蒙麥俠 陳瑞明 張 紅 高錦成 石敏娟 陜西省中醫(yī)藥研究院（西安710013）

馬海治癱膠囊系陜西省中醫(yī)醫(yī)院腦內(nèi)科數(shù)名老中醫(yī)集多年臨床經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)“腦中風(fēng)”的康復(fù)治療而研制。處方由大黃、黃芪、水蛭、當(dāng)歸等中藥組成，具有益氣通絡(luò)、活血化瘀、醒腦開竅、健肢回語(yǔ)，用于中風(fēng)恢復(fù)期、后遺癥期。為了有效控制提取工藝，以干膏率為考察指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法，對(duì)其科學(xué)性進(jìn)行研究；為控制其質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，建立了組方藥味的薄層鑒別。

1 儀器與試藥 電子分析天平（型號(hào)：BS210S Max210g，d＝0.1mg，北京賽多利斯天平有限公司）；UV－8 三用紫外儀（無(wú)錫科達(dá)儀器廠）；大黃對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：120902－200609）；黃芪甲苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0781－200311）；馬海治癱膠囊（實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)：120412、120418、120426）。

2 方法與結(jié)果 2.1 提取工藝研究 2.1.1 提取工藝參數(shù)：提取工藝研究中，以中藥飲片粗顆粒為原料，浸泡時(shí)間確定為1.0h（無(wú)干芯），采用L9（34）正交表，以干膏率的提取量為指標(biāo)，以加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間為因素，每個(gè)因素取三水平進(jìn)行考察，通過(guò)正交試驗(yàn)確定最佳工藝條件。正交試驗(yàn)因素水平見(jiàn)1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

2.1.2 干膏率測(cè)定 實(shí)驗(yàn)煎煮液，過(guò)濾，靜置過(guò)夜，上清液濃縮，定容于100mL 容量瓶中，搖勻，精密吸取25mL，水浴蒸干，參照中國(guó)藥典之浸出物測(cè)定法恒重的方式，測(cè)定，計(jì)算。

2.1.3 正交試驗(yàn)安排 從試驗(yàn)因素和水平情況看，選用L9（34）正交表即可。具體試驗(yàn)操作見(jiàn)“正交試驗(yàn)安排和數(shù)據(jù)分析表”。如：1＃實(shí)驗(yàn)… 取實(shí)驗(yàn)處方量藥材飲片粗顆粒，加水8倍，浸泡1h，煎煮2.0h，煎煮3次，煎煮液過(guò)濾，下按“干膏率測(cè)定”方法進(jìn)行，其余如此進(jìn)行。

表2 正交試驗(yàn)安排和數(shù)據(jù)分析表

依據(jù)“正交試驗(yàn)安排和數(shù)據(jù)分析表”中的數(shù)據(jù)，從極差角度看，各因素對(duì)干膏率的影響依次為：D＞B＞A，即煎煮次數(shù)＞煎煮時(shí)間＞加水量，最優(yōu)工藝為：煎煮次數(shù)3次，加水量8倍，煎煮時(shí)間2.0h。

2.1.4 方差分析 依據(jù)“正交試驗(yàn)安排和數(shù)據(jù)分析表”中的數(shù)據(jù)，進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)下表，其中顯示：D 和B 因素的影響有顯著性意義，但表中B 因素的F 值與F0.05（2，2）臨界值非常接近，A 因素的影響沒(méi)有顯著性。但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道水蛭的生物活性與提取溫度、溶媒等有關(guān)，所以綜合考慮，確定最佳提取工藝為A3B3D1。

表3 方差分析表

2.1.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取實(shí)驗(yàn)處方量藥材飲片粗顆粒，三份，加水浸泡1h，煎煮3次，每次加水6倍量，煎煮1.0h，煎煮液過(guò)濾，濾液靜置過(guò)夜，上清液定容至100mL，下按“干膏率測(cè)定”方法進(jìn)行，計(jì)算干膏率，得驗(yàn)證1＃、驗(yàn)證2＃、驗(yàn)證3＃干膏率分別為30.67%、29.68%、30.12%，平均干膏率為30.16%，說(shuō)明優(yōu)選工藝穩(wěn)定，重復(fù)性好。

2.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 2.2.1 大黃鑒別［1］取本品內(nèi)容物0.5g，加甲醇20mL，浸泡1h，濾過(guò)，取濾液5mL，蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，再加鹽酸1mL，加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚分2次振搖提取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?mL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以石油醚（30～60℃）－乙酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；置氨蒸汽中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。

2.2.2黃芪鑒別［2］取本品內(nèi)容物7.5g，用甲醇回流3次，用量依次為：50mL、40mL、40mL，每次回流1h，濾過(guò)、濾液水浴蒸干，殘?jiān)铀?0mL 使溶解，用水飽和的正丁醇振搖萃取四次，每次分別為30mL，合并正丁醇萃取液，用PH＝10～11的氨水洗兩次，每次分別為20mL、15mL，棄去氨水液，正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)铀?0～20mL使溶解，加于D101大孔吸附樹脂柱上，以水50mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇35～40mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80mL 洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，用甲醇定容于2mL，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成1mL 含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液依次3μL、2μL 分別點(diǎn)樣于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13∶7∶2）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)。

3 討 論 試驗(yàn)結(jié)果表明，所選因素對(duì)提取工藝有不同的影響，其中提取次數(shù)影響較為顯著，次之為提取時(shí)間，加水量對(duì)提取無(wú)顯著影響；考慮到處方中水蛭的生物活性并兼顧節(jié)時(shí)節(jié)能的原則，故選擇用6倍量水、回流提取3次，每次1h。處方中大黃及黃芪的薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，可用于其質(zhì)量控制。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：123.

［2］ 莊 瑞.黃芪中黃芪甲苷提取條件的考察［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2008，6（13）：115－116.