宋秋荷 周會祥 賴雪花

(1 九江學院附屬醫(yī)院皮膚科；2九江學院附屬醫(yī)院檢驗科；3九江學院護理學院 江西九江 332000)

真菌培養(yǎng)并鑒定是臨床中真菌感染性疾病確診的金標準。經(jīng)典的培養(yǎng)方法有方塊法和鋼圈法兩種。但是在工作中，鋼材的缺乏難以取得，北京大學第一附屬醫(yī)院經(jīng)過臨床實踐，采用銅為材料，做成銅圈，采用銅圈法培養(yǎng)真菌并鑒定，臨床取得理想效果。我院自2010年12月起微生物實驗室配合皮膚科采用銅圈法進行真菌培養(yǎng)及鑒定120例樣本，取得滿意效果，現(xiàn)報告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料

120例患者均來自我院皮膚科門診，疑似淺部真菌感染，取皮損進行真菌培養(yǎng)。其中男56例，女64例；年齡8～72歲，平均34.2歲，病程3周～6年。檢測前2周未曾使用口服及外用抗真菌藥物。將患者所取皮損分成2份，一份做實驗組培養(yǎng)，即銅圈培養(yǎng)，另一份做對照組培養(yǎng)，即傳統(tǒng)的鋼圈培養(yǎng)，進行對比。

1.2 培養(yǎng)方法

(1)銅圈法(實驗組)：為校仿鋼圈法，取直徑約2cm、厚度約0.5cm有孔口的銅圈為材料，將其在酒精燈火焰上燒熱后蘸蠟趁熱粘在無菌載玻片上，用滅菌滴管吸取或直接倒取事先溶化好的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基量約占小鋼圈容量的1/2，并形成一個小斜面，注意避免氣泡。待培養(yǎng)基凝固后取一消毒蓋玻片，火焰加熱后，趁熱蓋在小鋼圈表面[1]。最后用接種針將待鑒定菌種通過通氣孔接種在培養(yǎng)基的邊緣(盡可能靠近蓋片)。其余注意事項同小方塊法。這種方法的優(yōu)點是形成一種封閉式培養(yǎng)，不易被污染。(2)鋼圈法(對照組)：同上，材料為鋼圈。

1.3 觀察方法

按照真菌小培養(yǎng)方法將兩種材質的培養(yǎng)樣本放置25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～14d，觀察菌落生長情況。有明顯菌落者進行乳酸棉蘭染色后置顯微鏡下觀察真菌小分生孢子形態(tài)，進行菌種確定及方法比對。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS13.0進行統(tǒng)計學處理，顯著性差異檢驗方法采用χ2檢驗。

2 結果

兩種方法真菌培養(yǎng)陽性率分別為：實驗組72.7%，對照組75%，卡方檢驗p>0.01；乳酸棉蘭染色后真菌小分生孢子陽性率分別為：實驗組93.02%，對照組91.11%，卡方檢驗p>0.01，詳見表1。兩種培養(yǎng)方法在真菌陽性率及菌落生長方面差異無統(tǒng)計學意義。

表1 兩種培養(yǎng)方法陽性率及分生孢子陽性率統(tǒng)計表

注：p1為兩組培養(yǎng)陽性率之統(tǒng)計比較，p1>0.01；p2為兩組培養(yǎng)陽性結果中小分生孢子乳酸棉蘭染色后陽性率統(tǒng)計比較，p1>0.01.

3 結論

鋼圈培養(yǎng)是20世紀70～90年代從國外引進并推廣的經(jīng)典的真菌小培養(yǎng)方法[1]，得到國內(nèi)外同行的認可并在臨床中廣泛使用，為臨床真菌菌種的培養(yǎng)和鑒定作出了重要的貢獻。但是，臨床工作中，由于各種因素，純度較高的鋼材培養(yǎng)圈難以獲得，而劣質的鋼圈對臨床培養(yǎng)結果有較大的影響。故許多實驗室的培養(yǎng)和鑒定工作收到限制。北京大學第一附屬醫(yī)院首先在國外經(jīng)驗的基礎上，率先在國內(nèi)引進銅質培養(yǎng)圈進行真菌菌種的小培養(yǎng)和鑒定工作取得滿意效果。我科于2010年開始引進并由此進行了大量的工作，經(jīng)過臨床的對比性實驗，確定并驗證了該方法的正確性和可靠性，值得推廣。

該項技術為我省第一家引進技術，同時也填補了我市的空白。

參考文獻：

[1] 徐紅，顧菊林. 醫(yī)學真菌檢驗[J]. 中國真菌學雜志，2006，1(2)：111.