尹震花，王佳佳，顧海鵬，康文藝

河南大學(xué)中藥研究所，開封475004

黑莓(blackberry)屬于薔薇科(Rasaceae)懸鉤子屬(Rubus )聚合果類植物，其果實(shí)具有很高的營養(yǎng)價值和藥用價值，具有改善人體新陳代謝、清除自由基、延緩衰老、增強(qiáng)免疫力等功能，特別具有降低膽固醇含量、防治心臟疾病、抗癌(降低化療引起的毒副作用)和抗血栓的功效［1-4］。

國外對不同產(chǎn)地黑莓果實(shí)抗氧化活性的研究較多，如ESRA SARIBURUN 等［5］通過測定DPPH、ABTS 和Cu2+的Trolox 當(dāng)量來評價產(chǎn)于凱斯泰爾黑莓果實(shí)的抗氧化活性;Camille S.Bowen-Forbes 等［6］測定產(chǎn)于牙買加黑莓抑制脂質(zhì)過氧化能力來評價其抗氧化活性，國內(nèi)對黑莓果實(shí)的抗氧化活性研究報道較少，主要集中在黑莓渣［7］、黑莓紅色素［8］、黑莓籽油［9］等，未見對產(chǎn)于河南省黑莓品種薩尼(Shawnee)果實(shí)抗氧化的研究。近年來，河南省封丘縣調(diào)整農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)，大面積推廣種植該品種，為此，本文對薩尼(Shawnee)果實(shí)體外抗氧化性進(jìn)行研究，為其開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料、試劑、儀器

1.1 材料與試劑

黑莓(薩尼)于2011 年8 月采集于采集于河南省新鄉(xiāng)市封丘縣種植基地，由河南大學(xué)中藥研究所李昌勤副教授鑒定為薔薇科(Rasaceae)懸鉤子屬聚合果類植物黑莓(Rubus spp. blackberry)品種薩尼(Shawne)的果實(shí)，標(biāo)本存于河南大學(xué)中藥研究所。

DPPH(日本東京化成工業(yè)株式會社);Fe3+-三吡啶三啞嗪(tripyridyl-triazine，TPTZ;比利時Acros organics 公司);［2，2'-連氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨鹽］(ABTS，美國Fluka 公司);6-羥基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-2-羧酸(Trolox，美國Aldrich 公司);二丁基羥基甲苯(BHT，比利時Acros organics 公司)。

1.2 主要儀器

DELTA 320 型PH 計(美國Mettler-Toledo 公司);電子天平(美國Mettler-Toledo 公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國Heidolph 公司);紫外可見分光光度計(UV-2000 型-尤尼科上海儀器有限公司)。

1.3 黑莓的提取

新鮮黑莓(薩尼)果實(shí)10.04 kg，用甲醇室溫下浸泡2 次，每次3 d，合并提取濾液后濃縮，得到甲醇總浸膏?？偨喾稚⒂谒?，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮得到黑莓石油醚部位(BBPE)(幾乎沒有)、乙酸乙酯部位(BBEA)27.5 g、正丁醇部位(BBBU)195.7 g。

2 抗氧化活性測定方法

2.1 DPPH 法

按照文獻(xiàn)［10］的方法，在515 nm 處測定吸光度。每份樣品平行操作3 次，計算公式為:清除率(%)=［(AControl-ASample)/AControl］ ×100% ，式中AControl為3.5 mL DPPH 溶液與0.1 mL 甲醇混合后的吸光度，ASample為3.5 mL DPPH 溶液與0.1 mL 樣品混合后的吸光度。依據(jù)上述公式計算得到的清除率，用軟件origin6.0 處理，得到樣品清除DPPH 自由基的半數(shù)抑制率IC50值。

2.2 ABTS 法

按照文獻(xiàn)［11］的方法，在734 nm 處測定吸光度，每份樣品平行操作3 次，計算公式為:清除率(%)=［(AControl–ASample)/AControl］ ×100%，式中AControl為2.85 mL ABTS+溶液與0.15 mL 甲醇混合后的吸光度，ASample為2.85 mL ABTS+溶液與0.15 mL 樣品混合后的吸光度。依據(jù)上述公式計算得到的清除率，用軟件origin6.0 處理，得到樣品清除ABTS 自由基的半數(shù)抑制率IC50值。

2.3 FRAP(Fe3+的還原能力)法

按照文獻(xiàn)［12］的方法，在593 nm 處測定吸光度。每份樣品平行操作3 次，計算出清除率，結(jié)果以Trolox 當(dāng)量(即每克樣品的自由基清除能力相當(dāng)于Trolox 的自由基清除能力的微摩爾數(shù))表示。

3 結(jié)果與討論

3.1 對DPPH 自由基的清除作用

表1 顯示，黑莓正丁醇部位對DPPH 自由基的清除能力(IC50=8.44 μg/mL)弱于陽性對照BHA(IC50=3. 2 μg/mL)，強(qiáng)于陽性對照BHT (IC50=18.71 μg/mL)，乙酸乙酯部位清除DPPH 自由基的能力(IC50=38.55 μg/mL)均弱于陽性對照BHA 和BHT。

圖1 顯示，在相同實(shí)驗(yàn)濃度下，黑莓果實(shí)乙酸乙酯部位對DPPH 自由基的抑制率均小于陽性對照BHA 和BHT，正丁醇部位對DPPH 自由基的抑制率均高于陽性對照BHT，低于陽性對照BHA，可見，正丁醇部位清除DPPH 自由基的能力強(qiáng)于乙酸乙酯部位。在濃度為1.74 μg/mL 時，乙酸乙酯部位對DPPH 自由基的抑制率(I =2.85%)較低，當(dāng)乙酸乙酯部位 濃 度 增 加 到55. 56 μg/mL，抑 制 率 達(dá) 到62.40%，隨著提取物濃度的增加，抑制率也增大，即乙酸乙酯部位抑制DPPH 自由基的能力與提取物的濃度呈正效關(guān)系。正丁醇部位在提取物濃度小于27.78 μg/mL，隨著提取物濃度的增加，抑制率也增大，濃度大于27.78 μg/mL 時，再增加提取物的濃度，抑制率幾乎達(dá)到飽和。

表1 黑莓不同提取部位的抗氧化活性Table 1 Antioxidant activity of the different extracts of blackberry(Shawne)

圖1 提取物濃度對DPPH 自由基的影響Fig.1 Effect of concentration of extracts on DPPH free radical

3.2 對ABTS 自由基的清除作用

表1 顯示，黑莓正丁醇部位對ABTS 自由基的清除能力(IC50=4.55 μg/mL)弱于陽性對照BHA(IC50=1.88 μg/mL)，強(qiáng)于陽性對照BHT (IC50=7.72 μg/mL)，乙酸乙酯部位清除DPPH 自由基的能力(IC50=17.25 μg/mL)均弱于陽性對照BHA 和BHT。

圖2 顯示，在濃度為3.125 μg/mL 時，乙酸乙酯部位對ABTS 自由基的抑制率(I =5.44%)較低，正丁醇部位對ABTS 自由基的抑制率(I =38.26%)較大，當(dāng)乙酸乙酯部位和正丁醇部位濃度分別增加到50 和12.5 μg/mL 時，抑制率分別達(dá)到了39.43%和99.44%，隨著提取物濃度的增加，抑制率也增大，即乙酸乙酯部位和正丁醇部位抑制ABTS 自由基的能力與提取物的濃度呈正效關(guān)系。當(dāng)乙酸乙酯部位和正丁醇部位提取物濃度分別大于50 和12. 5 μg/mL，再增加提取物的濃度，抑制率變化不大，說明對ABTS 自由基的抑制率已經(jīng)達(dá)到飽和。在相同實(shí)驗(yàn)濃度下，黑莓乙酸乙酯部位對ABTS 自由基的抑制率均小于陽性對照BHA 和BHT，正丁醇部位對ABTS 自由基的抑制率均高于陽性對照BHT，低于陽性對照BHA，可見，正丁醇部位清除ABTS 自由基的能力強(qiáng)于乙酸乙酯部位。

圖2 提取物濃度對ABTS 自由基的影響Fig.2 Effect of concentration of extracts on ABTS free radical

3.3 對Fe3+的還原能力

表1 顯示，2 個提取物中，黑莓乙酸乙酯部位還原Fe3+的能力較強(qiáng)(Trolox 當(dāng)量=711.57 ±10.14 μmol/g)，但仍低于陽性對照BHA 和BHT(Trolox 當(dāng)量=6633.04±114.04 和1581.68±97.41 μmol/g)。

4 結(jié)論

結(jié)果表明，黑莓(薩尼)有較好的抗氧化能力，作為食品，具有開發(fā)天然抗氧化劑的潛力，這為進(jìn)一步開發(fā)黑莓(薩尼)在食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域的用途提供了一定的參考價值。

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