摘要：探討酒精性肝纖維化大鼠肝組織堿性成纖維生長(zhǎng)因子（basic Fibroblast Growth Factor， bFGF） mRNA的表達(dá)和變化，以及三七皂苷R1對(duì)肝酒精性損傷的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)bFGF參與了酒精性肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展過程，且損傷時(shí)間越長(zhǎng)，表達(dá)越高。三七皂苷R1可降低肝組織中bFGF的表達(dá)，從而減輕肝細(xì)胞的纖維化，從而發(fā)揮保護(hù)酒精性肝組織損傷的作用。

關(guān)鍵詞：三七皂苷R1；肝纖維化；大鼠；堿性成纖維生長(zhǎng)因子

1資料與方法

1.1所需的試劑 RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit、PCR Master Mix Kit（貨號(hào)：K1621，F(xiàn)ermentas 公司）；DNA Marker、DNA上樣緩沖液；TRIZOL（Molecular Reseach Center）；bFGF SENCE 5'- AGTTTGCTACATAT

ACTCTGCT-3'，ANTI-SENCE 5'-TGGATACTCTTTCCCATGCGA-3'，PCR產(chǎn)物489bp；β-actin SENCE 5'-GTCCGTAAGATCAACCTACA-3'，ANTI-SENCE 5'-CCCCGCATTTCGATGTGCT-3' ，PCR產(chǎn)物大小為391bp；均由大連寶生物公司合成。

1.2 動(dòng)物及其分組 72只健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，購自昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物科，重180g～220g，隨機(jī)分為對(duì)照組（A組）、酒精組（B組）和三七皂苷R1組（C組），再按不同時(shí)間點(diǎn)分為1、2、4w 3個(gè)亞組，每個(gè)亞組8只動(dòng)物。定時(shí)給予飼料和水，所有大鼠均在同樣的條件下飼養(yǎng)，盡量降低誤差。B采用乙醇灌胃制作大鼠酒精性肝纖維化模型，C組同時(shí)靜脈注射三七皂苷R1，劑量為100 mg/kg，A組灌服等量的生理鹽水。

1.3動(dòng)物模型的制備及取材 制備\"乙醇-橄欖油-吡唑\"混懸液（60%酒精8 ml/kg·d、橄欖油2ml/kg·d、吡唑25 mg/kg·d），CCL4橄欖油注射液（CCL4：橄欖油=1：3）。對(duì)大鼠進(jìn)行混懸液灌胃，并間斷飼高脂飼料，結(jié)合微量CCL4腹腔注射的復(fù)合模式造酒精性肝纖維化病理模型[1]。對(duì)照組：普通喂養(yǎng)，生理鹽水灌胃10ml/kg·d×12w。第2w起予以0.3 ml/kg劑量的生理鹽水腹腔注射，2次/w，至第8w末結(jié)束。酒精組采用酒精混懸液灌胃，第1w 6ml/kg·d，第2w 8 ml/kg·d，第3w 10 ml/kg·d，以后維持此量，直至造模8w末結(jié)束。另外第2w起按0.3ml/kg·d，劑量腹腔注射微量CCL4橄欖油溶液，2次/w，至第8w結(jié)束。

1.4 RT-PCR擴(kuò)增目的基因 按RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit試劑說明書合成cDNA，RNA樣品均取3μg。向0.2 ml PCR管中順序加入2×PCR Master Mix 10μl，water nucle-free 8μl，上游引物0.3μl，下游引物 0.3μl，模板1μl。PCR反應(yīng)條件：94℃ 15 min；94℃ 45 s，退火1 min，72℃ 45s，35個(gè)循環(huán)；72℃ 15 min。1%瓊脂糖凝膠中電泳鑒定PCR產(chǎn)物。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.5統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較用兩獨(dú)立樣本之間t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較有單因素方差分析。P<0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

各組中各時(shí)間點(diǎn)均有β-actin及bFGF mRNA的表達(dá)，得到的目的基因片段為特異性擴(kuò)增條帶，與預(yù)期的片段長(zhǎng)度一致，見圖1。

2結(jié)果

對(duì)照組中各時(shí)間點(diǎn)比較bFGF mRNA均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。酒精組中隨著損傷時(shí)間的延長(zhǎng)，bFGF mRNA的表達(dá)逐漸上調(diào)（P<0.05），各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。bFGF mRNA在三七皂苷R1組各時(shí)間點(diǎn)均較酒精組表達(dá)下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三七皂苷R1可降低肝組織中的bFGF的含量，說明三七皂苷R1可以起到治療肝病及防治肝纖維化有明顯效果。本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)三七皂苷R1對(duì)肝纖維化大鼠肝組織中bFGF的含量進(jìn)行了初步研究，表明bFGF可能是三七抗肝纖維化的因子之一。

參考文獻(xiàn)：

[1]何汶忠.復(fù)方丹參注射液治療肝纖維化之臨床分析[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2011，5（13）：83-84.

編輯/申磊