葛 蕾

（淄博市食品藥品檢驗(yàn)所，山東淄博255000）

高血脂是動脈粥樣硬化和心血管病發(fā)生發(fā)展的重要因素，世界各國在高血脂及其并發(fā)癥的治療方面，每年的投入高達(dá)數(shù)萬億美元[1]。因此，開發(fā)具有降脂作用的天然保健食品，對保護(hù)人體健康具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。研究發(fā)現(xiàn)[2]，蘋果渣中含有多酚類化合物。蘋果多酚是蘋果中所含多元酚類物質(zhì)的通稱，主要包括綠原酸、兒茶素、表糖兒茶素、蘋果縮合丹寧、根皮苷、槲皮苷、原花青素等。藥理研究表明，蘋果多酚具有預(yù)防齲齒、高血壓、過敏反應(yīng)，抗動脈粥樣硬化、阻礙紫外線吸收等多種保健功能，同時還具有抗氧化、消臭、保鮮、護(hù)色、防止維生素?fù)p失等作用[3-5]。蘋果多酚主要存在于果皮中，蘋果加工企業(yè)排出的果渣中果皮較多，所以果渣中多酚含量非常豐富。本研究采用高脂大鼠為模型，給予相應(yīng)劑量的蘋果渣多酚，并以降血脂常用藥物非諾貝特設(shè)立陽性對照組，用藥理學(xué)的方法探討蘋果渣多酚對高脂大鼠血清中脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)的影響，并與藥物作對比，從而為蘋果渣多酚的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

紅富士蘋果 產(chǎn)自沂源燕崖；蘋果渣多酚 實(shí)驗(yàn)室自制；非諾貝特膠囊 廣東先強(qiáng)藥業(yè)有限公司，批號110504；SD雄性大鼠60只 體重160～190g，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司；血清甘油三酯（TG）、血清總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒 保定長城臨床試劑有限公司。

超聲洗滌儀 昆山市超聲儀器有限公司；HHS-4s電熱恒溫水浴鍋 上海南陽儀器有限公司；754N紫外可見分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司；TGL-16C高速離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；TD12001電子天平 北京塞多利斯天平有限公司；冷凍干燥機(jī) 上海冷凍干燥儀器廠；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蘋果渣多酚的制備 蘋果清洗→破碎榨汁→果渣冷凍干燥→加70%乙醇超聲提取2次→提取液離心→上清液減壓回收→蘋果渣多酚粗提物→70%乙醇溶解→XDA-5型大孔樹脂純化→解析液減壓濃縮→濃縮液冷凍干燥→蘋果渣多酚（經(jīng)Folin-酚法[6]測定純度78.4%，以總酚計(jì)）。

1.2.2 飼料誘導(dǎo)高脂大鼠模型的建立 將60只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5d后，隨機(jī)分為6組，每組10只。正常對照組給予基礎(chǔ)飼料，高脂對照組（陰性對照組）、非諾貝特組（陽性對照組）和蘋果渣多酚3個劑量組的大鼠飼喂高脂飼料[7]（基礎(chǔ)飼料84.5%，豬油5%，蛋黃粉10%，膽鹽0.5%）。大鼠飼喂高脂飼料14d后，空腹12h，眼眶取血測定血清甘油三酯（TG）、血清總膽固醇（TC）水平，以確定高脂大鼠模型的建立。

1.2.3 動物給藥 高脂大鼠模型建立后，每天9∶00按不同劑量對大鼠進(jìn)行灌胃。蘋果渣多酚低、中、高三個劑量組給藥量分別為15、30、60mg/kg·bw，非諾貝特組給藥量為30mg/kg·bw。根據(jù)給藥量將蘋果渣多酚用3mL蒸餾水溶解灌胃，正常對照組和高脂對照組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)28d。實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為室溫。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)

1.2.4.1 蘋果渣多酚對大鼠體重、肝臟的影響 實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分組后，稱初重，灌喂蘋果渣多酚和非諾貝特28d后，稱終重。麻醉解剖大鼠，取出肝臟，進(jìn)行病理檢查。

1.2.4.2 蘋果渣多酚對大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、AI的影響 灌喂蘋果渣多酚和非諾貝特28d后，禁食12h，麻醉解剖大鼠，心臟采血，分離血清，分別測定TG、TC、HDL-C、LDL-C，以上測定指標(biāo)均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。動脈粥樣硬化指數(shù)（AI）計(jì)算公式如下：

AI=（TC－HDL-C）/HDL-C

式中，TC為血清總膽固醇（mmol/L）；HDL-C為高密度脂蛋白膽固醇（mmol/L）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 13.0軟件中one-way ANOVA進(jìn)行處理和顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 高脂大鼠模型的建立

大鼠飼喂14d后，稱重，空腹12h，眼眶取血測定TC、TG水平，以確定動物模型的建立，結(jié)果見表1。

表1 蘋果渣多酚飼喂前大鼠血脂水平（±s，n=10）Table 1 Serum lipid level of rat before fed apple pomace polyphone（±s，n=10）

表1 蘋果渣多酚飼喂前大鼠血脂水平（±s，n=10）Table 1 Serum lipid level of rat before fed apple pomace polyphone（±s，n=10）

注：與正常對照組相比：**，p<0.01，差異極顯著；*，p<0.05，差異顯著；與高脂對照組相比：##，p<0.01，差異極顯著；#，p<0.05，差異顯著。表2～表4同。

組別 TG（mmol/L） TC（mmol/L）正常對照組 0.40±0.1 1.29±0.69高脂對照組 0.68±0.25** 2.88±0.45**蘋果渣多酚低劑量組 0.65±0.26** 2.90±0.882**蘋果渣多酚中劑量組 0.63±0.33** 2.84±0.96**蘋果渣多酚高劑量組 0.66±0.32** 2.86±0.58**非諾貝特組 0.64±0.22** 2.85±0.63**

由表1可見，5個高脂飼料組的血脂水平均顯著高于正常對照組（p＜0.01），說明高血脂大鼠模型建立成功。

2.2 蘋果渣多酚對大鼠體重、肝臟的影響

表2 蘋果渣多酚對大鼠體重的影響（±s，n=10）Table 2 Effect of apple pomace polyphone on rat weight（±s，n=10）

表2 蘋果渣多酚對大鼠體重的影響（±s，n=10）Table 2 Effect of apple pomace polyphone on rat weight（±s，n=10）

組別 初重（g） 終重（g）正常對照組 167±8 397±22高脂對照組 166±7 427±17**蘋果渣多酚低劑量組 167±6 409±24蘋果渣多酚中劑量組 166±10 405±24#蘋果渣多酚高劑量組 167±8 404±23#非諾貝特組 168±7 419±20

由表2可以看出，灌胃之前，各實(shí)驗(yàn)組之間大鼠體重?zé)o顯著差異（p＞0.05）；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，蘋果渣多酚中、高劑量組大鼠體重與高脂對照組相比，有顯著差異（p＜0.05），說明蘋果渣多酚能明顯抑制大鼠體重的增加。非諾貝特組大鼠體重與高脂對照組相比，無顯著差異（p＞0.05）。這也反映出在控制體重方面，蘋果渣多酚的作用大大優(yōu)于非諾貝特。

對大鼠肝臟進(jìn)行病理檢查發(fā)現(xiàn)高脂對照組大鼠肝臟呈黃色，已呈明顯脂肪變化（正常對照組大鼠肝臟呈褐色）。蘋果渣多酚各劑量組和非諾貝特組病變均輕于高脂對照組，但蘋果渣多酚高劑量組，大鼠肝臟顏色最接近正常對照組。表明蘋果渣多酚對高脂飼料致大鼠脂肪肝形成有阻止作用，效果優(yōu)于非諾貝特，并且和劑量有一定相關(guān)性。

2.3 蘋果渣多酚對大鼠TG、TC的影響

由表3可知，非諾貝特組和蘋果渣多酚高劑量組降TG效果最好。蘋果渣多酚中、高劑量組TG含量與高脂對照組之間存在顯著差異（p＜0.05）。隨著蘋果渣多酚劑量增加，TG含量呈下降趨勢，蘋果渣多酚劑量越大，降TG效果越好。

從TC指標(biāo)可以看出，蘋果渣多酚低、中劑量組、非諾貝特組與高脂對照組之間均存在極顯著性差異（p＜0.01）。隨著蘋果渣多酚劑量增加TC呈上升趨勢，說明蘋果渣多酚與降低TC濃度之間存在量效關(guān)系，在此范圍內(nèi)，蘋果渣多酚低劑量組降TC效果最好。

表3 蘋果渣多酚對大鼠血清TG、TC的影響（±s，n=10）Table 3 Effect of apple pomace polyphone on serum TG、TC levels of ra（t±s，n=10）

表3 蘋果渣多酚對大鼠血清TG、TC的影響（±s，n=10）Table 3 Effect of apple pomace polyphone on serum TG、TC levels of ra（t±s，n=10）

組別 TG（mmol/L） TC（mmol/L）正常對照組 0.45±0.46 1.45±0.10高脂對照組 0.73±0.18* 3.56±0.65蘋果渣多酚低劑量組 0.54±0.17 2.73±0.65##蘋果渣多酚中劑量組 0.48±0.16# 2.86±0.49##蘋果渣多酚高劑量組 0.46±0.09# 2.98±0.67非諾貝特組 0.45±0.07## 2.84±0.55##

2.4 蘋果渣多酚對大鼠HDL-C、LDL-C及AI的影響

表4 蘋果渣多酚對大鼠血清HDL-C、LDL-C及AI的影響（±s，n=10）Table 4 Effect of apple pomace polyphone on serum HDL-C，LDL-C and AI levels of ra（t±s，n=10）

表4 蘋果渣多酚對大鼠血清HDL-C、LDL-C及AI的影響（±s，n=10）Table 4 Effect of apple pomace polyphone on serum HDL-C，LDL-C and AI levels of ra（t±s，n=10）

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從HDL-C指標(biāo)看，蘋果渣多酚各劑量組和非諾貝特組均能顯著提高HDL-C含量，其中蘋果渣多酚低劑量組效果最好，與高脂模型組之間的差異達(dá)到了極顯著水平（p＜0.01）。說明蘋果渣多酚可以有效提高HDL-C的含量，并且蘋果渣多酚對提高HDL-C的含量有一定的量效關(guān)系，即隨著劑量的增加，HDL-C呈下降趨勢。

從LDL-C指標(biāo)看，蘋果渣多酚各劑量組和非諾貝特組均與高脂對照組之間存在極顯著性差異（p＜0.01），其中蘋果渣多酚中劑量組降低LDL-C含量效果最好。

從AI指標(biāo)看，高脂對照組與正常對照組之間存在極顯著性差異（p＜0.01），這進(jìn)一步表明高脂大鼠模型建立成功。蘋果渣多酚各劑量組和非諾貝特組均與高脂對照組之間存在極顯著性差異（p＜0.01），其中蘋果渣多酚低劑量組對降低動脈粥樣硬化效果最好。蘋果渣多酚各劑量組對降低AI有一定量效關(guān)系，即隨著蘋果渣多酚劑量增加AI呈上升趨勢。

3 討論與結(jié)論

現(xiàn)代科學(xué)已經(jīng)證實(shí)，所有降血脂的藥物對人類的身體都有副作用[8]。以本實(shí)驗(yàn)所用的非諾貝特為例，長期服用，不僅會導(dǎo)致人體肝、腎功能損害，甚至還會致癌、致畸。蘋果渣多酚提取物是天然產(chǎn)物，安全無毒，如能開發(fā)成降血脂的保健食品，未來市場前景將非常廣闊。

大量研究證實(shí)，脂代謝紊亂和動脈粥樣硬化密切相關(guān)[9]。其脂質(zhì)變化包括低密度脂蛋白（LDL）、TG、TG和高密度脂蛋白（HDL）[10]。當(dāng)血清LDL濃度升高時動脈壁內(nèi)脂質(zhì)，特別是膽固醇酯沉積增多，可引起中膜平滑肌組織大量增殖，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展[11]。HDL的作用與LDL的完全相反。HDL參與膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)有效地攝取外周多余的膽固醇，抑制細(xì)胞對LDL-C的攝取，在卵磷脂膽固醇脂?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）作用下轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟代謝從而減少膽固醇在血管壁內(nèi)沉積[12]。因此血清TC含量和AI值與冠心病發(fā)病率呈正相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)所測定的四個指標(biāo)中，TC、HDL-C和LDL-C三個指標(biāo)，蘋果渣多酚的作用都優(yōu)于非諾貝特。TG指標(biāo)，非諾貝特略優(yōu)于蘋果渣多酚。結(jié)果表明，蘋果渣多酚能明顯降低高脂血癥大鼠血清TC和TG的含量，提高HDL-C值，降低LDL-C含量，從而降低AI值。因此蘋果渣多酚具有降血脂、減肥以及預(yù)防和緩解動脈粥樣硬化的作用。

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