摘要：以微型月季（Rosa chinensis minima）單芽莖段為外植體，考察不同濃度噻重氮苯基脲（TDZ）對(duì)不定芽生長的影響。結(jié)果表明，低濃度的TDZ可以促進(jìn)月季不定芽的生長，但TDZ濃度過高會(huì)導(dǎo)致月季不定芽呈現(xiàn)矮化現(xiàn)象，節(jié)間縮短，培養(yǎng)基中添加0.6 mg/L TDZ時(shí)月季不定芽的高度最大。

關(guān)鍵詞：微型月季（Rosa chinensis minima）；噻重氮苯基脲（TDZ）；不定芽

中圖分類號(hào)：S685.12；S339.4+1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）13-3178-02

微型月季（Rosa chinensis minima）系薔薇科薔薇屬常綠灌木。其植株小巧玲瓏，花期不斷，是一種流行的微型花卉種質(zhì)資源[1]。隨著其市場需求的不斷擴(kuò)大，對(duì)其組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行研究和改進(jìn)已成為熱點(diǎn)[2]。噻重氮苯基脲（Thidiazuron，TDZ）是苯基脲衍生物的一種，作為一種有效的生長調(diào)節(jié)劑被應(yīng)用于多種植物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)中[3，4]。許多研究表明TDZ可以誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)[5]及愈傷組織形成[6]、直接誘導(dǎo)葉片不定芽的形成[7]、延遲葉片黃化[8]及鮮花凋亡[9]、延緩馬鈴薯早疫病[10]、提高遺傳轉(zhuǎn)化效率[11]。本研究采用含不同濃度TDZ的培養(yǎng)基誘導(dǎo)微型月季不定芽，探究在微型月季不定芽生長過程中TDZ濃度對(duì)其不定芽高度和節(jié)間長度的影響，為微型月季組織培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)化提供參考。

1 材料與方法

1.1 植物材料

吉林師范大學(xué)植物分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室培育的微型月季盆栽，株高約35 cm，花色粉紅。

1.2 外植體消毒

剪取微型月季當(dāng)年生健壯枝條，以軟毛刷清除其表面灰塵，置于盛有清水的燒杯中，加少量洗潔精浸泡10 min，期間不斷搖動(dòng)燒杯，流水沖洗1 h，Cl2滅菌（1 mL濃HCl與25 mL NaClO反應(yīng)生成）20 min。超凈工作臺(tái)中無菌蒸餾水浸泡清洗3次，無菌濾紙吸干。

1.3 不定芽的誘導(dǎo)

剪取長1.5 cm左右的單芽莖段，形態(tài)學(xué)下端接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，含蔗糖30 g/L、瓊脂7 g/L，pH 5.83～5.85，121 ℃高壓滅菌20 min。添加不同濃度的TDZ、6-BA和NAA，培養(yǎng)基中具體激素濃度組合見表1。每處理均設(shè)3次重復(fù)，接種后培養(yǎng)條件為25 ℃、光照度2 000 lx、光照時(shí)間16 h/d，30 d后觀察不定芽的誘導(dǎo)情況，測量不定芽高度及節(jié)間長度，利用SAS 8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 生根培養(yǎng)

將生長狀況良好的不定芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基（MS+0.3 g/L活性炭）中，30 d后觀察并統(tǒng)計(jì)生根率。

2 結(jié)果與分析

2.1 激素濃度組合對(duì)微型月季不定芽誘導(dǎo)的影響

微型月季單芽莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基30 d后，7種培養(yǎng)基中均誘導(dǎo)出不定芽，但不定芽高度及節(jié)間長度均存在明顯差異（表1，圖1）。由表1和圖1可以看出，培養(yǎng)基中TDZ濃度由0.2 mg/L升高到0.6 mg/L，不定芽高度和節(jié)間長度均有所增加，而TDZ濃度由0.6 mg/L升高到2.0 mg/L，不定芽高度和節(jié)間長度又逐漸下降，出現(xiàn)矮化現(xiàn)象。各處理中培養(yǎng)基2（0.6 mg/L TDZ）的不定芽高度最大（圖1B），1.0 mg/L TDZ與0.1 mg/L NAA配合施用（培養(yǎng)基6）可以有效緩解TDZ濃度過高引起的矮化現(xiàn)象（圖1E），而2.0 mg/L 6-BA單獨(dú)施用時(shí)（圖1F）不定芽高度和節(jié)間長度與培養(yǎng)基2（0.6 mg/L TDZ）及培養(yǎng)基6（1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA）沒有顯著差異（P>0.05）。

2.2 生根培養(yǎng)

微型月季不定芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基30 d后試管苗生根率為90.48%。

3 小結(jié)與討論

在微型月季莖段離體再生體系中，較低濃度的TDZ可促進(jìn)不定芽長高，但TDZ濃度過高會(huì)導(dǎo)致不定芽節(jié)間明顯縮短，出現(xiàn)矮化現(xiàn)象，這與Debnath對(duì)越橘的研究結(jié)果類似[12]。在1.0 mg/L TDZ的基礎(chǔ)上添加0.1 mg/L NAA也能起到促進(jìn)節(jié)間伸長的效果，說明TDZ與NAA在微型月季不定芽生長的過程中可能起拮抗作用。不定芽在含2.0 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基中生長狀況也較好，不定芽高度和節(jié)間長度與含0.6 mg/L TDZ的培養(yǎng)基中相似，但不定芽長勢較差，可見TDZ對(duì)不定芽生長的促進(jìn)效果優(yōu)于6-BA。這與之前的研究結(jié)果一致[13-16]，可見TDZ具有更強(qiáng)的細(xì)胞分裂活性。

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