程 紋，王祝年，王建榮，晏小霞，王茂媛

中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點實驗室，儋州 571737

羊角拗［Strophanthus divaricatus(Lour.)Hook.et Arn.］為夾竹桃科(Apocynaceae)羊角拗屬(Strophanthus DC.)植物，主要產(chǎn)于我國云南、貴州、廣東、廣西和福建等地，老撾、越南也有分布［1］。羊角拗的種子、根、莖、葉、花均可入藥［2］，具有強心、利尿、子宮興奮、鎮(zhèn)靜、殺蟲等功效［3，4］，民間多用其治療蛇傷、癬疥、骨折、小兒麻痹后遺癥、多發(fā)性膿腫等［5］。研究表明，羊角拗全株有毒，且主要毒性成分為強心苷［6］，目前已從其種子、果皮、根、莖、枝葉等部位中分離得到20 多種強心苷，包括夾竹桃糖苷、鈴蘭新苷、毒毛旋花苷等［5，7-10］，同時還發(fā)現(xiàn)，羊角拗不同部位所含強心苷的類型及結(jié)構(gòu)具有相似性［11］。本課題組已先后對羊角拗根、葉的脂溶性成分進行了GC-MS 分析［6］，為進一步了解其有效成分，本研究對海南產(chǎn)羊角拗的根部進行提取分離，從其甲醇提取物中分離得到6 個化合物，分別鑒定為(+)-pinoresinol(1)、沙門苷元(2)、17βH-沙門苷元(3)、羊角拗苷(4)、β-谷甾醇(5)和胡蘿卜苷(6)，其中化合物1 為木脂素類化合物，2～4 為強心苷類化合物，5 和6 為植物甾醇，且化合物1、3 為首次從該植物中分離得到。

1 材料和方法

1.1 植物來源

羊角拗根于2010 年8 月采于海南省臨高加來，經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所王祝年研究員鑒定為夾竹桃科羊角拗屬植物羊角拗［Strophanthus divaricatus(Lour.)Hook.et Arn.］，標(biāo)本(憑證201008)現(xiàn)保存于熱帶作物品種資源研究所南藥中心。

1.2 儀器與試劑

熔點由RY-2 型熔點儀測定，溫度計未校正。NMR 由Brucker AV-400 型核磁共振儀(TMS 為內(nèi)標(biāo))測定。EI-MS 由AG AutoSpec 3000 型質(zhì)譜儀測定，采用70 eV 電離電壓。D-101 大孔吸附樹脂為山東魯抗醫(yī)藥公司產(chǎn)品。薄層層析硅膠、柱層析硅膠(60～80 目，200～300 目)及GF254硅膠板均為青島海洋化工公司產(chǎn)品。氘代試劑(CDCl3、MeOD)由北京希凱創(chuàng)新科技有限公司提供。所用有機試劑均為分析純，由廣州化學(xué)試劑廠提供。

1.3 提取與分離

自然風(fēng)干的羊角拗根，粉碎得粗粉11.9 kg;于95%的乙醇中室溫浸提3 次，每次7 d;合并浸提液，減壓濃縮至無醇味，得浸膏337.4 g;將其分散于水中成懸濁液，經(jīng)石油醚萃取3 次后，減壓回收石油醚和水液，得石油醚部分78.0 g、水相部分209.4 g。水相部分經(jīng)大孔吸附樹脂，用甲醇-水梯度洗脫，得A、B、C、D 四部分。D 經(jīng)真空減壓柱層析，氯仿-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，得到流分D1～D7。D3經(jīng)多次硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(2∶1)洗脫得化合物1(6.7 mg);D4再次經(jīng)真空減壓柱層析，以氯仿-甲醇梯度洗脫，得亞流分D4-1～D4-8，D4-3經(jīng)多次硅膠柱層析，以氯仿-甲醇(27∶1)、石油醚-乙酸乙酯(1∶3)洗脫得化合物2(6.9 mg)、3(6.8 mg);D4-4以石油醚-乙酸乙酯(1∶2)洗脫得化合物4(6.6 mg);D5經(jīng)多次硅膠柱層析，以石油醚-丙酮(10∶1)、氯仿-甲醇(1.5∶1)洗脫得化合物5(9.2 mg)、6(12.6 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色針晶(氯仿)，mp.118～120 ℃;［α+64°(c 1.0，CDCl3);EI-MS m/z 358［M］+，分子式C20H22O6;1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:6.88～6.90(4H，m，H-2'，H-5'，H-2''，H-5'')，6.83(2H，dd，H-6'，H-6'')，4.74(2H，d，H-2，H-6)，4.24(2H，dd，H-4，H-8)，3.10(2H，m，H-1，H-5)，3.90(6H，s，2OMe);13C NMR(CDCl3，400 MHz)δ:54.1(s，C-1，C-5)，85.9(s，C-2，C-6)，71.7(s，C-4，C-8)，132.9(s，C-1'，C-1'')，108.6(d，C-2'，C-2'')，146.7(s，C-3'，C-3'')，145.2(br.s，C-4'，C-4'')，119.0(d，C-5'，C-5'')，114.3(s，C-6'，C-6'')，55.9(s，OMe-3'，OMe-3'')。以上數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)［12］一致，故該化合物鑒定為(+)-pinoresinol。

化合物2 無色固體(甲醇)，mp.273～278 ℃;［α］-5.2°(c 2.3，MeOD);EI-MS m/z 390 ［M］+，分子式C23H34O5;1H NMR(MeOD，400 MHz)δ:4.04(1H，br.s，H-3)，3.70(1H，m，H-11)，2.88(1H，t，H-17)，0.87(3H，s，H-18)，1.05(3H，s，H-19)，4.56(2H，br.s，H-21)，5.89(1H，d，H-22);13C NMR(MeOD，400 MHz)δ:33.4(s，C-1)，29.5(s，C-2)，68.0(s，C-3)，34.8(t，C-4)，39.1(d，C-5)，28.2(t，C-6)，22.7(t，C-7)，43.0(d，C-8)，42.0(d，C-9)，37.8(s，C-10)，68.9(d，C-11)，51.1(s，C-12)，50.6(s，C-13)，85.7(s，C-14)，33.7(t，C-15)，28.0(t，C-16)，51.9(d，C-17)，17.6(s，C-18)，24.5(s，C-19)，177.7(s，C-20)，75.4(t，C-21)，118.0(s，C-22)，177.2(s，C-23)。以上數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)［11］一致，故將其鑒定為沙門苷元(sarmentogenin)。

化合物3 白色固體(甲醇)，mp.250～256 ℃;［α］-6.5°(c 2.3，MeOD);EI-MS m/z 390 ［M］+，分子式C23H34O5;1H NMR(MeOD，400 MHz)δ:4.03(1H，br.s，H-3)，3.64(1H，m，H-11)，3.11(1H，t，H-17)，1.04(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，4.56(2H，br.s，H-21)，5.95(1H，d，H-22);13C NMR(MeOD，400 MHz)δ:33.6(s，C-1)，29.5(s，C-2)，68.0(s，C-3)，34.9(t，C-4)，39.3(d，C-5)，28.2(t，C-6)，22.3(t，C-7)，43.2(d，C-8)，41.7(d，C-9)，37.7(s，C-10)，68.8(d，C-11)，42.7(s，C-12)，50.6(s，C-13)，86.3(s，C-14)，31.9(t，C-15)，25.5(t，C-16)，50.0(t，C-17)，19.7(s，C-18)，24.5(d，C-19)，174.6(d，C-20)，75.7(t，C-21)，117.1(t，C-22)，176.7(s，C-23)。將以上數(shù)據(jù)與化合物2 的波譜數(shù)據(jù)對比發(fā)現(xiàn)，本化合物中H-17 的化學(xué)位移值由2.88 偏移到3.11，向低場位移;C-12、C-15、C-16、C-17、C-20 的位移值(δ 42.7，31.9，25.5，50.0，174.6)均比化合物2 相應(yīng)碳原子的位移值小(δ 51.5，33.7，28.0，51.9，177.7)，即向高場位移;C-18 的δ值由17.6 偏移到19.7，向低場位移。說明本化合物中，C-17 位的H 是β 構(gòu)型［13］，故將其鑒定為17βH-沙門苷元(17βH-sarmentogenin)。

化合物4 白色固體(氯仿)，mp.192～195 ℃;［α］-32.9°(c 0.67，CDCl3);EI-MS m/z 535［M+H］+490，389，145，分子式C30H46O8;1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:3.90(H，br.s，H-3)，0.89(3H，s，H-18，H-19)，4.77(2H，dd，H-21)，5.88(H，t，H-22)，4.97(H，d，H-1')，1.25(3H，d，H-6')3.40(3H，s，3'-OMe);13C NMR(CDCl3，400 MHz)δ:33.4(d，C-1)，27.3(d，C-2)，71.7(t，C-3)，30.3(t，C-4)，38.0(q，C-5)，26.9(s，C-6)，21.5(t，C-7)，42.0(t，C-8)，40.9(s，C-9)，36.4(d，C-10)，67.6(t，C-11)，49.7(s，C-12)，49.5(s，C-13)，84.7(d，C-14)，33.5(s，C-15)，26.7(d，C-16)，50.4(s，C-17)，17.0(d，C-18)，24.0(d，C-19)，174.4(d，C-20)，73.4(t，C-21)，117.9(t，C-22)，173.6(d，C-23)，95.5(s，C-1')，34.6(s，C-2')，78.4(s，C-3')，76.3(s，C-4')，68.1(t，C-5')，17.8(d，C-6')，56.4(s，OMe-3')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］一致，故將其鑒定為羊角拗苷(divaricoside)。

化合物5 無色針晶(甲醇)，mp.139～144 ℃;其與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品的混合點樣在不同溶劑系統(tǒng)中展開，均為同一點，且混合后熔點不降低，故該化合物為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物6 白色粉末(甲醇)，mp.294～300 ℃;其與胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品的混合點樣在不同溶劑系統(tǒng)中展開，均為同一點，且混合后熔點不降低，故該化合物為胡蘿卜苷(daucosterol)。

化合物1～6 的結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～6 的結(jié)構(gòu)Fig.1 The structures of compounds 1-6

3 討論

據(jù)文獻(xiàn)報道，羊角拗中的強心苷類化合物強心效果顯著，羊角拗苷(4)具有與毒毛旋花子苷相似的強心作用，且藥效更溫和持久［14］。沙門苷元(2)和17βH-沙門苷元(3)的強心活性有待進一步研究。(+)-pinoresinol(1)是一種在植物中微量分布的木脂素，對白色念珠菌(Candida albicans)等真菌具有明顯的抑制滅殺作用［15］，因此，羊角拗具備開發(fā)新型抗真菌藥物的潛能。

本文豐富了羊角拗的化學(xué)成分研究資料，為其生物活性研究提供了科學(xué)依據(jù)。

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