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        連樸飲傳統(tǒng)煎劑與中藥配方顆粒中鹽酸小檗堿的含量比較Δ

        2013-12-03 03:36:02羅秀瓊遵義市食品藥品檢驗(yàn)所貴州遵義563002
        中國藥房 2013年7期
        關(guān)鍵詞:煎劑小檗鹽酸

        羅秀瓊,馮 華(遵義市食品藥品檢驗(yàn)所,貴州遵義 563002)

        連樸飲出自《霍亂論》,處方由制厚樸6 g、川黃連3 g、石菖蒲3 g、制半夏3 g、香豉9 g、焦梔子9 g、蘆根60 g組成,具有清熱化濕、理氣和中之功效,臨床上主要用于治療濕熱霍亂、上吐下瀉、胸脘痞悶、心煩躁擾、小便短赤、舌苔黃膩、脈滑等。處方中川黃連是毛茛科植物黃連的一種,為黃連的道地藥材。在此處方中川黃連量雖少但卻作為君藥發(fā)揮主要的藥理作用,而在川黃連中發(fā)揮主要功效且含量最高的成分為鹽酸小檗堿,約含5%~8%。用分煎法(中藥配方顆粒)與合煎法(傳統(tǒng)煎劑)制備的連樸飲中藥復(fù)方煎劑,其有效成分的含量有何變化,其藥理作用又有何變化,一直是中醫(yī)藥理論和臨床實(shí)踐中值得探討的課題;特別是近年來中藥配方顆粒逐漸在臨床上推廣應(yīng)用,更引起大家的重視。本試驗(yàn)以中藥經(jīng)方連樸飲中的有效成分鹽酸小檗堿作為指標(biāo),采用高效液相色譜(HPLC)法比較連樸飲傳統(tǒng)煎劑與中藥配方顆粒中鹽酸小檗堿的含量差異,以探索中藥復(fù)方制劑不同制法對其有效成分提取量的影響。

        1 材料

        1.1 儀器

        1525型HPLC儀、紫外檢測器(美國Waters公司);KQ-300 DE型超聲儀(北京中儀友信科技有限公司)。

        1.2 試劑

        鹽酸小檗堿對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:110749-200572);甲醇、乙腈為色譜純,水為娃哈哈純凈水。

        1.3 藥材

        制厚樸、川黃連、石菖蒲、制半夏、香豉、焦梔子、蘆根均由貴州遵義市醫(yī)藥有限公司提供,均經(jīng)遵義市食品藥品檢驗(yàn)所鄧順超副主任中藥師鑒定為真品,均符合2010年版《中國藥典》(一部)規(guī)定;中藥配方顆粒由貴州省三仁堂藥業(yè)有限公司制備。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 處方與煎制

        2.1.1 處方 制厚樸6 g、川黃連3 g、石菖蒲3 g、制半夏3 g、香豉9 g、焦梔子9 g、蘆根60 g。

        2.1.2 傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)的煎制 按處方取各藥材,加相當(dāng)于藥材8倍量的水煎煮,保持微沸30 min,倒出煎液;藥渣再加8倍量的水煎煮20 min。合并2次煎液,減壓干燥成干粉。

        2.1.3 中藥配方顆粒(分煎劑)的煎制 分別稱取上述處方量的藥材,分別加8倍量的水煎煮2次,每次保持微沸30 min,制備各藥材的煎液,減壓干燥成干粉,分別制粒后混勻。

        兩者的干粉率均約20%。

        2.2 色譜條件

        色譜柱:Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50,V/V)(每100 ml加十二烷基磺酸鈉0.1 g);流速:1.0 ml/min;檢測波長:265 nm[1-3];柱溫:30℃。

        2.3 溶液的制備

        2.3.1 對照品貯備液 精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量,加甲醇制成每1 ml含鹽酸小檗堿1 mg的溶液,作為對照品貯備液。

        2.3.2 傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)的供試品溶液 取合煎法制得的干粉約2.0 g,精密稱定,置100 ml量瓶中,用適量開水溶解,放冷后定容。精密吸取5 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇適量,超聲處理(功率:250 W,頻率:20 kHz)25 min,取出,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,取續(xù)濾液,用0.45 μm微孔濾膜濾過,即得傳統(tǒng)煎劑的供試品溶液。

        2.3.3 中藥配方顆粒(分煎劑)的供試品溶液 稱取分煎法制得的中藥配方顆粒約2.0 g,精密稱定,照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備中藥配方顆粒的供試品溶液。

        2.3.4 陰性對照溶液 按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備不含川黃連的陰性樣品,再按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備陰性對照溶液。

        2.4 干擾試驗(yàn)

        取鹽酸小檗堿對照品溶液、傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)供試品溶液及不含川黃連的陰性對照溶液各20 μl注入HPLC儀測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在此色譜條件下,鹽酸小檗堿峰與其他組分峰分離完全,陰性對照在與鹽酸小檗堿峰相同的保留時(shí)間處無干擾。色譜見圖1。

        圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

        2.5 線性關(guān)系考察

        分別精密量取質(zhì)量濃度為1.0012 mg/ml的鹽酸小檗堿對照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,即得系列質(zhì)量濃度的鹽酸小檗堿對照品溶液,分別進(jìn)樣20 μl,照上述色譜條件測定峰面積。以進(jìn)樣量(x)為橫坐標(biāo),峰面積積分值(y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為y=5.0×106x+1.0×106(r=0.9992,n=5)。結(jié)果表明,鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在2.0~10.0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

        2.6 精密度試驗(yàn)

        精密吸取同一對照品溶液20 μl,按“2.2”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次,測定峰面積,結(jié)果,RSD=0.28%(n=5),表明儀器精密度良好。

        2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

        取同一供試品溶液[傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)]適量,分別于室溫下放置0、4、8、16、24h,取20μl進(jìn)樣,測定峰面積。結(jié)果,RSD=1.03%(n=5),表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

        精密稱取同一樣品[傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)]適量,按“2.3.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液,再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果,RSD=1.2%(n=6),表明本方法重復(fù)性良好。

        2.9 加樣回收率試驗(yàn)

        精密稱取已知含量(每1 g含7.96 mg)的[傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)]樣品粉末適量,共6份,分別置50 ml量瓶中,用適量開水溶解,再分別精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液(質(zhì)量濃度為1.661mg/ml)5ml,放冷后加甲醇定容,搖勻,取續(xù)濾液,用0.45 μm微孔濾膜濾過,按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,計(jì)算加樣回收率,結(jié)果見表1。

        表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Tab 1 Results of recovery tests(n=6)

        2.10 樣品含量測定

        分別按“2.1.2”、“2.1.3”項(xiàng)下制備方法各制備3份樣品,再分別按“2.3.2”、“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量,結(jié)果見表2。

        表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)Tab 2 Results of content determination of samples(n=3)

        由表2可見,連樸飲分煎劑中鹽酸小檗堿的平均含量比合煎劑高。

        3 討論

        采用HPLC法測定中藥復(fù)方制劑中鹽酸小檗堿的含量,文獻(xiàn)報(bào)道可用多種不同組成的流動(dòng)相系統(tǒng)[4-7]。本試驗(yàn)參考文獻(xiàn)和《中國藥典》方法,選用乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50,V/V)(每100 ml加十二烷基磺酸鈉0.1 g)作為流動(dòng)相。結(jié)果表明,鹽酸小檗堿峰形較為理想,與雜質(zhì)峰能達(dá)到基線分離。

        連樸飲傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)與中藥配方顆粒(分煎劑)中鹽酸小檗堿的含量比較結(jié)果表明,中藥配方顆粒(分煎劑)比傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)中有效成分鹽酸小檗堿的含量高。原因可能是傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)中各藥材之間的相互化學(xué)作用,如沉淀反應(yīng)等導(dǎo)致其結(jié)果偏低。傳統(tǒng)煎劑(合煎劑)中有效成分含量較低是否為一個(gè)普遍現(xiàn)象,還有待廣泛的研究。

        [1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:一部[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:286-287.

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