摘 要：微生物實驗室培養(yǎng)是進行微生物研究和利用的基礎(chǔ)，其基本操作技術(shù)是學(xué)生必備的技能之一。通過實驗使學(xué)生能更好地掌握無菌接種技術(shù)及純化培養(yǎng)等知識，具有極為重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。本文在此重點探討微生物實驗室純培養(yǎng)實驗教學(xué)設(shè)計。

關(guān)鍵詞：微生物培養(yǎng) 教學(xué)目標(biāo) 實施設(shè)計

微生物實驗室純培養(yǎng)在生物技術(shù)中是一個重要的操作實驗，課題涉及內(nèi)容多、范圍廣，實驗難度很大。為了使學(xué)生更好地了解實驗中的許多工作，包括儀器使用、菌液稀釋、菌株移植、接種等，都要在無菌的或不被污染的條件下進行，才能保證做到純粹培養(yǎng)成功，筆者結(jié)合教學(xué)實際談?wù)剬Ρ菊n題的教學(xué)設(shè)計。

一、教學(xué)目標(biāo)確立

依據(jù)課程內(nèi)容要求，確立本課題教學(xué)目標(biāo)見表1。

表1

二、教學(xué)實施設(shè)計

1.制訂實驗計劃

依據(jù)課程內(nèi)容要求，確立本課題教學(xué)安排見表2。

表2

2.純化大腸桿菌的原理

微生物的純培養(yǎng)，選用平板劃線法或稀釋涂布平板法，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上操作，經(jīng)培養(yǎng)后可分離得到單個細胞繁殖而來的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，即菌落。

3.準(zhǔn)備實驗材料

本課題所用材料、儀器及藥品見表3。

表3

實驗材料大腸桿菌配制系列稀釋菌液

實驗儀器和設(shè)備培養(yǎng)皿、試管、酒精燈、試管架、移液管、膠頭滴管、接種環(huán)、涂布器、恒溫箱、無脂棉、玻璃棒、消毒棉球、超凈工作臺培養(yǎng)皿、試管、移液管、接種環(huán)、涂布器等滅菌（已滅菌備用）

實驗藥品牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基200ml、無菌水150ml提前配制（滅菌備用）

4.實驗操作

（1）指導(dǎo)實驗操作。本課題實驗可按照下面實驗流程進行操作：

超凈工作臺倒平板、接種培養(yǎng)箱純化培養(yǎng)。

（2）接種法。一般是無菌培養(yǎng)基在水浴鍋加熱融化后冷卻至50℃左右倒平板。操作必須始終在酒精燈火焰旁進行，每皿倒入15ml左右并且不要將皿蓋完全打開，冷卻后的平板要倒置。

平板劃線法（圖1）：即用接種環(huán)將菌體沾在平板培養(yǎng)基上。微生物細胞隨畫線次數(shù)的增多而減少，將微生物單個地分離，并最終形成標(biāo)準(zhǔn)的菌落。在畫線操作時應(yīng)注意：一是用接種環(huán)取菌種之前、每次畫線之前和畫線結(jié)束都要進行灼燒滅菌，灼燒后要在酒精燈附近冷卻后再操作；二是畫線時不要劃破培養(yǎng)基，如果采用分段畫線法操作從第二次操作應(yīng)總在上一次畫線末端開始，首尾區(qū)不能相連；三是操作必須始終在酒精燈火焰旁進行。

稀釋涂布平板法（圖2）：即先將菌液用無菌水進行一系列梯度為（如10-1，10-2，10-3）稀釋液，用無菌玻璃涂棒將不同稀釋度的菌液均勻地涂布在平板上。聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。在涂布操作時應(yīng)注意：一是配制系列梯度稀釋液必須用無菌水配制；二是配制系列梯度稀釋液和轉(zhuǎn)移菌液以及涂布過程等必須都在酒精燈火焰旁進行。

（3）培養(yǎng)操作。 將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基（空白）放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)18～24h后，觀察并記錄。這期間安排學(xué)生代表或?qū)嶒炐〗M長進行定期觀察，并做好記錄，以便及時讓其他學(xué)生觀察到自己的實驗成果。

三、問題討論

引導(dǎo)學(xué)生理解在微生物的培養(yǎng)中應(yīng)保持培養(yǎng)物純凈的關(guān)鍵性。讓學(xué)生在體驗實驗操作中，體會無菌操作在實驗中的重要性。讓學(xué)生認識要在理解實驗原理的前提下再進行操作實驗的必要性。讓學(xué)生觀察、展示實驗成就，分析實驗結(jié)果，并指導(dǎo)學(xué)生回顧實驗中的成敗原因，進行討論總結(jié)。

（作者單位：海南省技師學(xué)院生物制藥工程系）