譚欽剛 ，賴(lài)春華，張貴杰，陳毅飛，覃德績(jī)，王恒山

1桂林醫(yī)學(xué)院;2 廣西師范大學(xué)，桂林 541004

苦楝(Melia azedarach L.)為楝科(Meliaceae)楝屬(Melia)植物，其樹(shù)皮因良好的藥理活性曾收載于2010 年《中國(guó)藥典》一部［1］。研究表明，苦楝葉提取物能使糖尿病小鼠的血糖水平顯著下降且呈量效關(guān)系［2］，為了深入研究苦楝皮的化學(xué)成分及抗糖尿病活性，本實(shí)驗(yàn)對(duì)苦楝皮乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，共分離得到5 個(gè)三萜類(lèi)成分和3 個(gè)酚性化合物，并對(duì)分離得到的部分化合物進(jìn)行了體外抗糖尿病活性測(cè)試。研究結(jié)果表明，化合物1～3，6，7 為首次從該植物中分離得到。受試化合物2～5 均未表現(xiàn)出葡萄糖激酶(glucokinase，GK)、組蛋白去乙酰化酶(sirtuin1，SIRT1)體外激動(dòng)活性和二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV，DPPIV)抑制活性，其中化合物2 對(duì)人11β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶1(11βhydroxysteroid dehydrogenase 1，11β-HSD1)具有顯著的抑制作用，并對(duì)人11β-HSD2 有良好的選擇性。

1 儀器與材料

FAB-MS 用VG Auto Spec-3000，EI-MS 用VG ZAB-SH 質(zhì)譜儀(英國(guó)VG 公司);NMR 用Bruker AM-400 或DRX-500 核磁共振儀測(cè)定(德國(guó)Bruker公司，TMS 為內(nèi)標(biāo));酶標(biāo)儀(SpectraMax 190，美國(guó)Molecular Device 公司);PHS-3TC 型精密數(shù)顯pH 計(jì)(上海天達(dá)儀器有限公司);薄層層析檢測(cè)用UV-210 紫外分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)。

柱層析硅膠(200～300 目)，GF254薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn);Rp-18(40～65 μm)為德國(guó)Merck公司產(chǎn)品;Sephadex LH-20(40～70 μm)為瑞典Pharmacia 公司產(chǎn)品;分離純化用試劑為分析純，10%的硫酸-乙醇溶液(加熱)檢測(cè);陽(yáng)性對(duì)照物PSN-GK1、MK0431(FW:505)、白黎蘆醇(RSV)、甘草次酸購(gòu)自Sigma 公司，小鼠或人11β-HSD 基因購(gòu)自NIH Mammalian Gene Collection。

樣品購(gòu)自云南昆明，由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所曾春霞博士鑒定為苦楝(Melia azedarach L.)的皮。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取與分離

苦楝皮干燥品(10 kg)粉碎，用95%的乙醇加熱回流提取3 次，濾液減壓回收得提取物570 g，水分散后用乙酸乙酯萃取3 次，得乙酸乙酯萃取物260 g，上硅膠柱層析，用氯仿∶丙酮(1∶0～1∶1)系統(tǒng)梯度洗脫，得到七個(gè)組分(Fr.I -VII)。Fr.III 經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚-丙酮(6∶1～3∶1)洗脫，再經(jīng)甲醇結(jié)晶得化合物1(73.0 mg)，6(5.8 mg)。Fr.IV 經(jīng)Rp-18 柱層析，以甲醇-水(7 ∶3～10 ∶0)洗脫，以Sephadex LH-20(氯仿-甲醇=1∶1)過(guò)濾，甲醇結(jié)晶得化合物2(56.1 mg)，3(24.8 mg)，4(29.5 mg)。Fr.V 經(jīng)Rp-18 柱層析，以甲醇-水(5∶5～10∶0)洗脫，甲醇結(jié)晶得化合物5(383.2 mg)。Fr.VI 經(jīng)Rp-18 柱層析，以甲醇-水(4∶6～10∶0)洗脫，甲醇結(jié)晶得化合物7(5.0 mg)，丙酮結(jié)晶得化合物8(9.3 mg)。

2.2 體外抗糖尿病活性研究

糖尿病發(fā)病原因復(fù)雜，某些酶與其發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如GK 在糖尿病患者血糖平衡控制中有減少肝臟葡萄糖生成和促胰島素分泌的雙重作用［3］，SIRT1 激動(dòng)劑可改善肥胖糖尿病大鼠的胰島素敏感性［4］，DPPIV 的活性增高與糖尿病的發(fā)生存在相關(guān)性［5］，抑制11β-HSD 的活性可使糖尿病患者的代謝作用正常等［6］。

采用文獻(xiàn)［7］描述的酶偶聯(lián)分析法，測(cè)定化合物2-5 對(duì)GK 和SIRT1 的激動(dòng)活性;按文獻(xiàn)［8］方法構(gòu)建體外篩選模型并測(cè)定上述化合物抑制DPPIV 的活性;按文獻(xiàn)［9］方法，測(cè)定上述化合物對(duì)小鼠和人11β-HSD 的抑制作用。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 無(wú)色針狀結(jié)晶(MeOH)，mp.194～195 ℃;FAB-MS(negative):m/z 457［M-1］-;分子式C30H50O3;1H NMR(CDCl3，500 MHz)δ:5.10(1H，t，J=6.9 Hz，H-24)，3.56(1H，m，H-12)，1.66(3H，s，H-26)，1.61(3H，s，H-27)，1.15(3H，s)，1.06(3H，s)，1.02(3H，s)，1.00(3H，s)，0.96(3H，s)，0.87(3H，s);13C NMR(CDCl3，125 MHz)δ:39.7(t，C-1)，34.0(t，C-2)，217.9(s，C-3)，47.7(s，C-4)，55.2(d，C-5)，19.6(t，C-6)，34.0(t，C-7)，39.5(s，C-8)，49.3(d，C-9)，36.7(s，C-10)，30.9(t，C-11)，70.4(d，C-12)，48.6(d，C-13)，51.9(s，C-14)，31.5(t，C-15)，26.2(t，C-16)，49.9(d，C-17)，15.9(q，C-18)，15.3(q，C-19)，74.5(s，C-20)，21.7(q，C-21)，30.9(t，C-22)，21.9(t，C-23)，124.5(d，C-24)，132.0(s，C-25)，25.7(q，C-26)，17.8(q，C-27)，26.6(q，C-28)，20.9(q，C-29)，16.9(q，C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，故該化合物鑒定為12β，20(S)-dihydroxydammar-24-en-3-one。

化合物2 無(wú)色針狀結(jié)晶(MeOH)，mp.205～206 ℃;ESI-MS(negative):m/z 605 ［M-1］-;分子式C39H58O5;1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:9.58(1H，d，J=4.1 Hz，3'-OH)，9.15(1H，d，J=6.9 Hz，4'-OH)，7.43(1H，d，J=15.9 Hz，H-8')，7.02(1H，s，H-2')，6.98(1H，d，J=8.2 Hz，H-6')，6.73(1H，d，J=8.2 Hz，H-5')，6.22(1H，d，J=15.9 Hz，H-7')，5.05(1H，t，J=7.2 Hz，H-24)，4.47(1H，dd，J=10.6，4.1 Hz，H-3)，4.65(1H，d，J=11.8 Hz，H-1)，3.86(1H，s，20-OH)，1.60(3H，s，H-26)，1.51(3H，s，H-27)，1.00(3H，s)，0.91(3H，s)，0.87(3H，s)，0.84(3H，s)，0.83(3H，s)，0.81(3H，s);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:38.9(t，C-1)，24.3(t，C-2)，79.8(d，C-3)，38.1(s，C-4)，55.2(d，C-5)，17.8(t，C-6)，35.2(t，C-7)，39.9(s，C-8)，50.0(d，C-9)，36.6(s，C-10)，21.9(t，C-11)，24.9(t，C-12)，41.6(d，C-13)，49.9(s，C-14)，31.3(t，C-15)，27.3(t，C-16)，49.9(d，C-17)，16.4(q，C-18)，16.1(q，C-19)，73.0(s，C-20)，25.3(q，C-21)，41.3(t，C-22)，22.3(t，C-23)，125.3(d，C-24)，130.1(s，C-25)，25.6(q，C-26)，17.5(q，C-27)，27.8(q，C-28)，15.3(q，C-29)，16.6(q，C-30)，125.5(s，C-1')，114.4(d，C-2')，144.9(s，C-3')，148.4(s，C-4')，114.8(d，C-5')，121.3(d，C-6')，145.6(d，C-7')，115.7(d，C-8')，166.4(s，C-9')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道一致，故該化合物鑒定為dammarendiol II 3-O-caffeate。

化合物3 片狀結(jié)晶(MeOH)，mp.110～112℃;EI-MS:m/z 438［M］+;分子式C31H50O;1H NMR(CDCl3，500 MHz)δ:4.71(1H，br s，H-31)，4.65(1H，br s，H-31)，1.09(3H，s，H-30)，1.03(3H，s，H-29)，1.02(3H，d，J=6.5 Hz，H-27)，1.02(3H，d，J=6.5 Hz，H-26)，1.00(3H，s，H-18)，0.98(3H，s，H-28)，0.89(3H，d，J=6.0 Hz，H-21);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:33.4(t，C-1)，37.4(t，C-2)，216.5(s，C-3)，50.2(s，C-4)，48.4(d，C-5)，21.5(t，C-6)，28.1(t，C-7)，47.8(d，C-8)，21.0(s，C-9)，25.9(s，C-10)，25.8(t，C-11)，35.5(t，C-12)，45.3(s，C-13)，48.7(s，C-14)，32.7(t，C-15)，26.7(t，C-16)，52.2(d，C-17)，18.3(q，C-18)，29.5(q，C-19)，36.1(d，C-20)，18.0(q，C-21)，34.9(t，C-22)，31.2(t，C-23)，156.7(s，C-24)，33.7(d，C-25)，21.9(q，C-26)，21.8(q，C-27)，19.3(q，C-28)，22.1(q，C-29)，20.7(q，C-30)，105.9(t，C-31)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，故該化合物鑒定為24-methylenecycloartenone。

化合物4 無(wú)色粉末，F(xiàn)AB-MS(negative):m/z 709［M-1］-;分子式C41H58O10;1H NMR(CDCl3，500 MHz)δ:8.04(2H，d，J=7.7 Hz，H-3' and H-7')，7.52(1H，m，H-5')，7.38(2H，t，J=7.5 Hz，H-2'and H-6')，5.30(1H，br.d，J=2.1 Hz，H-15)，5.13(1H，br.s，H-7)，4.83(1H，s，H-3)，4.65(1H，d，J=11.8 Hz，H-1)，3.92(br.s，W1/2，J=3.5 Hz)，3.54(1H，m，H-21)，2.12(3H，s，COCH3)，1.60(3H，s，COCH3)，1.35(3H，s，H-27)，1.24(3H，s，H-26)，1.08(3H，s，H-30)，1.06(3H，s，H-29)，0.96(3H，s，H-18)，0.95(3H，s，H-19)，0.86(3H，s，H-28);13C NMR(CDCl3，125 MHz)δ:72.6(d，C-1)，25.3(t，C-2)，77.0(d，C-3)，36.4(s，C-4)，37.3(d，C-5)，23.0(t，C-6)，75.4(d，C-7)，41.9(s，C-8)，35.2(d，C-9)，40.1(s，C-10)，16.0(t，C-11)，34.6(t，C-12)，46.3(s，C-13)，158.8(s，C-14)，119.2(d，C-15)，33.7(t，C-16)，56.8(d，C-17)，19.9(q，C-18)，16.1(q，C-19)，29.7(d，C-20)，65.2(t，C-21)，32.6(t，C-22)，67.4(d，C-23)，96.5(s，C-24)，76.3(s，C-25)，23.1(q，C-26)，24.1(q，C-27)，27.9(q，C-28)，21.3(q，C-29)，26.7(q，C-30)，165.2(s，C-1')，130.5(s，C-2')，129.4(d，C-3')，128.2(d，C-4')，132.9(d，C-5')，128.2(d，C-6')，129.4(d，C-7')，169.7，170.1(s，COCH3)，20.9，21.3(q，COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道一致，故該化合物鑒定為meliavolin。

化合物5 無(wú)色針狀結(jié)晶(MeOH)，mp.215～217 ℃;FAB-MS(positive):m/z 733［M +1］+;分子式C37H48O15;1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:6.91(1H，dd，J=13.7，6.3 Hz，H-3')，6.40(1H，d，J=3.0 Hz，H-23)，5.65(1H，s，H-21)，5.38(1H，d，J=2.9 Hz，H-22)，4.89(1H，s，H-3)，4.75(1H，s，H-1)，4.23(1H，d，J=2.3 Hz，H-7)，4.14 and 3.84(2H，d，J=9.1 Hz，H-19)，4.11(1H，s，H-15)，3.93(1H，dd，J=12.9，2.7 Hz，H-6)，3.68(3H，s，12-OMe)，3.54 and 3.46(2H，d，J=2.5 Hz，H-28)，3.34(3H，s，11-OMe)，3.03(1H，d，J=12.8 Hz，H-5)，2.91(1H，d，J=4.5 Hz，H-17)，2.10(3H，s，OCOCH3)，1.92(3H，s，OCOCH3)，1.48(3H，s，H-30)，1.34(3H，s，H-18)，0.98(3H，s，H-29);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:70.1(d，C-1)，28.1(t，C-2)，70.7(d，C-3)，42.2(s，C-4)，34.9(d，C-5)，71.7(d，C-6)，82.9(d，C-7)，51.9(s，C-8)，48.1(d，C-9)，49.8(s，C-10)，106.6(s，C-11)，169.0(s，C-12)，93.5(s，C-13)，92.8(s，C-14)，81.9(d，C-15)，28.8(t，C-16)，48.1(d，C-17)，25.8(q，C-18)，70.5(t，C-19)，91.7(s，C-20)，105.8(d，C-21)，105.4(d，C-22)，146.7(d，C-23)，76.0(t，C-28)，18.1(q，C-29)，18.0(q，C-30)，166.6(s，C-1')，128.2(s，C-2')，138.1(d，C-3')，14.3(q，C-4')，12.0(q，C-5')，170.2，171.4(s，COCH3)，20.9，21.4(q，COCH3)，52.3(q，C11-OCH3)，53.1(q，C12-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道一致，故該化合物鑒定為3，20-diacetyl-11-methoxy-1-tigloylmeliacarpinin。

化合物6 無(wú)色針狀結(jié)晶(MeOH)，mp.145～147 ℃;EI-MS:m/z 210［M］+，分子式C10H10O5;1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:12.89，(1H，s，4-OH)，12.42(1H，s，2-OH)，10.34(1H，s，CHO)，6.29(1H，s，H-5)，3.96(3H，s，OCH3)，2.53(3H，s，CH3);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:193.9(s，CHO)，172.0(s，C-1')，168.3(s，C-4)，166.6(s，C-2)，152.3(s，C-6)，112.1(d，C-5)，108.4(s，C-3)，103.8(s，C-1)，52.3(q，OCH3)，25.2(CH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報(bào)道一致，故該化合物鑒定為methyl 3-formyl-2，4-dihydroxy-6-methyl benzoate。

化合物7 淺黃色針狀結(jié)晶(MeOH)，mp.203～204 ℃;FAB-MS(negative):m/z 343［M-1］-;分子式為C18H16O7;1H NMR(CDCl3，500 MHz)δ:13.3(1H，s，7-OH)，11.0(1H，s，3-OH)，5.98(1H，s，H-4)，2.68(3H，s，H-14)，2.66(3H，s，H-12)，2.11(3H，s，H-15)，1.76(3H，s，H-10);13C NMR(CDCl3，125 MHz)δ:201.8(s，C-1)，103.9(s，C-2)，191.7(s，C-3)，98.3(d，C-4)，101.5(s，C-6)，163.9(s，C-7)，109.3(s，C-8)，157.5(s，C-9)，32.1(q，C-10)，198.0(s，C-11)，27.9(q，C-12)，200.4(s，C-13)，31.3(q，C-14)，7.6(q，C-15)，179.4(s，C-4a)，155.2(s，C-6a)，105.2(s，C-9a)，59.1(s，C-9b)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16，17］報(bào)道一致，故該化合物鑒定為usnic acid。

化合物8 淺黃色針狀結(jié)晶(丙酮)，mp.241～243 ℃;FAB-MS(negative):m/z 289［M-1］-;分子式為C15H14O6;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:6.82，(1H，d，J=1.5 Hz，H-2')，6.75(1H，d，J=8.1 Hz，H-5')，6.70(1H，dd，J=8.1，1.6Hz，H-6')，5.91(1H，d，J=2.2 Hz，H-6)，5.84(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，4.55(1H，d，J=7.5 Hz，H-2)，3.96(1H，dd，J=13.8，7.7 Hz，H-3)，2.83(1H，dd，J=116.1，5.4 Hz，H-3)，2.48(1H，dd，J=16.1，8.1 Hz，H-3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:82.8(d，C-2)，68.8(d，C-3)，28.5(t，C-4)，100.8(s，C-4a)，157.8(s，C-5)，96.3(d，C-6)，157.6(s，C-7)，95.5(d，C-8)，156.9(s，C-8a)，132.2(s，C-1')，115.2(d，C-2')，146.2(s，C-3' and C-4')，116.1(d，C-5')，120.2(d，C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18，19］報(bào)道一致，故該化合物鑒定為epi-catechin。

3.2 化合物2～5 抗糖尿病活性

3.2.1 GK 體外活性篩選

化合物2～5 對(duì)人GK 激動(dòng)作用篩選實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果表明，1 μmol/L 的陽(yáng)性對(duì)照PSN-GK1 可使GK 活性增加至溶劑對(duì)照組的2.63 倍，而化合物2～5 在濃度為10 μmol/L 時(shí)，僅使其活性增加至對(duì)照組的0.79～1.11 倍，因此，受試化合物無(wú)明顯的GK 激動(dòng)活性。

3.2.2 化合物對(duì)人SIRT1 激動(dòng)劑體外活性篩選

上述化合物對(duì)人SIRT1 的激動(dòng)作用篩選試驗(yàn)重復(fù)2 次，結(jié)果表明，200 μmol/L 的陽(yáng)性對(duì)照RSV 可使SIRT1 活性增加至溶劑對(duì)照組的10.51 倍，而上述化合物在相同濃度時(shí)，僅使其活性增加至對(duì)照組的0.82～1.00 倍，因此，受試化合物均不具有顯著的SIRT1 激動(dòng)活性。

3.2.3 化合物體外抑制DPPIV 活性篩選

測(cè)定上述化合物對(duì)DPPIV 的抑制作用，結(jié)果表明，0.1 μmol/L 的陽(yáng)性對(duì)照MK0431 有很強(qiáng)的抑制作用，其比活力值為25.2%;受試化合物濃度為10 μmol/L 時(shí)，其比活力值為97.67～103.96%，表明上述化合物對(duì)DPPIV 均無(wú)激動(dòng)活性。

3.2.4 化合物體外抑制11β-HSD 活性篩選

測(cè)定上述化合物對(duì)11β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶(11β-HSD)的抑制活性，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 化合物對(duì)小鼠和人抑制11β-HSD1 型酶抑制率Table 1 Inhibitory activity of compounds 2-5 against 11β-HSD1

由表1 可知，化合物2 對(duì)人11β-HSD1 有明顯的抑制作用，進(jìn)一步測(cè)定該化合物對(duì)11β-HSD1 抑制作用的IC50值和對(duì)人11β-HSD2 的抑制率，結(jié)果見(jiàn)表2。

經(jīng)測(cè)定，化合物2 對(duì)人11β-HSD1 的IC50為94.15 nmol/L。從表2 可知，該化合物對(duì)人11β-HSD1 具有顯著的抑制作用，當(dāng)其劑量為1 mmol/L時(shí)對(duì)人11β-HSD2 的抑制率低于50%，提示該化合物對(duì)人11β-HSD2 有良好的選擇性。

表2 化合物2 對(duì)人11β-HSD1 和11β-HSD2 的抑制率(X ± SD，n=2)Table 2 The inhibition activity of compounds 2 against human 11β-HSD1 and 11β-HSD2(X ± SD，n=2)

致謝:本實(shí)驗(yàn)體外抗糖尿病活性測(cè)試由中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所內(nèi)分泌組完成。

1 Chinese Pharmacopoeia Commission(國(guó)家藥典委員會(huì)).Pharmacopoeia of the People’s Republic of China(中華人民共和國(guó)藥典).Beijing:China Medical Science and Technology Press，2010.Vol I，141.

2 Vijayanand S，Wesely EG.Evaluation of antidiabetic activity of Melia azadirach on alloxan induced diabetic rats.Int J Curr Pharm Res，2011，3:37-40.

3 Wang JH(汪建輝)，Ou Y(歐瑜).Glucokinase and diabetes.Pharm Biotechnol(藥物生物技術(shù))，2012，19:552-556.

4 Milne JC，Lambert PD，Schenk S，et al.Small molecule activatiors of SIRT1 as therapeutics for the treatment of type 2 diabetes.Nature，2007，450:712-716.

5 Li WB(李文斌)，Cui MY(崔美玉)，Xu DM(許冬梅)，et al.Correlation of dipeptidyl peptidase IV enzyme activity with diabetic nephropathy.J Shangdong Univ，Health Sci(山東大學(xué)學(xué)報(bào)，醫(yī)學(xué)版)，2010，48:12-14.

6 Morton NM，Holmes MC，F(xiàn)iévet C，et al.Improved lipid and lipoprotein profile，hepatic insulin sensitivity，and glucose tolerance in 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 null mice.J Biol Chem，2001，276:41293-41300.

7 Wu CF(吳酬飛).Establishment of a hypoglycemic agents screening method based on human pancreatic glucokinase.Nanchang:Nanchang University(南昌大學(xué))，MSc.2009.

8 Jiang HX(江慧賢)，Luo C(羅超)，Lu JX(盧鈞雄)，et al.Construction of screening model for dipeptidyl peptidase IV in vitro and active inhibitory estimation of related compounds.China J Exp Tradit Med Formulae(中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志)，2012，18:210-214.

9 Daniela S，Evelyne MM，Christian L，et al.The discovery of new 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 inhibitors by common feature pharmacophore modeling and virtual screening.J Med Chem，2006，49:3454-3466.

10 Zhao CC(趙春超)，Wang JH(王金輝)，Li W(李文)，et al.Studies on the chemical constituents of fructus Ailanthi altissimae.Chin J Med Chem(中國(guó)藥物化學(xué)雜志)，2003，13:211-214.

11 Fuchino H，Satoh T，Tanaka N.Chemical evaluation of Betula species in Japan.I.Constituents of Betula ermanii.Chem Pharm Bull，1995，43:1937-1942.

12 Jayasinghe ULB，Vithana HSK，Wannigama GP，et al.24-Methylenecycloartenone from Bhesa nitidissima.Fitoterapia.2001，72:594-595.

13 Zeng L，Gu ZM，F(xiàn)ang XP，et al.Two new bioactive triterpenoids from Melia volkensii(Meliaceae).Tetrahedron，1995，51:2477-2488.

14 Takeya K，Qiao ZS，Hirobe C，et al.Cytotoxic azadirachtintype limonoids from Melia azedarach.Phytochemistry，1996，42:709-712.

15 Kouam SF，Ngadjui BT，Krohn K，et al.Prenylated anthronoid antioxidants from the stem bark of Harungana madagascariensis.Phytochemistry，2005，66:1174-1179.

16 Bazin MA，Lamer ACL，Delcros JG，et al.Synthesis and cytotoxic activities of usnic acid derivatives.Bioorg Med Chem，2008，16:6860-6866.

17 Behrens U，Hencken G，Kopf J.Usnic acid，C18H16O7.Cryst Struct Commun，1976，5:51-56.

18 Waterman PG，F(xiàn)aulkner DF.(-)-Epiafzelechin from the root bark of Cassia sieberiana.Planta Med，1979，37:178-179.

19 Hwang BY，Kim HS，Lee JH，et al.Antioxidant benzoylated flavan-3-ol glycoside from Celastrus orbiculatus.J Nat Prod，2001，64:82-84.