寇毅英， 李永芳， 楊 梅， 李瑞蓮

(青海大學醫(yī)學院，青海 西寧810001)

藏藥十五味乳鵬散，藏名畢瓊久埃日布，由乳香、決明子、黃葵子、毛訶子、木香、余甘子、安息香、訶子等生長在高寒缺氧的雪域藥材組成，是藏醫(yī)治療關節(jié)疼痛、腫脹、關節(jié)腔積水諸證的古方［1］，《四部醫(yī)典》、 《藏醫(yī)札記》均有十五味乳鵬散“痛風黃水部分閃痛除”的記載［2-3］，至今已有一千多年的歷史。目前十五味乳鵬散是藏醫(yī)治療痛風性關節(jié)炎的首選藥，臨床療效觀察其效果顯著［4-5］。但它的研究僅限于臨床資料的積累，缺乏科學的實驗資料，為進一步探討其藥效學，本課題組通過動物實驗，觀察藏藥十五味乳鵬散鎮(zhèn)痛、抗炎的療效，為臨床用藥提供科學依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 購自青海省藏醫(yī)院，十五味乳鵬散低、中、高劑量組混懸液的制備按照成人用量的10、20、30 倍［即0.4、0.8、1.2 g/(kg·d)］，成人的推薦劑量為每日2.4 g，用蒸餾水配制成相應的混懸液備用。

1.2 動物 清潔級昆明種小鼠，體質(zhì)量(22 ±2)g;SD大鼠，雌、雄各半，體質(zhì)量(180 ±20)g，由青海省地方所提供，動物購得后于實驗前一周適應環(huán)境，自由飲食，自然光照，室溫控制在(20 ±2)℃。

1.3 試劑和儀器 YLS-6B 智能熱板儀(淮北正華生物儀器設備有限公司);PV-200 足趾容積測量儀(成都泰盟科技有限公司);DU800 分光光度計(beckman，美國);伊文思藍(E8010，Sigma E2129，)

2 方法

2.1 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗［6］取雌性昆明種小鼠放在預熱至55 ℃金屬板上，恒溫(變化在±0.5 ℃內(nèi))，以小鼠舔后足反應潛伏期為痛閾指標，篩選5 ～30 s 小鼠40 只。動物隨機分為模型對照組，十五味乳鵬散低、中、高劑量組。每組10 只，各組小鼠給藥前測其基礎痛閾值。灌胃給藥，每天1 次，連續(xù)7 d，十五味乳鵬散組灌胃低、中、高劑量的十五味乳鵬散混懸液，模型對照組給予相應體積的生理鹽水，末次給藥后分別測定給藥后30、60、120、180、240 min的痛閾值。

2.2 小鼠醋酸扭體法［7-8］取40 只小鼠，雌雄各半，隨機分為4 組，每組10 只。給藥劑量與方式同“2.1”項，于末次給藥1 h 后，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/鼠，觀察并記錄注射后15 min 內(nèi)小鼠的扭體反應次數(shù)，以小鼠腹部內(nèi)凹、后肢伸張、臀部高起為扭體特征作為疼痛反應指標，記錄扭體反應次數(shù)。

2.3 醋酸致小鼠毛細血管通透性增加［8］小鼠50 只，雌雄各半，分為正常對照組、模型組、十五味乳鵬散低、中、高劑量組，每組10 只。正常對照組、模型組給予相應體積的生理鹽水，其余各組給藥劑量與方式同“2.1”項。末次給藥后1 h，除正常對照組外，其余各組尾靜脈注射0.5%伊文思藍溶液0.1 mL/10 g，隨即腹腔注射0.6% 醋酸0.1 mL/10 g。20 min 后各組小鼠脫頸椎處死，腹腔注射5 mL 生理鹽水，輕揉腹部，剪開腹腔，用吸管吸出洗滌液，3 000 r/min離心15 min，取上清液于590 nm波長處測吸光度A 值。

2.4 蛋清致大鼠足趾腫脹實驗［9］選體質(zhì)量180 ～220 g的SD 大鼠40 只，雌、雄各半，隨機分成4 組:模型組，十五味乳鵬散低、中、高劑量組，每組10 只。給藥劑量與方式同“2.1”項。連續(xù)灌胃7 d，于末次給藥后測量未致炎前的各大鼠右后足趾容積，并于給藥后1 h，每只大鼠右后足趾皮下注射10%蛋清生理鹽水0.1 mL 致炎，測量注射蛋清后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 的大鼠右后足趾腫脹容積。

3 結果

3.1 十五味乳鵬散對小鼠熱板致痛的影響 與模型對照組比較，十五味乳鵬散高劑量組在給藥后30 min、1 h、2 h、3 h 期間能延長小鼠熱痛反應潛伏期，提高痛閾值，并且在給藥后1 h 更顯著;中劑量組在30 min、1 h 時能提高痛閾值(P ＜0.05 或P ＜0.01)，而低劑量組無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)。結果詳見表1。

表1 藏藥十五味乳鵬散對小鼠熱板痛域的影響(n=10，±s)

表1 藏藥十五味乳鵬散對小鼠熱板痛域的影響(n=10，±s)

注:與模型對照組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)給藥前熱痛域值/s給藥后不同時間熱痛域值/s 30 min 1 h 2 h 3 h 4 h模型對照組 —— 7.46 ±1.37 6.52 ±1.68 5.39 ±1.8 7.02 ±2.59 6.98±2.73 8.96 ±3.03低劑量組 0.4 6.30 ±1.02 6.89 ±1.86 6.98 ±2.03 6.27 ±1.94 8.63 ±2.41 8.25 ±2.59中劑量組 0.8 6.47 ±1.02 8.93 ±2.75# 8.0 ±2.5# 7.2 ±1.66 8.87 ±2.57 9.17 ±2.88高劑量組 1.2 7.06 ±1.62 8.1 ±1.84# 10.46 ± 3.35## 9.3 2 ± 2.87# 10.27 ±3.67#9.28 ±2.3

3.2 十五味乳鵬散對小鼠醋酸扭體反應的影響 與模型對照組比較十五味乳硼散各劑量組均能減少醋酸所致小鼠扭體反應的次數(shù)(P ＜0.01)，具有鎮(zhèn)痛效應;但藥物各劑量組對小鼠扭體的潛伏期并無顯著的影響(P ＞0.05)，顯示十五味乳硼散對化學刺激引起的疼痛有明顯的抑制作用，結果詳見表2。

表2 藏藥十五味乳鵬散對醋酸致小鼠扭體反應的影響(n=10，±s)

表2 藏藥十五味乳鵬散對醋酸致小鼠扭體反應的影響(n=10，±s)

注:與模型對照組比較，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1) 潛伏期/min 扭體反應次數(shù)/15 min模型對照組 ——4.26 ±2.92 60.1 ±4.5低劑量組 0.4 4.76 ±1.92 28.8 ±8.35##中劑量組 0.8 6.47 ±2.93 32.3 ±14.1##高劑量組 1.2 4.59 ±0.99 43 ±8.89##

3.3 十五味乳鵬散對醋酸致小鼠毛細血管通透性增加的影響 與模型組相比，十五味乳鵬散中、高劑量組均能減少小鼠腹腔中伊文思藍的吸光度(P ＜0.01 或P ＜0.05)，低劑量組有降低的趨勢，但無顯著性意義(P ＞0.05)，結果詳見表3。

表3 藏藥十五味乳鵬散對醋酸致小鼠毛細血管通透性增加的影響(n=10，±s)

表3 藏藥十五味乳鵬散對醋酸致小鼠毛細血管通透性增加的影響(n=10，±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P ＜0.01;與模型對照組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)吸光度正常對照組 ——0.02 ±0.01模型對照組 —— 0.5 ±0.16＊＊低劑量組 0.4 0.45 ±0.20中劑量組 0.8 0.2 ±0.13##高劑量組 1.2 0.33 ±0.19#

3.4 十五味乳鵬散對蛋清致大鼠足趾腫脹的影響 蛋清致炎后各組大鼠足跖開始出現(xiàn)紅腫現(xiàn)象，并且于30 min 至2 h間腫脹達到了高峰，與模型對照組比較十五味乳鵬散高劑量組在致炎后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 均抑制了大鼠足趾的腫脹(P ＜0.01 或P ＜0.05)，并且在1 h 更顯著(P ＜0.01)，中劑量組在4 h、5 h，低劑量組在4 h 時能顯著的抑制大鼠的足腫脹(P ＜0.01 或P ＜0.05)，其余各時間點雖然可以看到抑制腫脹的趨勢，但并無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)。結果詳見表4。

表4 藏藥十五味乳鵬散對雞蛋清致大鼠足趾腫脹的影響(n=10，±s)

表4 藏藥十五味乳鵬散對雞蛋清致大鼠足趾腫脹的影響(n=10，±s)

注:與模型對照組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)致炎前足趾容積/mL致炎后不同時間足跖腫脹度/mL 30 min 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h模型對照組 —— 1.26 ±0.16 0.95 ±0.31 0.93 ± 0.19 0.9 ± 0.19 0.82± 0.16 0.86 ±0.15 0.85 ±0.19低劑量組 0.4 1.45 ±0.10 0.85 ±0.28 0.83 ± 0.23 0.78 ±0.20 0.65 ± 0.22 0.61 ±0.22# 0.57 ±0.22中劑量組 0.8 1.45 ±0.11 0.87 ±0.17 0.81 ± 0.15 0.71 ±0.19 0.71 ± 0.22 0.54 ±0.17## 0.45 ±0.13##高劑量組 1.2 1.36 ±0.16 0.65 ±0.21# 0.65 ±0.17##0.68 ± 0.13# 0.67 ± 0.11# 0.62 ±0.19# 0.43 ±0.25##

4 結論

藏醫(yī)《四部醫(yī)典》記載痛風病是因血液紊亂、食行失當、坐地圖逸、勞累損傷致使氣血紊亂造成的，臨床治療要求達到盡快終止急性關節(jié)炎發(fā)作;防治關節(jié)炎復發(fā);糾正高尿酸血癥;防止尿酸鹽沉積于腎臟、關節(jié)等處引起的并發(fā)癥［10］。因此抗炎、鎮(zhèn)痛是研究十五味乳鵬散痛風治療學的主要內(nèi)容之一。在鎮(zhèn)痛實驗中，熱板試驗通常被認為是用于篩選有選擇性的作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的鎮(zhèn)痛化合物，如嗎啡;醋酸扭體試驗被用于外周鎮(zhèn)痛物的評估［11-12］，本研究發(fā)現(xiàn)藏藥十五味乳鵬散各劑量組均明顯減少醋酸引起的小鼠扭體反應的次數(shù)，中、高劑量組還延長了小鼠的熱痛閾值;所以結果提示十五味乳鵬散具有鎮(zhèn)痛作用，其鎮(zhèn)痛部位主要可能是通過作用于外周而產(chǎn)生的，但也有中樞鎮(zhèn)痛機制的參與。

炎癥反應的急性時相是以局部血管擴張、毛細血管通透性增加為主要特征。本研究觀察到中、高劑量組的十五味乳鵬散降低了醋酸致小鼠毛細血管的通透性，并且抑制了蛋清致大鼠的足趾腫脹，表明十五味乳鵬散對急性炎癥早期的毛細血管擴張、滲出水腫有一定的抑制作用。雖然在動物實驗上初步證實了藏藥十五味乳鵬散有鎮(zhèn)痛、抗炎的作用，但其鎮(zhèn)痛、抗炎的具體機制還需進一步研究證實。

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