李國祥，楊 磊，盧代嬋，施新丹，蔡明月，邵 宇

(1．生物資源保護與利用湖北省重點實驗室(湖北民族學院)，湖北 恩施445000;2．湖北民族學院 化學與環(huán)境工程學院，湖北 恩施445000)

雙氯芬酸鈉化學名稱為2－［(2，6－二氯苯基)氨基］苯乙酸鈉，又名雙氯滅痛．其抗炎、鎮(zhèn)痛和解熱作用很強，是使用最廣泛的非甾類抗炎藥之一．臨床上主要用于類風濕性關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)炎、紅斑狼瘡及癌癥和手術(shù)后疼痛，以及各種原因引發(fā)的發(fā)熱．但因其口服吸收迅速，生物半衰期較短，普通片劑常需日服3～4 次才能維持藥效，而使體內(nèi)血藥濃度產(chǎn)生峰谷現(xiàn)象［1－2］，且對胃腸道有刺激性．因此臨床上常將雙氯芬酸鈉制成緩控釋制劑，通過控釋制劑的釋放部位可緩解對胃腸的刺激，將其制成緩釋制劑以低劑量持續(xù)地給藥也可避免高濃度引起的副作用．

雖然目前已有相關(guān)的緩釋制劑的研究及應用報道［3－4］，但具有的共同特點是制備工藝較為繁瑣和復雜，因此探究一種較為簡單、可控的工藝制備出具有良好緩釋性能的制劑具有重要的意義．殼聚糖是甲殼素脫乙?；难苌?，是一種豐富的可再生資源，能溶于稀酸溶液制備成凝膠、膜、纖維、微球等材料，是重要的藥物載體［5－6］，其制劑具有較好的順應性、生物相容性及生物可降解性．

因此，本文試圖以殼聚糖為原料制備載有雙氯芬酸鈉的微丸，并考察其緩釋性能，希望能為雙氯芬酸鈉制劑的臨床使用及工業(yè)生產(chǎn)的改進提供有益借鑒．

1 試驗部分

1．1 儀器與試劑

UV757CRT 型紫外可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)，SHZ－82 型數(shù)顯氣溶恒溫振蕩器(金壇市科興儀器廠);殼聚糖(浙江省磐安縣殼聚糖廠)，雙氯芬酸鈉(華星制藥)，其它試劑均為國產(chǎn)分析純．

1．2 微丸的制備

準確稱取適量雙氯芬酸鈉于燒杯中，加入100 mL 蒸餾水，使充分溶解．再稱取2．0 g 殼聚糖于燒杯中，攪拌下加入2．0 mL 冰乙酸，將混合液置于電動攪拌器上攪拌30 min，使混合均勻．將所制得混合液靜置1 h，脫去汽泡后用5 mL 的注射器將混合液滴入2%的NaOH 溶液中，控制注射器與液面的高度與滴入速度，使制得小球保持一定球形度．待小球固化后將其用1%的戊二醛溶液交聯(lián)1 h，取出后用蒸餾水洗去表面的戊二醛，自然表干后備用．

1．3 微丸圓整度的考察

采取測量微丸平面臨界角的方法來測量圓整度，取適量微丸于玻璃板上，將玻璃板的一側(cè)抬起，當微丸剛好滾動時記下玻璃的傾斜角，多次重復取其平均值．角度越小則說明微丸的圓整度越好．

1．4 微丸堆密度的考察

取10 mL 的量筒1 支，首先測量其質(zhì)量m1，接著放入適量的微丸后再次測得裝有微丸的量筒質(zhì)量為m2，在桌面上輕輕敲擊量筒直至其內(nèi)微丸的體積不再減小為止，記錄下此時微丸體積V．按公式(1)計算堆密度．

1．5 微丸緩釋性能的測定

分別準確稱取一定量的載藥微丸于錐形瓶中，加入30 mL 緩沖溶液．將錐形瓶置于37 ℃度的恒溫搖床中，以100 rd/min 進行體外緩釋實驗．分別按15 min、30 min、45 min、1 h、1．5 h、2 h、4 h、8 h、12 h 時間間隔取5 mL 緩釋液，并加入5 mL 的空白緩沖液．用紫外可見分光光度計測定其在波長275 nm 處的吸光度，依據(jù)標準曲線計算樣品濃度，繪制微丸中雙氯芬酸鈉的緩釋總量－時間曲線．累積釋放量Mn可按下面的公式進行計算．

式中:Mn為累積釋放量，單位為mg;Cn為第n次時的濃度，單位為mg/mL;V0為固定緩釋液體積，本實驗為30 mL;ΔV為每次取樣體積，本實驗為5 mL;Ci為累積濃度，其中i=n－1．

改變凝固液濃度、交聯(lián)劑的濃度和pH 值等條件，采用類似方法分別考察微丸對雙氯芬酸鈉的緩釋性能．

圖1 微丸形貌Fig．1 Morphology of the pellets

2 結(jié)果與討論

2．1 殼聚糖載藥微丸的形態(tài)

殼聚糖是一種帶有氨基陽離子的生物多糖，具有優(yōu)良的生物醫(yī)用功能特性．用稀酸溶解殼聚糖，以稀堿液為凝固液，采用溶膠－凝膠法能制備出多種醫(yī)用功能材料，如圖1 所示，通過一種簡便方式制備的殼聚糖載藥微丸它們?yōu)榍蛐瓮饷玻嗜榘咨?，且粒徑呈窄分布，溶脹狀態(tài)下平均直徑約2 mm． 且將該微丸在緩沖溶液中緩釋一定時間，用紫外分光光度計測定吸光度，如圖2 所示，在λ=275 nm 檢測到有明顯的吸收，這是雙氯芬酸鈉的特征吸收波長，表明目標藥物的存在，從而證實固載有雙氯芬酸鈉的殼聚糖微丸成功制備．

圖2 雙氯芬酸鈉在250～320 nm 范圍的紫外吸收Fig．2 The UV absorbance of diclofenac sodium in the range of 250～320 nm

2．2 微丸圓整度的考察

經(jīng)測量微丸的開始滾動時的平面臨界角平均值為27°，說明采用本實驗工藝制備的載藥微丸具有較好的圓整度．圓整度高的微丸具有較好的流動性，若制成膠囊劑，在不用添加潤滑劑等輔料的情況下也能輕易的填充入膠囊殼，適合進行工業(yè)化的大批量生產(chǎn)且具有成本低的特點．

2．3 微丸堆密度的考察

測得m1為17．48 g，m2為19．38 g，V為2．60 mL．由公式(1)計算得堆密度為0．73 g/mL．微丸的堆密度與其真密度、粒徑等都具有密切的聯(lián)系．堆密度越大，則微丸一般具有越小粒徑，且粒徑的大小也將影響到微丸的緩釋性能．粒徑越大，等質(zhì)量的微丸表面積越小，藥物的釋放將越緩慢，但粒徑變大將直接影響患者服用的順應性，因此選擇合適的粒徑對于制劑至關(guān)重要．

2．4 不同條件下微丸的緩釋行為

2．4．1 凝固液氫氧化鈉濃度的影響 分別改變凝固液中氫氧化鈉的濃度為1%、2%、4%，考察不同氫氧化鈉濃度的凝固液對微丸緩釋性能影響，結(jié)果如圖3 所示．圖3 顯示，三種不同NaOH 濃度的凝固液所制備的微丸均有顯著的緩釋性能，隨著時間延長，微丸藥物釋放量逐步增加，初始3 h 內(nèi)，藥物釋放量增加較快，且緩釋時間可以持續(xù)至10 h 左右．另外，由緩釋曲線可知，在凝固液中隨著NaOH 濃度的增加對微丸載藥量有一定的促進作用，這可能是微丸在成型過程中不同濃度的凝固液改變了微丸凝膠速度，從而影響了微丸對雙氯芬酸鈉的包封率，導致載藥量發(fā)生變化．如果繼續(xù)增加NaOH的量，過高的堿濃度將可能會影響藥物的結(jié)構(gòu)和生物活性，故凝固液中堿的濃度應綜合考慮．

圖3 經(jīng)不同凝固液處理的微丸的釋放行為Fig．3 The release behavior of processed pellets from different coagulating solution

2．4．2 交聯(lián)劑戊二醛的濃度的影響 分別改變戊二醛的濃度為0．5%、1%、2%，考察戊二醛的濃度對微丸緩釋性能的影響，結(jié)果如圖4 所示．圖4 顯示，交聯(lián)劑的濃度對載藥微丸釋藥影響較大，隨著戊二醛濃度的增加，微丸的釋藥速率逐步降低，且載藥微丸的釋藥率呈現(xiàn)下降趨勢．這可能是由于戊二醛分子中的醛基和殼聚糖分子中的氨基發(fā)生反應，形成交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，從而使高分子鏈收縮，而致使微丸釋藥的有效空隙減小，使得藥物在殼聚糖基質(zhì)中擴散速率減少，進而影響釋藥率，且這種影響隨著戊二醛濃度的增加而更加顯著．

圖4 經(jīng)不同交聯(lián)劑處理的微丸的釋放行為Fig．4 The release behavior of processed pellets from different crosslinked agent

2．4．3 不同pH 環(huán)境下的緩釋性能 分別配制pH 值為4．5、6．8、7．4 的緩沖溶液，將載藥微丸于不同緩釋體系中作體外釋放試驗，考察不同pH 釋放體系對載藥微丸的影響，結(jié)果如圖5 所示．

圖5 顯示，24 h 時間內(nèi)，隨著時間的增加雙氯芬酸鈉的釋放量不斷增加．且整個過程有三個明顯的階段:即剛開始1 h 內(nèi)釋放速度較快，為暴釋階段;接下來較長時間內(nèi)釋放逐漸變得平緩，藥物累積量增加趨勢慢慢減弱，釋放速率逐漸變小，即為穩(wěn)定的緩釋階段;最后隨著時間的延長，釋放速率減小，以致總釋放量趨于一定值，緩釋曲線趨于一條直線．相比較而言，堿性條件下總緩釋量偏低，因此，堿性條件下不是最佳緩釋環(huán)境;而酸性和中性條件下藥物釋放量均超過600 μg，高于堿性介質(zhì)．但雙氯芬酸鈉總的緩釋時間均低于牛血清白蛋白藥物［5］，這可能是和牛血清白蛋白分子相比，雙氯芬酸鈉分子較小，在殼聚糖載體中更容易擴散和釋放所致．

圖5 雙氯芬酸鈉分別在堿性、酸性、中性介質(zhì)中的釋放行為Fig．5 The release behavior of diclofenac sodium in alkaline，acidic and neutral media

3 結(jié)論

以殼聚糖為原料成功制備了殼聚糖/雙氯芬酸鈉緩釋微丸，并對所制備的微丸進行了體外緩釋性能的研究，結(jié)果表明微丸在不同pH 環(huán)境下具有顯著的緩釋行為，呈現(xiàn)出一定的pH 敏感性，使得此制劑在體內(nèi)能夠穩(wěn)定而緩慢地釋放藥物．經(jīng)交聯(lián)處理后的殼聚糖分子上的部分氨基與交聯(lián)劑戊二醛反應形成了網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，阻止了藥物在其分子內(nèi)部的轉(zhuǎn)移，有助于藥物的控制釋放．

［1］ 尤啟東．藥物化學［M］．2 版．北京:化學工業(yè)出版社，2008:488－489．

［2］ 侯婷．雙氯芬酸鈉緩釋膠囊的工藝和質(zhì)量研究［D］．天津:天津大學，2011．

［3］ 祁小樂，朱家壁，陳盛君．雙氯芬酸鈉腸溶微丸型片劑的研制［J］． 藥學學報，2008，43(1):97－101．

［4］ 鄒梅娟．結(jié)腸定位釋藥雙氯芬酸鈉包衣片的研究［D］．沈陽:沈陽藥科大學，2001．

［5］ 唐鷹，彭炳益，李國祥．固載蛋白類藥物的殼聚糖基管式膜的制備及體外緩釋性能研究［J］． 湖北民族學院學報:自然科學版，2012，30(3):309－311．

［6］ 施曉文，李曉霞，杜予民．甲殼素基新材料研究進展［J］．高分子學報，2011(1):1－11．