潘傳毅，鄔立權(quán)，鄭德富

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱150069）

最近幾年，高致病性禽流感在世界一些地區(qū)流行，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的損失。疫苗免疫接種是有效防控禽流感的重要措施之一。重組禽流感病毒滅活疫苗(H5N1亞型，Re-6株)在預(yù)防控制高致病性禽流感方面發(fā)揮了重要的作用。已有試驗(yàn)和很多應(yīng)用實(shí)踐證明，該疫苗對(duì)禽類均有良好的免疫效果。但是對(duì)于重組禽流感病毒滅活疫苗的接種部位，各生產(chǎn)廠家有不同的推薦方法。為此我們對(duì)重組禽流感病毒滅活疫苗分別采取了頸部皮下注射和胸部肌肉注射的免疫效果進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)，目的是為選擇最佳的注射方法提供參考。

一、材料與方法

1.疫苗。重組禽流感病毒滅活疫苗（H5N1亞型，Re-6株)3批，哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)，批號(hào) 201271，201272,201273 。

2.血凝抑制試驗(yàn)用抗原。批號(hào)201207，哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

3.試驗(yàn)動(dòng)物。SPF雞，購(gòu)自南京梅里亞公司。

4.主要儀器。血凝板、移液器、微量振蕩器、低速離心機(jī)等。

5.主要試劑。0.1 mol/LPBS(PH 7.2)，1%雞紅細(xì)胞懸液。

6.試驗(yàn)方法。

（1）將70只SPF雞隨機(jī)分為7組，每組10只，分別飼養(yǎng)在負(fù)壓隔離器中。1、2組用批號(hào)為201271的重組了禽流感病毒滅活疫苗；3、4組用批號(hào)為201272的重組禽流感病毒滅活疫苗；5、6組用批號(hào)為201273的重組禽流感病毒滅活疫苗；三批疫苗均采用頸部皮下注射和胸部肌肉注射方法接種28日齡的SPF雞。注射劑量為0.3 ml/只。7組為空白對(duì)照。分別于注射后第14天、21天和28天翅靜脈采血，檢測(cè)HI抗體效價(jià)。

（2）HI抗體效價(jià)測(cè)定 按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》和《重組禽流感病毒滅活疫苗(H5N1亞型，Re-6株)制造及檢驗(yàn)試行規(guī)程》中HI試驗(yàn)操作方法進(jìn)行。每次測(cè)定后計(jì)算各組的幾何平均值。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1 頸部皮下注射和胸部肌肉注射14天HI抗體效價(jià)

表2 頸部皮下注射和胸部肌肉注射21天HI抗體效價(jià)

表3 頸部皮下注射和胸部肌肉注射28天HI抗體效價(jià)

1.頸部皮下注射和胸部肌肉注射對(duì)SPF雞的免疫試驗(yàn)結(jié)果見表1、表2、表3。頸部皮下注射后14天HI抗體值在6.78～7.1log2之間，平均值7.0 log2；21天HI抗體值在8.7～9.2 log2之間，平均值8.9 log2；28天HI抗體值在9.4～9.6 log2之間，平均值9.5 log2；胸部肌肉注射后14天HI抗體值在5.9～6.3 log2之間，平均值6.01 log2；21天HI抗體值在7.90～8.6 log2之間，平均值8.24 log2；28天HI抗體值在9.0～9.1 log2之間，平均值9.07 log2；對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果顯示，頸部皮下注射比胸部肌肉注射誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體速度快且水平高。

三、分析與結(jié)論

1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同批次的重組禽流感滅活疫苗頸部皮下注射比胸部肌肉注射誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體速度快且水平高。

2.重組禽流感滅活疫苗是W/O乳型，乳劑具有分散度大，生物利用度高，靶向性強(qiáng)的特點(diǎn)。其靶向性在于它對(duì)淋巴的親和性，易聚集于附近的淋巴器官。重組禽流感滅活疫苗，乳滴大小一般在1～100微米之間，疫苗經(jīng)頸部皮下注射后聚集于雞頸部的中樞免疫器官胸腺，小于3微米的微粒分散體系能很快被胸腺髓質(zhì)中的巨噬細(xì)胞或樹突細(xì)胞吞噬。而聚集于胸腺附近3～100微米之間的疫苗微粒經(jīng)機(jī)體降解與吸收后逐漸緩慢地釋放抗原。疫苗注射在免疫器官附近，能提高免疫效應(yīng)的作用。因此重組禽流感滅活疫苗經(jīng)頸部皮下注射為未成年雞最佳注射方法。