蘇 方，謝勇平，方展強(qiáng)

(華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院廣東省高等學(xué)校生態(tài)與環(huán)境科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州510631)

隨著工業(yè)的快速發(fā)展，向水環(huán)境排放污染物的種類(lèi)和數(shù)量也越來(lái)越多。研究表明，一些污染物影響水生脊椎動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)過(guò)程［1］，這些污染物被稱(chēng)為環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(Endocrine-Disrupting Chemicals，簡(jiǎn)稱(chēng)EDCs)。其中多環(huán)芳烴(PAHs)如苯并〔a〕芘(BaP)是一種很強(qiáng)的致畸、致突變劑和內(nèi)分泌干擾物［2，3］，已有研究表明，BaP主要影響動(dòng)物的雄激素分泌系統(tǒng)［4］。鎘(Cadmium，Cd)是常見(jiàn)的環(huán)境和工業(yè)污染物，鎘離子(Cd2+)有一定的致癌和致突變特性［5］。一些研究也表明Cd2+具有雌激素活性，也影響雌激素分泌［2，6］。食蚊魚(yú)(Gambusia affinis)屬鳉形目，胎鳉科，食蚊魚(yú)屬，原產(chǎn)于中南美，后引入中國(guó)，因嗜吃蚊子幼蟲(chóng)而得名［7］。食蚊魚(yú)分布廣泛，能夠耐受很多不同的環(huán)境同時(shí)能夠生存在污染較嚴(yán)重的水體中。雄性食蚊魚(yú)是非常理想的監(jiān)測(cè)水體中EDCs的指示生物，它們?cè)谛奂に鼗虼萍に氐目刂葡滤a(chǎn)生的性別特征非常容易區(qū)別［8-10］。因此，本課題選取食蚊魚(yú)作為研究對(duì)象，通過(guò)室內(nèi)暴露實(shí)驗(yàn)來(lái)研究水體中存在的低濃度BaP和Cd2+暴露對(duì)成年雄性食蚊魚(yú)的求偶行為的影響。同時(shí)進(jìn)行了成年雌性食蚊魚(yú)的暴露實(shí)驗(yàn)，研究經(jīng)暴露后其對(duì)成年雄魚(yú)向雌魚(yú)求偶行為所產(chǎn)生的影響，從而了解水環(huán)境中BaP、Cd2+污染對(duì)食蚊魚(yú)個(gè)體生殖行為的負(fù)面生物效應(yīng)，探討B(tài)aP、Cd2+對(duì)魚(yú)類(lèi)是否具有類(lèi)雌激素效應(yīng)，分析BaP和其對(duì)魚(yú)類(lèi)繁殖內(nèi)分泌生理過(guò)程的干擾而導(dǎo)致其生殖行為上的變化，其研究成果將為水環(huán)境污染的保護(hù)與恢復(fù)工作提供有價(jià)值的數(shù)據(jù)和資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

BaP試劑，CdCl2試劑。由于B［a］P在水中的溶解度極低，因此使用高純度的二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO，99.8%，sigma)作為助溶劑配制成保存液。DMSO在預(yù)實(shí)驗(yàn)中已證明其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有產(chǎn)生明顯的影響。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

食蚊魚(yú)購(gòu)自廣州市花鳥(niǎo)魚(yú)蟲(chóng)市場(chǎng)，室內(nèi)馴養(yǎng)1個(gè)月，馴養(yǎng)期間每日喂食紅蟲(chóng)2次，每3 d換水1/3，及時(shí)清除沉積物。隨機(jī)挑選馴養(yǎng)后體長(zhǎng)相近的性成熟雄(♂)、雌(♀)魚(yú)各45尾(性成熟♂、♀鑒別:將雄魚(yú)放入冰水混合液中使其麻痹，在解剖鏡下觀(guān)察其生殖鰭末端具有鉤狀結(jié)構(gòu)即為成年雄魚(yú);雌魚(yú)個(gè)體較大，均沒(méi)有生殖鰭的結(jié)構(gòu)，挑選具有胎斑的為懷妊個(gè)體，屬性成熟的雌魚(yú)，圖1-1)。雄魚(yú)平均體長(zhǎng)26 mm，雌魚(yú)體長(zhǎng)35～43 mm。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 BaP和Cd2+暴露實(shí)驗(yàn)設(shè)置

BaP暴露:設(shè)定0.1和100 μg/L濃度暴露組，另設(shè)濃度為0的對(duì)照組，每組雄魚(yú)與雌魚(yú)各15尾，分別放入3個(gè)15L的40 cm×25 cm×30 cm的玻璃魚(yú)缸中。暴露期間水溫保持在26℃，每日喂食紅蟲(chóng)兩次，每2 d換水一次，保持溶液所設(shè)置的暴露濃度不變，并保持缸中水是流動(dòng)循環(huán)的。BaP暴露分別于2010年6月18日—7月30日(持續(xù)暴露6周)和2010年6月18日—8月13日(持續(xù)暴露8周)。

圖1 食蚊魚(yú)3種求偶行為Fig 1 3 kinds of courtship behavior of mosquitofish

Cd2+暴露:設(shè)定5和500 nmol/L濃度暴露組，另設(shè)濃度為0的對(duì)照組，每組雄魚(yú)與雌魚(yú)各15尾，分別放入3個(gè)15L的40 cm×25 cm×30 cm的塑料魚(yú)缸中。暴露期間保持溫度在26℃，每日喂食紅蟲(chóng)兩次，每2 d換水一次，保持溶液所設(shè)置的暴露濃度不變，并保持缸中水是流動(dòng)循環(huán)的。Cd2+暴露分別于2010年6月27日—8月8日(持續(xù)暴露6周)和2010年6月18日—8月22日(持續(xù)暴露8周)。

1.3.2 食蚊魚(yú)配對(duì)求偶行為實(shí)驗(yàn)分組

分別從暴露BaP和Cd2+6周后不同濃度組和對(duì)照組中隨機(jī)挑選健康雄魚(yú)和腹部帶有孕斑黑點(diǎn)的雌魚(yú)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分別將各組雌、雄魚(yú)分開(kāi)置于裝有15L清水的魚(yú)缸中適應(yīng)1 d時(shí)間。暴露8周的BaP和Cd2+組的食蚊魚(yú)也按上述方法先進(jìn)行處理。食蚊魚(yú)配對(duì)求偶行為的實(shí)驗(yàn)分組見(jiàn)表1和表2，每組至少觀(guān)察5對(duì)(n=5)，最高達(dá)9對(duì)(n=9)。分別記錄暴露6周和8周后食蚊魚(yú)的求偶行為。

對(duì)食蚊魚(yú)3種求偶行為的觀(guān)察時(shí)間共3 d，每天從上午8點(diǎn)至12點(diǎn)進(jìn)行。將已分開(kāi)的雌、雄個(gè)體按照觀(guān)察分組的設(shè)定，各隨機(jī)選取1♂：1♀配對(duì)放入同一魚(yú)缸中。混合1 min后開(kāi)始用JVC錄像機(jī)進(jìn)行錄像，每對(duì)錄像時(shí)間是10 min。每組進(jìn)行3次錄像，錄像完畢后，將食蚊魚(yú)放入原來(lái)暴露時(shí)期的魚(yú)缸中。同時(shí)分別進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

表1 食蚊魚(yú)BaP和Cd2+暴露6周實(shí)驗(yàn)分組Table 1 Experimental groups of mosquitofish exposed to BaP and Cd2+for 6 weeks

表2 食蚊魚(yú)BaP和Cd2+暴露8周實(shí)驗(yàn)分組Table 2 Experimental groups of mosquitofish exposed to BaP and Cd2+for 8 weeks

將記錄的數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS17.0及Excel計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。除此之外，還進(jìn)行單因素方差(ANOVA)分析的方差齊性檢驗(yàn)分析總體樣本方差的差異性，當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異顯著，再用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)每?jī)山M間的差異性。所有數(shù)據(jù)和圖表均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示。

2 結(jié)果

2.1 雄魚(yú)BaP暴露后對(duì)其求偶行為的影響

如圖2-A所示，經(jīng)BaP暴露6周后雄魚(yú)對(duì)雌魚(yú)其3種求偶行為平均次數(shù)均減少，且隨著暴露濃度的增加而依次降低。實(shí)驗(yàn)組1(BaP 0.1 μg/L)和實(shí)驗(yàn)組2(BaP 100 μg/L)與對(duì)照組相比，在交配次數(shù)上明顯低于對(duì)照組(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組2在靠近行為次數(shù)上較對(duì)照組減少明顯(P＜0.05)。BaP暴露6周后食蚊魚(yú)的追尾行為次數(shù)雖然有所下降，但與對(duì)照組比較并沒(méi)有較大差異(p＞0.05)。

1.3.3 錄像分析

通過(guò)錄像統(tǒng)計(jì)食蚊魚(yú)3種求偶行為的次數(shù)，包括:1)靠近行為;2)交配行為;3)追尾行為。食蚊魚(yú)的繁殖行為曾有報(bào)道［6］，結(jié)合本研究的觀(guān)察，本文也將雄魚(yú)繁殖行為區(qū)分為3種方式:靠近行為(圖1-2)、交配行為(圖1-3，1-4，1-5，1-6)和追尾行為(圖1-7，1-8)。當(dāng)雄魚(yú)表現(xiàn)為靠近行為時(shí)，它會(huì)跟在雌魚(yú)后面游動(dòng)，頭部正對(duì)著雌魚(yú)的生殖口。交配通常是雄魚(yú)生殖鰭強(qiáng)行插入雌魚(yú)生殖孔。在這個(gè)過(guò)程中，雄魚(yú)從后方靠近雌魚(yú)，用力把生殖鰭插入雌魚(yú)的生殖管里［7］。而追尾行為是靠近行為里的一種，這時(shí)雄魚(yú)會(huì)緊挨著雌魚(yú)的生殖口并且快速跟隨雌魚(yú)游動(dòng)。本文詳細(xì)記錄其觀(guān)察結(jié)果，以上的3種求偶行為在錄像中可以清楚地分辨出來(lái)。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)

圖2 BaP暴露雄、雌魚(yú)6周或8周后其對(duì)雄魚(yú)求偶行為(次數(shù)/小時(shí))的影響Fig 2 Effects on the courtship behavior frequency of male mosquitofish exposed to BaP after 6 and 8 weeks

如圖2-B所示，實(shí)驗(yàn)組7雄魚(yú)暴露在BaP 0.1 μg/L 8周后其較對(duì)照組雄魚(yú)對(duì)雌魚(yú)的3種求偶行為平均次數(shù)下降，其中靠近次數(shù)遠(yuǎn)少于對(duì)照組，兩組間在靠近次數(shù)上差異非常顯著(P＜0.01)。表明雄魚(yú)在低濃度BaP暴露8周后其求偶行為，尤其是靠近行為受到影響明顯且次數(shù)降低。

2.2 雌魚(yú)BaP暴露后對(duì)雄魚(yú)向其求偶行為的影響

如圖2-C所示，實(shí)驗(yàn)組3雌魚(yú)經(jīng)BaP 0.1 μg/L暴露6周后，雄魚(yú)向其靠近和交配行為平均次數(shù)比對(duì)照組中有所減少，追尾行為次數(shù)則略有上升。而實(shí)驗(yàn)組4雌魚(yú)經(jīng)BaP 100 μg/L暴露6周后，雄魚(yú)除了靠近行為平均次數(shù)增多，其他兩種求偶行為次數(shù)與對(duì)照組相近。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組3和實(shí)驗(yàn)組4在求偶行為次數(shù)上分別沒(méi)有明顯差異(P＞0.05)，表明雌魚(yú)暴露BaP后對(duì)雄魚(yú)向其求偶的行為不會(huì)產(chǎn)生明顯影響。

如圖2-D所示，實(shí)驗(yàn)組8雌魚(yú)經(jīng)BaP 0.1 μg/L暴露8周后，雄魚(yú)向其的求偶行為中靠近與交配行為平均次數(shù)低于對(duì)照組，追尾平均次數(shù)則維持相同水平。實(shí)驗(yàn)組9雌魚(yú)經(jīng)BaP 100 μg/L暴露8周后，雄魚(yú)向其的求偶行為中除了靠近平均次數(shù)略微下降外，交配與追尾的平均次數(shù)都比對(duì)照組有所上升。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組8和實(shí)驗(yàn)組9之間雖然分別沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)，但仍可見(jiàn)雌魚(yú)在低BaP濃度(0.1 μg/L)中暴露8周后，雄魚(yú)對(duì)其的求偶行為次數(shù)有所減少;而雌魚(yú)在高濃度BaP(100 μg/L)暴露8周后，雄魚(yú)對(duì)其求偶行為次數(shù)都呈升高的趨勢(shì)。

2.3 雌、雄魚(yú)BaP同時(shí)暴露后對(duì)雄魚(yú)向雌魚(yú)求偶行為的影響

如圖2-E所示，觀(guān)察了實(shí)驗(yàn)組5和實(shí)驗(yàn)組6雌、雄魚(yú)分別同時(shí)暴露在BaP濃度分別為0.1和100 μg/L的每對(duì)食蚊魚(yú)的求偶行為?？梢?jiàn)，實(shí)驗(yàn)組5雄魚(yú)向雌魚(yú)求偶行為平均次數(shù)比實(shí)驗(yàn)組6的次數(shù)多，兩組在交配平均次數(shù)上存在著極為明顯的差別，實(shí)驗(yàn)組6的交配平均次數(shù)為0，即在高濃度100 μg/L的BaP暴露6周后的雌魚(yú)對(duì)雄魚(yú)的交配行為起到了阻礙的作用。

2.4 雄魚(yú)Cd2+暴露后對(duì)其求偶行為的影響

由圖3-A可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)組1雄魚(yú)經(jīng)Cd2+5 nmol/L暴露6周后其對(duì)雌魚(yú)3種求偶行為平均次數(shù)低于對(duì)照組次數(shù)。實(shí)驗(yàn)組2雄魚(yú)經(jīng)Cd2+500 nmol/L暴露6周后對(duì)雌魚(yú)其靠近和交配平均次數(shù)比對(duì)照組少，但追尾平均次數(shù)有所增加，同時(shí)實(shí)驗(yàn)組2雄魚(yú)的3種求偶行為平均次數(shù)也比實(shí)驗(yàn)組1有所增加。但對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2之間的3種求偶行為分別都沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。表明在5和500 nmol/L的Cd2+中暴露6周后的雄魚(yú)，它的求偶行為沒(méi)有因?yàn)镃d2+暴露而受到較大的影響。

圖3-B所示，實(shí)驗(yàn)組7雄魚(yú)暴露在Cd2+5 nmol/L和實(shí)驗(yàn)組8雄魚(yú)暴露在Cd2+500 nmol/L 8周后分別與對(duì)照組比較，3種求偶行為平均次數(shù)存在顯著差異(P＜0.05)，其中交配平均次數(shù)存在極顯著差異(P＜0.01)。求偶行為次數(shù)隨著暴露Cd2+濃度的增加而下降，暴露8周Cd2+后的雄魚(yú)其求偶行為受到較大影響而減少。

圖3 Cd2+暴露雄、雌魚(yú)6周或8周后其對(duì)雄魚(yú)求偶行為(平均次數(shù)/小時(shí))的影響。Fig 3 Effects on the courtship behavior frequency of male mosquitofish exposed to Cd2+after 6 and 8 weeks

2.5 雌魚(yú)Cd2+暴露后對(duì)雄魚(yú)向其求偶行為的影響

由圖3-C所示，實(shí)驗(yàn)組3雌魚(yú)暴露在Cd2+5 nmol/L 6周后，與對(duì)照組相比，雄魚(yú)對(duì)其的3種求偶行為平均次數(shù)相近;而實(shí)驗(yàn)組4雌魚(yú)暴露在Cd2+500 nmol/L 6周后與對(duì)照組相比，雄魚(yú)對(duì)其的3種行為次數(shù)均有所增加。但是對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組3和實(shí)驗(yàn)組4分別對(duì)照，其差異都不顯著(P＞0.05)，表明雌性食蚊魚(yú)暴露在Cd2+中，并不影響雄魚(yú)對(duì)其求偶行為。

圖3-D所示，實(shí)驗(yàn)組9雌魚(yú)暴露在Cd2+5 nmol/L和實(shí)驗(yàn)組10雌魚(yú)暴露在Cd2+500 nmol/L 8周后，與對(duì)照組相比，雄魚(yú)對(duì)其的靠近平均次數(shù)較對(duì)照組減少，交配平均次數(shù)保持穩(wěn)定，追尾平均次數(shù)在實(shí)驗(yàn)組9略為上升，實(shí)驗(yàn)組10稍微下降，但均比對(duì)照組高。實(shí)驗(yàn)組9和實(shí)驗(yàn)組10雄魚(yú)的求偶行為平均次數(shù)與對(duì)照組不存在顯著差異(P＞0.05)，說(shuō)明分別暴露在濃度為5 nmol/L和500 nmol/L的Cd2+中的雌魚(yú)對(duì)雄魚(yú)求偶行為影響不大。

2.6 雌、雄魚(yú)Cd2+同時(shí)暴露后對(duì)雄魚(yú)向雌魚(yú)求偶行為的影響

圖3-E所示，與對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組5雌雄魚(yú)同時(shí)暴露在5 nmol/L Cd2+中，其雄魚(yú)向雌魚(yú)求偶的行為平均次數(shù)少于實(shí)驗(yàn)組6雌雄魚(yú)同時(shí)暴露在500 nmol/L Cd2+的次數(shù)。尤其是在交配行為次數(shù)上，分別暴露在Cd2+濃度為500 nmol/L的雌雄魚(yú)是暴露在5 nmol/L Cd2+濃度的雌雄魚(yú)的約4倍，但是與對(duì)照組相比，這兩實(shí)驗(yàn)組雄魚(yú)向雌魚(yú)求偶的3種行為分別都沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)，表明雌雄魚(yú)都暴露在這兩種濃度的Cd2+時(shí)，他們的求偶行為次數(shù)不會(huì)因?yàn)楸┞稘舛炔煌a(chǎn)生明顯差異。

圖3-F可知，雌雄魚(yú)都在Cd2+中暴露8周后，實(shí)驗(yàn)組11(Cd2+5 nmol/L)的食蚊魚(yú)的求偶行為平均次數(shù)明顯高于實(shí)驗(yàn)組12(Cd2+500 nmol/L)的食蚊魚(yú)，尤其在靠近平均次數(shù)上兩組間存在極為明顯差別(P＜0.01)。雌雄魚(yú)在Cd2+500 nmol/L暴露8周后比在Cd2+5 nmol/L暴露時(shí)雄性食蚊魚(yú)在靠近雌魚(yú)行為上有明顯減少，但其他兩種行為沒(méi)有太大變化，表明實(shí)驗(yàn)組12雄魚(yú)的靠近行為是因?yàn)楸┞稘舛容^高而受到顯著影響，其下降明顯。

3 討論

3.1 BaP暴露對(duì)雄性食蚊魚(yú)求偶行為的影響

雄魚(yú)暴露在BaP中對(duì)其求偶行為影響很大，且隨著暴露濃度增加與暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，其求偶行為與對(duì)照組的雄魚(yú)相比呈下降趨勢(shì)?？拷袨樵谇笈贾邢扔谧肺残袨槌霈F(xiàn)［11］。一般來(lái)說(shuō)，雄魚(yú)會(huì)嘗試多次交配，但是只有很少的一部分交配行為能夠成功將精子轉(zhuǎn)移到雌魚(yú)體內(nèi)［12］。通過(guò)BaP暴露各組實(shí)驗(yàn)可知，這3種求偶行為平均次數(shù)依次是:靠近行為＞交配行為＞追尾行為。在較低濃度(0.1 μg/L)就已經(jīng)對(duì)雄魚(yú)交配行為有明顯抑制作用，在較高濃度(100 μg/L)中雄魚(yú)的靠近行為也開(kāi)始顯著下降。也就是說(shuō)在0.1 μg/L的BaP暴露6周后的雄性食蚊魚(yú)的求偶行為已經(jīng)受到抑制作用。食蚊魚(yú)求偶行為與魚(yú)體內(nèi)的睪酮濃度水平相關(guān)性表明，求偶行為至少有部分是受到雄激素的的控制［11］。有研究表明，雄性激素在魚(yú)類(lèi)和其他脊椎動(dòng)物的求偶行為中有重要作用［11］。雄魚(yú)的求偶行為會(huì)因?yàn)槿コ松诚俣艿礁蓴_或消失，求偶行為也可在雄性激素調(diào)節(jié)下恢復(fù)［11］。由于BaP主要影響動(dòng)物的雄激素分泌系統(tǒng)，且暴露BaP后的雄魚(yú)求偶行為的減少，推測(cè)BaP可能減少雄魚(yú)體內(nèi)雄激素的分泌水平，從而在一定程度上降低了雄魚(yú)的求偶行為。雄魚(yú)求偶行為的減少會(huì)使得雌魚(yú)懷孕的機(jī)率也隨之減少。

本實(shí)驗(yàn)中，雌魚(yú)暴露在BaP中對(duì)雄魚(yú)的求偶行為與對(duì)照組的求偶行為沒(méi)有顯著差異，但是無(wú)論暴露時(shí)間是6周還是8周，在較低濃度一組(0.1 μg/L)，雄魚(yú)對(duì)其3種求偶行為有不同程度地減少，而在較高濃度一組(100 μg/L)，雄魚(yú)對(duì)其求偶行為次數(shù)比前者有所增加。推斷，雌魚(yú)無(wú)論暴露在高濃度或低濃度的BaP時(shí)，對(duì)雌魚(yú)雌激素的分泌都沒(méi)有產(chǎn)生明顯的作用，低濃度中的求偶行為減少或高濃度中的求偶行為有所提高，有可能是由于受到樣本個(gè)體間差異的影響所致。懷孕的雌魚(yú)在腹部有一個(gè)明顯的妊娠黑點(diǎn)(孕斑)，它會(huì)隨著懷孕的過(guò)程逐漸擴(kuò)大［12］。Peden證實(shí)雌魚(yú)的生殖口附近的妊娠黑點(diǎn)能夠在求偶過(guò)程中吸引雄魚(yú)［13］。在本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，雄魚(yú)對(duì)妊娠黑點(diǎn)較大的雌魚(yú)求偶行為次數(shù)比雌魚(yú)腹部黑點(diǎn)較小的多，原因可能是除了BaP能夠提高雌激素分泌外，雌魚(yú)的雌激素分泌本身會(huì)隨著懷孕的過(guò)程而增加，從而對(duì)雄魚(yú)的吸引加強(qiáng)。但是本文發(fā)現(xiàn)，妊娠黑點(diǎn)的大小不會(huì)對(duì)雄魚(yú)求偶行為產(chǎn)生較大的影響(P＞0.05)。

將雄魚(yú)與雌魚(yú)同時(shí)暴露在濃度為100 μg/L的BaP中6周，雄魚(yú)的求偶行為比暴露同樣時(shí)間濃度為0.1 μg/L的要低很多，其中暴露100 μg/L的食蚊魚(yú)交配平均次數(shù)為0，表明將雄魚(yú)和雌魚(yú)同時(shí)暴露在較高濃度的BaP中，雄魚(yú)的求偶行為受到顯著抑制。原因是由于高濃度BaP對(duì)雄激素水平的干擾，使得與之相關(guān)的求偶行為也受到了一定程度影響，特別是交配行為幾乎不出現(xiàn)。在BaP暴露8周后，濃度為100 μg/L組中雄魚(yú)全部死亡，導(dǎo)致本實(shí)驗(yàn)設(shè)置8周后100 μg/L組的缺失，也說(shuō)明暴露在較高濃度的BaP(100 μg/L)8周后，還會(huì)對(duì)雄魚(yú)有嚴(yán)重的致死效應(yīng)。此外本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，水溫與食蚊魚(yú)的求偶行為也有密切相關(guān)，本文發(fā)現(xiàn)，暴露實(shí)驗(yàn)持續(xù)至8周雄魚(yú)的3種求偶行為都比6周的要高。原因應(yīng)該是與水溫升高有關(guān)。有文獻(xiàn)指出，溫度和日照是調(diào)節(jié)硬骨魚(yú)類(lèi)年繁殖周期的基本環(huán)境影響因素。雌性食蚊魚(yú)在春季開(kāi)始繁殖活動(dòng)是與水溫逐漸升高有關(guān)，而繁殖期的的結(jié)束是由日照長(zhǎng)度變短引起的［14］。

3.2 Cd2+暴露對(duì)食蚊魚(yú)求偶行為的影響

暴露于Cd2+各組實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)，雄魚(yú)3種求偶行為平均次數(shù)依次是:靠近行為＞交配行為＞追尾行為。雄魚(yú)暴露在Cd2+中6周后，在低濃度(5 nmol/L)的求偶行為均比對(duì)照組減少，而高濃度(500 nmol/L)求偶行為則有所上升。但對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組間不存在顯著差異性說(shuō)明可能是由于個(gè)體存在的差異導(dǎo)致。而暴露在Cd2+8周后，無(wú)論是低濃度組還是高濃度組與對(duì)照組比較都出現(xiàn)極為顯著的差異，可能是暴露8周后，Cd2+對(duì)雄魚(yú)求偶行為的抑制作用才變得十分明顯。有研究表明Cd2+具有雌激素活性，也被稱(chēng)為環(huán)境雌激素，長(zhǎng)期暴露下可能會(huì)擾亂雄魚(yú)的雄性激素分泌，導(dǎo)致雄魚(yú)求偶行為減少［15］。

雌魚(yú)暴露在低濃度(5 nmol/L)Cd2+中6周和8周后，對(duì)雄魚(yú)求偶行為產(chǎn)生影響很小。而暴露在高濃度(500 nmol/L)6周和8周后則能提高雄魚(yú)對(duì)其的求偶行為，雖然暴露6周及8周的求偶行為與對(duì)照組沒(méi)有差異，但由于Cd2+能夠影響雌激素分泌系統(tǒng)，所以可能在高濃度下對(duì)雌魚(yú)的雌激素分泌會(huì)有促進(jìn)作用。將雄魚(yú)和雌魚(yú)暴露在高濃度(500 nmol/L)的Cd2+中，求偶行為都比低濃度(5 nmol/L)有所上升，尤其表現(xiàn)在交配次數(shù)上。但是暴露6周的兩組間沒(méi)有顯著差異，可能是因?yàn)樵贑d2+中暴露6周的雄魚(yú)及雌魚(yú)，他們的性激素分泌系統(tǒng)沒(méi)有受到明顯影響，只是個(gè)體間存在的差異所致。但是暴露8周后，高濃度的求偶行為都比低濃度的要低得多，且在靠近行為上有顯著差異。可能是因?yàn)楸┞稌r(shí)間增加后，Cd2+對(duì)食蚊魚(yú)的性激素分泌系統(tǒng)的影響表現(xiàn)明顯。雖然暴露在高濃度8周可能促使雌魚(yú)的雌激素分泌增加，但是此時(shí)雄魚(yú)的雄激素分泌受到嚴(yán)重干擾，所以最終雄魚(yú)與雌魚(yú)均暴露在高濃度8周后，它們的求偶行為下降明顯。

4 結(jié)論

雄性食蚊魚(yú)暴露在BaP及Cd2+中，其求偶行為隨著暴露濃度的升高和暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。雌性食蚊魚(yú)暴露在BaP及Cd2+中，不影響雄魚(yú)對(duì)其求偶行為。水體中的BaP及Cd2+主要影響雄性食蚊魚(yú)的求偶行為，推測(cè)這與BaP及Cd2+會(huì)明顯地影響雄魚(yú)體內(nèi)雄激素分泌水平有關(guān)。

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