謝麗源，彭衛(wèi)紅，黃忠乾，譚 偉，甘炳成

四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所，成都 610066

鮑氏層孔菌(Phellinus baumii)、裂蹄針層孔菌(Phellinus linteus)、松木層孔菌(Phellinus pim)是屬于銹革孔菌科(Hymenochaetacae)、針層孔菌屬(Phellinus)的藥用真菌，均屬于是中藥桑黃的來(lái)源菌，是珍稀的藥用真菌［1］。研究表明，這三種層孔菌具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗氧化、降血糖等功效，是目前國(guó)際公認(rèn)的生物抗癌領(lǐng)域中藥效非常好的藥用真菌［2，3］。研究發(fā)現(xiàn)，大型真菌具有較高的抗氧化活性，是開(kāi)發(fā)天然、安全、高效的天然抗氧化劑的理想材料。

目前體外抗氧化能力的測(cè)定方法比較多，這些方法與操作難易程度、生物相關(guān)性、反應(yīng)機(jī)理、反應(yīng)發(fā)生環(huán)境等相關(guān)。但是不論是哪種方法都各有利弊，目前為止，沒(méi)有一種方法可以代替全部的方法而作為標(biāo)準(zhǔn)方法用于所有復(fù)雜抗氧化劑的評(píng)價(jià)，更沒(méi)有一種方法可以模擬生物體內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境。大多數(shù)的學(xué)者，在研究抗氧化能力時(shí)，使用一種或同時(shí)使用不同機(jī)理的兩種或三種方法來(lái)共同評(píng)價(jià)物質(zhì)的抗氧化能力。然而，不同方法得出的結(jié)論并不一定都是一致的，有的甚至?xí)贸鱿喾吹慕Y(jié)論。由于方法的不統(tǒng)一使得目前有關(guān)抗氧化作用的研究十分混亂。因此，必須同時(shí)使用多種方法進(jìn)行測(cè)定，評(píng)價(jià)不同方法間的相關(guān)性，建立多種方法的數(shù)據(jù)庫(kù)，為抗氧化活性研究提供參考標(biāo)準(zhǔn)，并為栽培、育種以及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

本研究以層孔菌屬真菌中鮑氏層孔菌、裂蹄針層孔菌、松木層孔菌作為研究材料，利用多種抗氧化測(cè)定方法，對(duì)三種真菌不同菌株的抗氧化成分進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)和比較，揭示三種層孔菌在抗氧化方面的藥用價(jià)值，為其抗氧化機(jī)理研究以及進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株

鮑氏層孔菌:H2、H3、H6、H8、H9;裂蹄針層孔菌:H1、H5、H7、H10、H11、H12;松木層孔菌:H4、X、L、S、P。以上菌株均由四川省微生物研究開(kāi)發(fā)中心提供，并經(jīng)過(guò)分子鑒定。

1.2 試劑

DPPH:Sigma 公司;葡萄糖、無(wú)水乙醇、冰乙酸、乙酸乙酯、苯酚、過(guò)氧化氫、硫酸亞鐵、水楊酸、鄰苯三酚、鹽酸、磷酸鹽緩沖液、鐵氫化鉀、三氯乙酸、三氯化鐵、甲醇等均為分析純，成都長(zhǎng)征生物試劑公司提供。

1.3 儀器

紫外分光光度計(jì)UV1240:日本島津儀器公司;GLI66-Ⅱ高速離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器廠;HH.S11-Ni6-列六孔恒溫水浴鍋:北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠;ALC-Z10.3 電子天平:北京賽多利斯天平有限公司;R-201 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器:上海申勝生物技術(shù)有限公司;SHB-Ⅲ循環(huán)水多用真空泵:鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 液體發(fā)酵培養(yǎng)基

葡萄糖30 g/L，蛋白胨20 g/L，KH2PO43 g/L，MgSO4.7H2O 1 g/L，pH 自然。

1.4.2 發(fā)酵液制備

接種10%液體種子培養(yǎng)基(PDA)于裝液量為120 mL 發(fā)酵培養(yǎng)基(500 mL 三角瓶)中，培養(yǎng)溫度26 ℃，轉(zhuǎn)速120 rpm，培養(yǎng)7 d，過(guò)濾，收集發(fā)酵液，備用。

1.4.2 多糖含量測(cè)定

參考張惟杰方法［4］，以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程(Y=0.0147X+0.0081，R2=0.9968)。發(fā)酵液適當(dāng)稀釋后，取2 mL 加入5%苯酚1 mL，5 mL 濃硫酸，反應(yīng)20 min 后，在490 nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，將所得的光吸收值代入回歸方程，得到多糖含量。

1.4.3 總酚含量測(cè)定

以沒(méi)食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)品，按照福林-肖卡法［5］，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程(Y=0.1359X +0.0141，R2=0.9983)。樣品溶液0.2 mL 于10 mL 容量瓶，再加入1 mL 福林酚顯色劑，搖勻后靜置5 min，再加入2 mL 15% Na2CO3溶液，定容至10 mL，室溫下反應(yīng)2 h 后，在760 nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。將所得的光吸收值代入回歸方程，得到總酚含量。

1.4.4 黃酮含量測(cè)定

以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，按照蘆丁-AlNO3法［6］繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為(Y=0.009X-0.0006，R2=0.9994)。精密量取樣品液1 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，使混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉試液10 mL，再加水至25 mL 刻度，搖勻，放置15 min，在510 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。將所得的光吸收值代入回歸方程，得到黃酮含量。

1.4.5 還原力測(cè)定［7］

取1 mL 不同濃度的待測(cè)液與2.5 mL 0.2 mol/L pH6.6 的磷酸鹽緩沖液及2.5 mL 1%鐵氰化鉀混合，混合物混勻后50 ℃水浴保溫20 min，然后加入2.5 mL 10% (W/V)三氯乙酸，4000 rpm 離心10 min。取上清液2.5 mL，分別加入2.5 mL 蒸餾水和0.5 mL 0.1%FeCl3混勻，靜置10 min，以蒸餾水代替FeCl3溶液作為空白調(diào)零，于700 nm 處測(cè)定吸光度。

1.4.6 對(duì)超氧陰離子自由基(O-·2)清除作用研究［8］

采用鄰苯三酚自氧化法。取4.5 mL 50 mmol/L pH 8.2 的Tris-HCl 緩沖液，4.2 mL 蒸餾水，混勻后在25 ℃水浴中保溫20 min，取出后立即加入25 ℃預(yù)熱過(guò)的3 mmol/L 鄰苯三酚(由10 mmol/L HCl 配制)0.3 mL，迅速搖勻后倒入比色杯，空白管用10 mmol/L HCl 代替鄰苯三酚，325 nm 下每隔30 s 測(cè)定吸光值，計(jì)算線性范圍內(nèi)每分鐘吸光度的增加。多糖清除作用是在加入鄰苯三酚之前，加入不同濃度的多糖溶液，在相同波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算抑制率。

式中:△A0/△t表示鄰苯三酚自氧化反應(yīng)速率，△Ai/△t表示加入多糖樣品液后鄰苯三酚自氧化反應(yīng)速率。

1.4.7 對(duì)羥自由基(·OH)的清除作用研究［9］

9 mmol/L FeSO41 mL，9 mmol/L 水楊酸-乙醇1 mL，不同濃度的待測(cè)溶液1 mL，8.8 mmol/L H2O21 mL 最后加入混勻并啟動(dòng)整個(gè)反應(yīng)。37 ℃反應(yīng)0.5 h 后，4000 rpm 離心10 min，然后以蒸餾水作為空白，在510 nm 下測(cè)定吸光度。以上混合溶液中以蒸餾水代替H2O2作為待測(cè)溶液的本底吸收值。

式中:A0為空白對(duì)照液的吸光度，Ax為加入待測(cè)溶液后的吸光度，Ax0為不加顯色劑H2O2待測(cè)溶液的本底吸收值。

1.4.8 對(duì)DPPH 自由基清除作用研究［10］

95%的甲醇溶解4 mg DPPH 并定容到100 mL。將1 mL 不同濃度的待測(cè)液與3 mL DPPH 溶液分別加入試管中，搖勻，室溫靜置20 min，以1 mL 不同濃度的待測(cè)液與3 mL 95%甲醇溶液作為空白，于517 nm 處測(cè)定吸光度Ai。以1 mL 95%甲醇與3 mL DPPH 溶液混合后溶液的吸光度Aj 為對(duì)照。

1.4.9 鐵離子螯合能力測(cè)定［11］

分別取1 mL 各種樣品溶液，加入0.1 mL 2 mmol/L 氯化亞鐵中，混勻后，加入0.2 mL 5 mmol/L Ferrozine，混勻，然后室溫下靜置20 min，最后加入3.7 mL 55%乙醇，于562 nm 處測(cè)定吸光度A1，不加樣品，以蒸餾水補(bǔ)足，同上操作處理，測(cè)定其對(duì)比吸光度A0;以55%乙醇作為空白對(duì)照，根據(jù)下面公式計(jì)算鐵離子鰲合能力:

鐵離子鰲合能力(%)=［(A0-A1)/A0］×100

2 結(jié)果與分析

2.1 活性物質(zhì)含量分析

2.1.1 粗多糖含量分析

對(duì)不同層孔菌屬真菌粗多糖含量進(jìn)行分析，結(jié)果表明(圖1)，H2 菌株粗多糖含量顯著高于其他菌株(P ＜0.05 或P ＜0.01);而H8、H6、H7、X、L、P 菌株的粗多糖含量次之(P ＜0.01 或P ＜0.05);H1、H4、H5、H3、H9、H10、H11、H12、S 菌株粗多糖含量較低(P ＜0.01)，且各菌株間沒(méi)達(dá)到顯著差異。

圖1 不同菌株粗多糖含量比較Fig.1 Comparison of polysaccharide content of different strains

2.1.2 黃酮含量分析

對(duì)不同菌株黃酮含量進(jìn)行分析，其結(jié)果如圖2所示，菌株S 的黃酮含量顯著高于其余菌株(P ＜0.01);菌株H2、H4、H8、P 黃酮含量次之;菌株H5、H6、H7、H9、H10、H11、H12、L、X 黃酮含量較低;而菌株H1、H3 的黃酮含量顯著低于其他菌株(P ＜0.01 或P ＜0.05)。

圖2 不同菌株黃酮含量比較Fig.2 Comparison of flavonoids content of different strains

2.1.3 總酚含量分析

對(duì)不同菌株總酚含量進(jìn)行比較，研究結(jié)果表明(圖3)，菌株H2 的總酚含量顯著高于其他菌株(P＜0.01 或P ＜0.05)，菌株H4、H7、H9、S、L 總酚含量次之，菌株H5、H6、H8、H10、H11、P 的總酚含量相當(dāng)，而菌株H1、H3、H12、X 的總酚含量較低，顯著低于其他菌株(P ＜0.01)，且之間未達(dá)到顯著差異。

圖3 不同菌株總酚含量比較Fig.3 Comparison of phenolic content of different strains

2.2 抗氧化能力測(cè)定

2.2.1 還原力研究

抗氧化劑是通過(guò)自身的還原作用給出電子而清除自由基，抗氧化劑的還原力與其抗氧化活性之間存在關(guān)系，還原力越強(qiáng)，抗氧化活性越強(qiáng)。具有還原能力的物質(zhì)作為電子供體，能夠還原脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中的中間氧化產(chǎn)物，從而具備抗氧化性能，因此物質(zhì)的還原能力可以看作其潛在的抗氧化性能的重要體現(xiàn)。由圖4 可知，不同菌株具有不同程度的的還原能力，但其還原力高低有顯著差異。菌株H2 還原能力最強(qiáng)(P ＜0.01);菌株H4、H7、H9、H10、L、P的還原能力相當(dāng)，未達(dá)到顯著差異(P ＞0.05)，還原能力僅次于H2;菌株H8、H11、X 還原能力再次之;菌株H3、H5、H6、H12、S 還原能力較低，僅高于H1(P ＜0.01);而菌株H1 還原能力顯著低于其余菌株(P ＜0.01)。

圖4 不同菌株間還原力比較Fig.4 Comparison of reducing power of different strains

2.2.2 羥自由基清除作用研究

羥自由基是對(duì)機(jī)體危害最大的自由基，會(huì)造成組織脂質(zhì)過(guò)氧化，蛋白質(zhì)解聚與聚合，核酸斷裂、多糖解聚，其反應(yīng)速度快，是已知化學(xué)性質(zhì)最活潑的活性氧自由基，羥自由基清除率是反應(yīng)藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)［12］。從圖5 可知，各菌株對(duì)羥自由基具有一定程度的抑制作用，其中菌株H2 和H9 對(duì)羥自由基清除作用最強(qiáng)(P ＜0.01)，兩者之間沒(méi)有顯著差異;菌株H10、H11、X、L、P 對(duì)羥自由基的清除作用次之;而菌株H1、H3、H6、H12、S 的清除作用低于其余菌株(P ＜0.01 或P ＜0.05)。

圖5 不同菌株間羥自由基清除能力比較Fig.5 Comparison of hydroxyl radical scavenging capacity of different strains

2.2.3 超氧自由基清除作用研究

由圖6 可知，供試菌株對(duì)超氧自由基均有不同程度的清除作用，菌株H2、H5、H8、H9 對(duì)超氧自由基清除作用最強(qiáng)(P ＜0.01)，且菌株間顯著性不明顯;接下來(lái)清除作用從高到低依次是菌株H4、P、L、H10、H1、H6、H3;菌株X、H7、S、H11 清除作用顯著低于以上菌株(P ＜0.01)，且菌株間沒(méi)有達(dá)到顯著差異;而菌株H12 的清除作用最低(P ＜0.01)。

圖6 不同菌株超氧自由基清除率比較Fig.6 Comparison of superoxide radical scavenging capacity of different strains

2.2.4 鐵離子螯合能力研究

對(duì)層孔菌屬真菌鐵離子螯合能力研究發(fā)現(xiàn)，不同菌株具有不同的鐵離子螯合能力(圖7)，菌株H2具有最高的鐵離子螯合能力(P ＜0.01)，隨后鐵離子螯合能力按照菌株L、H9、S、H8、H4、P、H7、H10、H6、H11、X、H5 依次遞減，而菌株H1、H3、H12 的螯合能力較低，在5%和1%水平均未達(dá)到顯著水平。

圖7 不同菌株鐵離子螯合能力比較Fig.7 Comparison of Fe chelating ability of different strains

圖8 不同菌株DPPH 自由基清除能力比較Fig.8 Comparison of DPPH radical scavenging capacity of different strains

2.2.5 DPPH 自由基清除作用研究

對(duì)層孔菌屬真菌DPPH 自由基清除能力進(jìn)行研究，研究結(jié)果表明(圖8)，H2、L 菌株的DPPH 自由基清除能力高于其余菌株(P ＜0.01 或P ＜0.05);菌株H4、P、H7、H9、H10 次之，但清除能力相差不大;隨后依次為菌株X、H8、H6、H5、H11;菌株S、H12、H3 清除作用較低，僅高于H1;而H1 清除能力顯著低于其余菌株(P ＜0.01)。

2.3 相關(guān)性分析

2.3.1 不同測(cè)定方法間的相關(guān)性

不同的體外評(píng)價(jià)抗氧化能力方法所得結(jié)果間，具有不同的統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。從表1 中可以看出，羥自由基與DPPH 自由基(R=0.831)、鐵離子螯合能力(R=0.845)及還原力(R=0.801)方法間達(dá)到了極顯著相關(guān)(P ＜0.01);DPPH 自由基與鐵離子螯合能力(R=0.913)和還原力(R=0.910)方法間達(dá)到了極顯著相關(guān)(P ＜0.01);鐵離子螯合能力與還原力方法間達(dá)到了極顯著相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.898(P＜0.01)。而超氧陰離子自由基與DPPH、羥自由基、鐵離子螯合能力及還原力方法間沒(méi)有顯著的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為0.389、0.531、0.436、0.354(P ＞0.05)。由此說(shuō)明，不同的體外評(píng)價(jià)抗氧化能力方法所得結(jié)果間，具有不同的統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性?，F(xiàn)有的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，不能用一種評(píng)價(jià)方法所得的結(jié)果來(lái)概況其他評(píng)價(jià)方法的結(jié)果，而應(yīng)盡量選擇多種抗氧化評(píng)價(jià)方法，較全面、客觀的評(píng)價(jià)被評(píng)價(jià)化合物的抗氧化能力。

表1 不同抗氧化方法間的相關(guān)性Table 1 Linear correlation coefficients among different methods for testing antioxidant capacity

2.3.2 樣品活性組分含量相關(guān)性研究

對(duì)活性物質(zhì)含量間相關(guān)性進(jìn)行分析，由表2 可知，粗多糖含量與總黃酮和總酚含量相關(guān)系數(shù)分別為0.533 和0.531(P ＞0.05);而總黃酮含量與總酚含量達(dá)到了顯著相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.777(P ＜0.05)。說(shuō)明層孔菌屬真菌這三種主要活性物質(zhì)含量間相關(guān)性不大，可以借鑒和參考，但是不同活性物質(zhì)含量還應(yīng)通過(guò)實(shí)際測(cè)量值為準(zhǔn)，不能由一種活性物質(zhì)含量來(lái)評(píng)價(jià)其他活性物質(zhì)含量。

表2 活性物質(zhì)含量間相關(guān)性Table 2 Correlation among active composition

注:* P ＜0.05。Note:* P ＜0.05.

2.3.3 抗氧化能力與抗氧化物質(zhì)含量的相關(guān)性

為了弄清層孔菌屬真菌的抗氧化能力與酚類物質(zhì)含量、黃酮類物質(zhì)含量及粗多糖含量的關(guān)系，根據(jù)前面對(duì)不同菌株的總酚、總黃酮、粗多糖的含量測(cè)定結(jié)果及不同方法測(cè)得的抗氧化能力結(jié)果作了相關(guān)性分析(表3)。由此可知，層孔菌屬真菌的總酚、總黃酮及粗多糖含量與不同方法測(cè)得的抗氧化能力大多呈顯著相關(guān)?？偡雍颗c對(duì)羥自由基、DPPH 自由基、鐵離子螯合能力及還原力方法測(cè)得的抗氧化能力間的相關(guān)系數(shù)分別達(dá)到了0.840、0.943、0.924、0.917(P ＜0.01);總黃酮含量與DPPH 自由基、鐵離子螯合能力及還原力方法測(cè)得的抗氧化能力間的相關(guān)系數(shù)分別達(dá)到了0.810(P ＜0.01)、0.725、0.738(P ＜0.05);粗多糖含量與鐵離子螯合能抗氧化能力間的相關(guān)系數(shù)為0.653(P ＜0.05)，由此說(shuō)明總酚與抗氧化能力有最高的相關(guān)性，充分證明多酚類物質(zhì)是抗氧化作用的重要因子，對(duì)抗氧化能力具有重要貢獻(xiàn)，除此之外，黃酮類物質(zhì)與各抗氧化測(cè)定方法間的相關(guān)系數(shù)次之，說(shuō)明也對(duì)抗氧化作用作出一定貢獻(xiàn)，而粗多糖與其相關(guān)系數(shù)較低，因此說(shuō)明，層孔菌屬的抗氧化能力貢獻(xiàn)主要來(lái)自總酚類和黃酮類物質(zhì)。

表3 抗氧化能力與抗氧化物質(zhì)含量的相關(guān)性Table 3 Linear correlation coefficients between antioxidant composition and antioxidant capacity

3 結(jié)論與討論

物質(zhì)抗氧化活性的評(píng)價(jià)方法包括很多種，目前還沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)方法?？寡趸芰y(cè)定方法之所以仍沒(méi)有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法，主要原因在于:(1)生物體中存在多個(gè)抗氧化系統(tǒng)，他們的工作原理及相互間的關(guān)系尚未搞清楚，所以單一的測(cè)定方法很難對(duì)抗氧化物質(zhì)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià);(2)生物體中存在多種自由基和抗氧化劑，他們各自都有不同的化學(xué)和物理特征。某一抗氧化劑在單一系統(tǒng)中可能會(huì)同時(shí)具有多重機(jī)制，或者在不同系統(tǒng)中表現(xiàn)出不同的機(jī)制。此外對(duì)于不同的自由基，抗氧化劑的清除機(jī)制也不相同;(3)現(xiàn)在采用的抗氧化方法大多為體外抗氧化測(cè)定，無(wú)法真實(shí)模擬生理環(huán)境，且各方法都僅僅測(cè)定了抗氧化能力中的某一方面，故無(wú)法模擬生理?xiàng)l件下的多條抗氧化途徑;(4)測(cè)定的樣品大多為混合物，其成分十分復(fù)雜，各抗氧化物質(zhì)的抗氧化作用無(wú)法用單一的機(jī)制來(lái)解釋。由于生物體內(nèi)自由基的種類、產(chǎn)生機(jī)理、產(chǎn)生部位及它所作用的靶點(diǎn)的不同，相對(duì)應(yīng)的抗氧化劑的抗氧化機(jī)理和能力就不同［13］。因此，通過(guò)體外抗氧化實(shí)驗(yàn)篩選抗氧化劑需要采用多種自由基，選擇多種抗氧化評(píng)價(jià)方法，尤其是基于不同抗氧化機(jī)制的評(píng)價(jià)方法，利用多系統(tǒng)、多方面來(lái)全面、客觀的評(píng)價(jià)待測(cè)物的總抗氧化能力。針對(duì)對(duì)不同層孔菌屬真菌不同抗氧化能力測(cè)定，研究結(jié)果表明，菌株H2 還原力、鐵離子螯合能力最強(qiáng)，菌株H2 和H9 的對(duì)羥自由基清除作用最強(qiáng)，菌株H2 和L DPPH 自由基清除作用最強(qiáng)，菌株H2、H5、H8、H9 對(duì)超氧自由基清除作用最強(qiáng)，綜合分析發(fā)現(xiàn)，菌株H2 具有較高的抗氧化能力，但其他菌株間在不同方法間存在較大差異。不同層孔菌屬真菌的抗氧化能力比較，不同方法間存在差異，各種方法測(cè)定的結(jié)果數(shù)值不一，表述方式不同，羥自由基與DPPH 自由基(R=0.831)、鐵離子螯合能力(R=0.845)及還原力(R=0.801)，DPPH 自由基與鐵離子螯合能力(R=0.913)和還原力(R=0.910)，以及鐵離子螯合能力與還原力(R=0.898)這幾種方法的相關(guān)性較高，測(cè)定結(jié)果較為一致。由此可見(jiàn)，不同的體外評(píng)價(jià)抗氧化能力方法所得結(jié)果間具有不同的統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性，不能用一種評(píng)價(jià)方法所得的結(jié)果來(lái)概況其他評(píng)價(jià)方法的結(jié)果，而應(yīng)盡量選擇多種抗氧化評(píng)價(jià)方法，較全面、客觀的評(píng)價(jià)被評(píng)價(jià)化合物的抗氧化能力。

對(duì)供試菌株的主要活性物質(zhì)多糖、總酚、總黃酮含量測(cè)定結(jié)果表明，層孔菌屬真菌含量較為豐富的多糖、總酚和黃酮類物質(zhì)，其中菌株H2 粗多糖和總酚含量最高，菌株S 黃酮含量最高。對(duì)活性物質(zhì)含量間相關(guān)性進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，總黃酮和總酚含量間有顯著相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.777(P ＜0.05)，粗多糖含量與總黃酮及總酚含量間相關(guān)性稍低，相關(guān)系數(shù)分別為0.533 和0.531(P ＞0.05);說(shuō)明層孔菌屬真菌這三種主要活性物質(zhì)含量間相關(guān)性不大，可以借鑒和參考，因此不同活性物質(zhì)含量還應(yīng)通過(guò)實(shí)際測(cè)量值為準(zhǔn)。

食用菌一直以其特有的食藥兼用性受到人們的青睞。近年來(lái)，食用菌的抗氧化作用開(kāi)始日益受到關(guān)注，但大多數(shù)研究集中在粗多糖、純化多糖或粗提物的抗氧化活性，而對(duì)食用菌中不同活性成分的抗氧化性能研究較少，尤其是對(duì)食用菌中發(fā)揮抗氧化性能起主要貢獻(xiàn)的功能成分缺乏定論［8］。本研究針對(duì)抗氧化能力與抗氧化物質(zhì)含量的相關(guān)性進(jìn)行分析，層孔菌屬真菌的總酚、總黃酮及粗多糖含量與不同方法測(cè)得的抗氧化能力大多呈顯著相關(guān)?？偡雍颗c羥自由基、DPPH 自由基、鐵離子螯合能力及還原力方法測(cè)得的抗氧化能力間的相關(guān)系數(shù)分別達(dá)到了0.840、0.943、0.924、0.917(P ＜0.01);總黃酮含量與DPPH 自由基、鐵離子螯合能力及還原力方法測(cè)得的抗氧化能力間的相關(guān)系數(shù)分別達(dá)到了0.810(P ＜0.01)、0.725、0.738(P ＜0.05);粗多糖含量與鐵離子螯合能力間的相關(guān)系數(shù)為0.653(P ＜0.05)，說(shuō)明總酚與抗氧化能力有最高的相關(guān)性，充分證明多酚類物質(zhì)是抗氧化作用的重要因子，對(duì)抗氧化能力具有重要貢獻(xiàn)，總黃酮類物質(zhì)與抗氧化能力相關(guān)性次之，說(shuō)明對(duì)抗氧化能力貢獻(xiàn)弱于總酚類物質(zhì)，而相比之下，粗多糖含量與抗氧化能力間相關(guān)系數(shù)較低，說(shuō)明粗多糖對(duì)抗氧化能力的影響較低。

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