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        玫瑰花瓣總黃酮和總多糖的體外抗氧化活性

        2013-12-23 05:51:26帕爾哈提柔孜阿依姑麗艾合麥提何文婷
        食品科學(xué) 2013年11期
        關(guān)鍵詞:過氧化玫瑰花脂質(zhì)

        帕爾哈提·柔孜,阿依姑麗·艾合麥提*,朱 昆,劉 璐,胡 月,何文婷

        (新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院,新疆 烏魯木齊 830052)

        自由基與許多病理生理現(xiàn)象都有密切的關(guān)系,如衰老、腫瘤、炎癥、突變、心腦缺血、動(dòng)脈粥樣硬化、帕金森病等[1-3]??寡趸瘎┑目寡趸饔每梢酝ㄟ^抑制自由基的產(chǎn)生,或直接清除自由基,甚至可以通過提高內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)的水平來實(shí)現(xiàn)。因而體內(nèi)維持一定水平的抗氧化劑,可延長(zhǎng)壽命和推遲衰老。外加一些抗氧化劑協(xié)助體內(nèi)維持氧代謝的平衡,對(duì)于防止疾病的發(fā)生和保持機(jī)體的健康是十分有益的。因此從天然產(chǎn)物中尋找高效、價(jià)廉、低毒具有抗氧化、清除自由基功能的化合物的研究工作就變得十分重要[4-5]。

        和田玫瑰又名粉玫瑰,由于和田特殊的地理氣候環(huán)境,使得和田玫瑰花瓣期長(zhǎng),花瓣朵大出油率高,是不可多得的優(yōu)良品種。和田玫瑰具滋補(bǔ)腸胃、改善消化、芳香開竅、安神止痛、軟腸通便、潤膚生輝等[6]多種效果。維吾爾民間常將玫瑰花醬用于胸脅胃脘脹痛以及消化不良、月經(jīng)不調(diào)等癥,玫瑰花瓣常用于泡茶,進(jìn)行全身玫瑰浴。目前,對(duì)和田玫瑰的研究主要限于玫瑰紅色素的提取[7]、玫瑰花醬[8]和玫瑰花茶的制作及應(yīng)用上,對(duì)和田玫瑰花瓣的化學(xué)成分以及營養(yǎng)成分與抗氧化方面的研究在國內(nèi)少見報(bào)到。本實(shí)驗(yàn)通過提取玫瑰花瓣中的總黃酮類和總多糖成分,研究其體外的抗氧化活性,以期為和田玫瑰的綜合開發(fā)利用提供依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料、試劑與儀器

        玫瑰花瓣2011年6月采自于新疆和田地區(qū)墨玉縣,憑證標(biāo)本存于新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)院生藥實(shí)驗(yàn)室。

        雄性昆明系小鼠,體質(zhì)量(20±2)g,購自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

        1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) 美國Sigma公司;蘆丁 中國藥品生物制品檢定所提供;葡萄糖、硫代巴比妥酸(TBA)、三氯乙酸(TCA)、抗壞血酸、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、硫酸亞鐵、雙氧水、鄰苯三酚、乙醇、三氯化鋁、濃硫酸、水楊酸、苯酚均為國產(chǎn)分析純。

        UV-2450型紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司;HH-4恒溫水浴鍋 常州國華電器有限公司;BT 25S型電子天平 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;精密pH儀 上海精科雷磁儀器廠;RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠。

        1.2 方法

        1.2.1 玫瑰花瓣總黃酮的提取[9]

        準(zhǔn)確稱取玫瑰花瓣粉末10g,用75%的乙醇以料液比1:15在室溫下用超聲波提取,提取時(shí)間40min,減壓回收乙醇,在烘箱中60℃干燥,即得玫瑰花瓣總黃酮,并測(cè)定其提取率,按式(1)計(jì)算。

        1.2.2 玫瑰花瓣總多糖的提取[10]

        準(zhǔn)確稱取玫瑰花瓣干粉末10g,用蒸餾水以料液比1:15(m/V),過夜浸提,在室溫下用超聲波提取,提取時(shí)間1h,過濾,濾液減壓濃縮到原來體積的1/5倍,加入5倍量的無水乙醇混合放置過夜,抽濾后的沉淀用100mL水溶解重復(fù)醇沉1次。過濾沉淀用無水乙醇、丙酮、乙醚多次洗滌,在烘箱中60℃烘干,即得玫瑰花瓣總多糖,并測(cè)定其提取率,按式(2)計(jì)算。

        1.2.3 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖的含量測(cè)定

        總黃酮含量的測(cè)定采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法[11],標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=13.4x+0.0548(R2=0.9999),其中:x為吸光度,y為提取液中總黃酮質(zhì)量濃度/(mg/mL),檢測(cè)波長(zhǎng)510nm,以蘆丁來計(jì)算,并測(cè)定其相對(duì)含量,相對(duì)含量按式(3)計(jì)算。

        式中:c為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算的黃酮含量/mg;N為稀釋倍數(shù);m為總黃酮提取物的質(zhì)量/g。

        總多糖含量的測(cè)定采用苯酚-硫酸法[12],標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=12.919x+0.0488(R2=0.9982),其中:x為總多糖質(zhì)量濃度/(mg/mL),y為吸光度,檢測(cè)波長(zhǎng)490nm,以葡萄糖來計(jì)算,并測(cè)定其相對(duì)含量,相對(duì)含量按式(4)計(jì)算。

        式中:c為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算的總多糖含量/mg;N為稀釋倍數(shù);m為總多糖提取物的質(zhì)量/g。

        1.2.4 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖抗氧化活性的測(cè)定

        1.2.4.1 對(duì)·OH清除率測(cè)定

        利用Fenton反應(yīng)體系產(chǎn)生·OH[13],依次加入6mmol/L FeSO4溶液、6mmol/L 水楊酸溶液各2mL,分別加入2mL不同質(zhì)量濃度的玫瑰花總黃酮(25、50、100、150、200、250μg/mL)和總多糖溶液(25、50、100、150、200、250μg/mL),最后加入6mmol/L的H2O2溶液2mL啟動(dòng)反應(yīng),靜置30min后于波長(zhǎng)510nm處測(cè)其吸光度,以蒸餾水代替樣品溶液做空白,并以同質(zhì)量濃度的VC作陽性對(duì)照,·OH清除率按式(5)計(jì)算。

        式中:A0為空白吸光度;Ax為樣品吸光度。

        1.2.4.3 對(duì)DPPH自由基清除率的測(cè)定

        利用DPPH無水乙醇溶液在波長(zhǎng)517nm處紫色團(tuán)的特定吸收峰[15],測(cè)定加抗氧化劑后,在波長(zhǎng)517nm處吸光度的下降表示其對(duì)DPPH自由基的清除能力。

        具塞試管中加入2mL 2×10-4mol/L DPPH無水乙醇溶液,再分別加入2mL不同質(zhì)量濃度的總黃酮、總多糖、VC的無水乙醇溶液,混均,在室溫下30min后,于波長(zhǎng)517nm處測(cè)吸光度AI,同時(shí)測(cè)定2mL 2×10-4mol/L DPPH無水乙醇溶液與2mL 50%乙醇混合液的吸光度A0,取2mL不同質(zhì)量濃度的總黃酮、總多糖,VC與50%乙醇混合液測(cè)定吸光度AJ。DPPH自由基的清除率按式(7)計(jì)算。

        1.2.4.4 對(duì)小鼠肝自發(fā)生脂質(zhì)過氧化能力測(cè)定

        利用硫代巴比妥酸法[16],小鼠禁食12h后處死,取肝,在0~4℃條件下用生理鹽水制成5%肝勻漿。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(肝勻漿和蒸餾水)、陽性組(肝勻漿和VC)、6個(gè)不同劑量的玫瑰花瓣總黃酮組(肝勻漿和總黃酮)和6個(gè)不同劑量的玫瑰花瓣總多糖組(肝勻漿和總多糖)。先在各管中分別加入肝勻漿1.0mL,然后在6個(gè)劑量組中分別加入(0.1、0.5、1、2、4、8mg/mL)提取物0.1mL,對(duì)照組加入蒸餾水0.1mL,陽性組加1mg/mL VC 0.1mL。將各組37℃水浴反應(yīng)60min(振蕩),取出,將試管流水冷卻,向各試管加入20%三氯醋酸(TCA)1mL,0.67%硫代巴比妥酸(TBA)1mL,混勻,沸水浴15min(振蕩)取出流水冷卻。然后3000r/min離心,取上清液在波長(zhǎng)532nm處測(cè)吸光度,并計(jì)算抑制率。每組實(shí)驗(yàn)均設(shè)5個(gè)平行管,實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次。抑制過氧化能力按式(8)計(jì)算。

        式中:A0為空白吸光度;Ax為樣品吸光度。

        1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析

        2 結(jié)果與分析

        2.1 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖含量測(cè)定結(jié)果

        表 1 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖的含量Table 1 Contents of total flavonoids and total polysaccharides in rose petals

        由表1可知,玫瑰花瓣中總黃酮和總多糖的提取率分別為52.1%、73.3%,含量分別為3.45、5.22mg/mL,制備物中總黃酮和總多糖的相對(duì)含量分別為51.75、78.30mg/g。

        2.2 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖對(duì)·OH的清除作用

        由圖1可知,玫瑰花總黃酮和總多糖隨著質(zhì)量濃度的增加,清除·OH的能力不斷提高。根據(jù)清除率與質(zhì)量濃度的線性關(guān)系:總黃酮為y=11.325x+25.001(R2=0.9935),總多糖為y=12.385x+15.594(R2=0.9951);VC為y=10.038x+23.955(R2=0.9946);通過線性方程計(jì)算得出總黃酮、總多糖及VC的IC50分別為2.21、2.78、2.59μg/mL 。其中總黃酮對(duì)·OH的清除能力較VC為強(qiáng),由此可見,玫瑰花瓣總黃酮和總多糖有較好的清除·OH能力。

        圖 1 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖對(duì)·OH的清除作用Fig.1 Scavenging activities of total flavonoids and total polysaccharides from rose petals on hydroxyl free radicals

        2.3 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖對(duì)O2ˉ·的清除作用

        圖 2 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖對(duì)·的清除作用Fig.2 Scavenging activities of total flavonoids and total polysaccharides from rose petals on superoxide anion free radicals

        2.4 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖對(duì)DPPH自由基的清除作用

        圖 3 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖對(duì)DPPH自由基的清除作用Fig.3 Scavenging activities of total flavonoids and total polysaccharides from rose petals on DPPH free radicals

        由圖3 可知,玫瑰花總黃酮和總多糖隨著質(zhì)量濃度的增加,清除D P P H 自由基的能力不斷提高。根據(jù)清除率與質(zhì)量濃度的線性關(guān)系:總黃酮為y=1 2.7 7 5 x +2 5.7 5 5(R2=0.9 8 8 5);總多糖為y=13.371x+4.0113(R2=0.9933);VC為y=10.849x+25.755(R2=0.9885),通過線性方程計(jì)算得出總黃酮、總多糖及VC的IC50分別為2.54、3.44、2.24μg/mL。其中總多糖清除DPPH自由基能力較VC略強(qiáng),由此可見,玫瑰花瓣不同提取部位物有較好的清除DPPH自由基能力。

        2.5 玫瑰花瓣總黃酮和總多糖抑制脂質(zhì)過氧化的作用

        表 2 玫瑰花瓣總黃酮對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制率Table 2 Anti-lipid peroxidation activity of total flavonoids from rose petals

        由表2可知,玫瑰花瓣總黃酮對(duì)小鼠肝自發(fā)性脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的生成有一定的抑制作用,且抑制率與質(zhì)量濃度呈現(xiàn)量效關(guān)系,玫瑰花瓣總黃酮的2、4、8mg/mL組與VC組相比能極顯著抑制小鼠肝自發(fā)性脂質(zhì)過氧化過程(P<0.01)。

        表 3 玫瑰花瓣總多糖對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制率Table 3 Anti-lipid peroxidation activity of total polysaccharides from rose petals

        由表3可知,玫瑰花瓣總多糖對(duì)小鼠肝自發(fā)性脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的生成有一定的抑制作用,且抑制率與質(zhì)量濃度呈現(xiàn)量效關(guān)系,玫瑰花瓣總多糖的0.5、1、2、4、8mg/mL組與VC組相比能極顯著抑制小鼠肝自發(fā)性脂質(zhì)過氧化過程(P<0.01)。

        3 結(jié) 論

        玫瑰花總黃酮和總多糖具有較強(qiáng)的抗氧化性能,并且隨著質(zhì)量濃度的增加,其抗氧化性能亦不斷增強(qiáng),呈現(xiàn)了良好的量效關(guān)系??傸S酮清除自由基的能力均強(qiáng)于總多糖,但是總黃酮抑制脂質(zhì)過氧化作用卻弱于總多糖。有關(guān)和田玫瑰花不同部位提取物的抗氧化作用,值得進(jìn)行進(jìn)一步研究。

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