BHT 和Vc。

綜上所述，天門冬水提液雖然抑菌能力較差，但有較強(qiáng)的體外抗氧化能力。因此天門冬作為藥食兼用保健植物，可以與其他食物一起食用，達(dá)到清除體內(nèi)自由基，抗氧化和預(yù)防衰老的作用。

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