張建海，徐曉玉，馮彬彬，胡奎，謝世友，王海洋（1.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，重慶40410；.西南大學(xué)，重慶 400716）

間作套種（以下簡(jiǎn)稱“間種”）是指在一個(gè)生長(zhǎng)季內(nèi)，在同一塊田上分行或分帶相間種植2種或2種以上生育季節(jié)相近的植物的種植方式。目前，中藥材的間種主要集中在中藥材與糧食作物、果樹(shù)等之間，而中藥材之間的間種非常少，且間種對(duì)中藥材品質(zhì)有無(wú)影響尚未見(jiàn)報(bào)道。山銀花藥源植物之一灰氈毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）含有黃酮類、揮發(fā)油、有機(jī)酸、皂苷類等多種化學(xué)成分，具有抗病原微生物、解熱、保肝利膽等作用[1-5]。本課題組以重慶秀山隘口鎮(zhèn)為實(shí)驗(yàn)基地，研究間種野菊花（Chrysanthemum indicum L.）對(duì)山銀花產(chǎn)量與品質(zhì)的影響。

1 材料

1.1 儀器

LC-20 AB高效液相色譜（HPLC）儀，含SPD-20紫外檢測(cè)器、Shimpack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱（日本島津公司）；KQ5200 E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；U-3010紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本日立公司）；JA2003 N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；HH.SYZ1-NI電熱恒溫水浴鍋（北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司）；SHB-ⅢS循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；摩爾超純水機(jī)（上海摩勒科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑

乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為去離子水；綠原酸、木犀草苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為110753-200413、111720-200603）；灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙對(duì)照品（四川省維克奇生物科技有限公司，批號(hào)分別為wkq10397、wkq10398，純度均≥98%）。

1.3 實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所

重慶秀山隘口鎮(zhèn)壩芒村山銀花研究基地；西南大學(xué)藥學(xué)院中藥研究所。

2 方法

2.1 間種栽培方法

在山銀花行間種植野菊花，種植密度分別為一行、兩行、四行野菊，以單種山銀花作為對(duì)照組。野菊花種植采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以氮肥量（尿素，A）、磷肥量（磷酸二氫鈣，B）、鉀肥量（硫酸鉀，C）、種植密度（D）為考察因素。山銀花正常施肥。山銀花種植的行間距為200 cm×200 cm，野菊花種植的行間距為40 cm×40 cm，每個(gè)種植小區(qū)面積為12.5 m2，共10個(gè)種植小區(qū)（其中，1、2、3小區(qū)間種一行；4、5、6小區(qū)間種兩行；7、8、9小區(qū)間種四行；10小區(qū)作為對(duì)照）。間種模式見(jiàn)圖1。正交試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表1。

圖1 間種模式圖Fig 1 Intercropping deograph

表1 正交試驗(yàn)因素與水平Tab 1 Factors and levels of orthogonal experiment

2.2 山銀花各期千蕾質(zhì)量測(cè)定

分別采收各樣地山銀花青條期（花蕾長(zhǎng)0.5～3.5 cm，似米粒，綠色）、三青期（花蕾長(zhǎng)3.0～4.5 cm，唇部已膨大，微向內(nèi)彎曲，綠色）、二白期（花蕾長(zhǎng)4.0～5.0 cm，唇部明顯膨大，向內(nèi)彎曲，綠白色）、大白期（花蕾長(zhǎng)5.0～6.0 cm，唇部綠白色，含苞待放）花蕾。各樣地隨機(jī)采收5株，每株采收100 g，采收后的樣品置于40℃烘箱烘至全干，分別測(cè)其千蕾質(zhì)量，測(cè)量5次，取平均值。

2.3 山銀花中綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

綠原酸是山銀花花蕾中的主要有效成分，根據(jù)綠原酸的理化性質(zhì)，采用筆者已研究確定的提取工藝條件和HPLC測(cè)定方法[6]，以綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)山銀花各期進(jìn)行檢測(cè)。

2.4 山銀花中木犀草苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

采用本課題組確定的方法[7]，以木犀草苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)山銀花各期進(jìn)行檢測(cè)。

2.5 山銀花中灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定參照2010版《中國(guó)藥典》（一部）山銀花項(xiàng)下[8]方法進(jìn)行。

3 結(jié)果與分析

3.1 山銀花各期千蕾質(zhì)量

將各樣地山銀花各期花蕾稱其千蕾質(zhì)量，并進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 各期山銀花千蕾質(zhì)量Fig 2 Weight of alabastrum of Lonicerae Flos at different stages

山銀花的收獲期是大白期。從圖2中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號(hào)地）時(shí)，4個(gè)時(shí)期花蕾的千蕾質(zhì)量均顯著高于對(duì)照組（10號(hào)地），暗示干物質(zhì)的積累從青條期到大白期逐漸增大。其中，三青期到二白期干物質(zhì)積累最多，二白期到大白期干物質(zhì)積累較少。因此，從三青期到二白期是山銀花生長(zhǎng)最關(guān)鍵的時(shí)期，對(duì)山銀花品質(zhì)有利。

3.2 山銀花各期綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

取各樣地山銀花烘干后的干燥花蕾，按“2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并對(duì)各期數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 各期綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)Fig 3 Contents of chlorogenic acid at different stages

從圖3中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號(hào)地）時(shí)，二白期花蕾中綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著高于對(duì)照組（10號(hào)地）；青條期、三青期和大白期花蕾中綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均高于對(duì)照組，其中青條期4、6號(hào)地，三青期和大白期4、5號(hào)地與對(duì)照品比較差異有顯著性。

3.3 山銀花各期木犀草苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

取各樣地山銀花烘干后的干燥花蕾，按“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定木犀草苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并對(duì)各期數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)圖4。

從圖4中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號(hào)地）時(shí)，4個(gè)時(shí)期花蕾中木犀草苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均高于對(duì)照組（10號(hào)地），差異有顯著性。

圖4 各期木犀草苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)Fig 4 Contents of galuteolin at different stages

3.4 山銀花各期灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

取各樣地山銀花烘干后的干燥花蕾，按“2.5”項(xiàng)下方法測(cè)定灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并對(duì)各期數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，結(jié)果分別見(jiàn)圖5、圖6。

圖5 各期灰氈毛忍冬皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)Fig 5 Contents of macranthoidin B at different stages

圖6 各期川續(xù)斷皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)Fig 6 Contents of dipsacoside B at different stages

從圖5中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號(hào)地）時(shí)，4個(gè)時(shí)期花蕾中灰氈毛忍冬皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著高于對(duì)照組（10號(hào)地）。從圖6中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號(hào)地）時(shí)，二白期和大白期花蕾中川續(xù)斷皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著高于對(duì)照組（10號(hào)地）；青條期和三青期花蕾中川續(xù)斷皂苷乙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均高于對(duì)照組，其中4、6號(hào)地與對(duì)照品比較差異有顯著性。

4 討論

4.1 間種野菊花對(duì)山銀花產(chǎn)量的影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，間種野菊花對(duì)山銀花產(chǎn)量有一定影響。其中，間種兩行野菊花可以顯著增加山銀花千蕾質(zhì)量；間種一行野菊花沒(méi)有顯著影響；間種四行野菊花使山銀花千蕾質(zhì)量有下降趨勢(shì)。究其原因：第一，本試驗(yàn)選擇的是三年生或四年生的山銀花，植株相對(duì)較小、行間距較大，間種一行野菊花對(duì)山銀花產(chǎn)量影響很?。坏诙?，從栽培時(shí)間來(lái)看，野菊花一般是在三月底四月初移栽，這時(shí)植株長(zhǎng)得也比較小，到五月底六月初才逐漸進(jìn)入生長(zhǎng)旺盛期，而這個(gè)時(shí)期山銀花的花蕾已經(jīng)可以采摘，二者生長(zhǎng)時(shí)期的差異導(dǎo)致間種野菊花對(duì)山銀花產(chǎn)量沒(méi)有太大的影響；第三，兩行種植的施肥可能影響到山銀花的生長(zhǎng)，使山銀花產(chǎn)量增加，四行種植由于密度較大而影響到山銀花的產(chǎn)量。對(duì)于在山銀花生長(zhǎng)旺盛期種植野菊花是否對(duì)其產(chǎn)量有影響是下一步要研究的主要內(nèi)容。

4.2 間種野菊花對(duì)山銀花品質(zhì)的影響

綠原酸、木犀草苷、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙是山銀花中的主要藥效成分。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，間種野菊花對(duì)山銀花中4種主要成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)有不同程度的影響。間種兩行野菊花可顯著提高4種成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；間種一行或四行野菊花與對(duì)照組比較差異不大，其中間種四行使4種成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)有下降趨勢(shì)。究其原因：間種兩行野菊花的行間距合適，2種藥材之間對(duì)水肥競(jìng)爭(zhēng)較??；間種一行野菊花的行間距較大，與單種條件基本相似；而間種四行野菊花由于行間距較小，較高密度間種可能使2種藥材對(duì)肥料等資源有所競(jìng)爭(zhēng)，具體影響因素有待進(jìn)一步研究。上述結(jié)果表明，三年期或四年期山銀花與野菊花間種以二行野菊花為最佳。

另外，本試驗(yàn)主要探討間種野菊花密度對(duì)山銀花產(chǎn)量與品質(zhì)的影響，對(duì)于肥料等因素的影響將另行研究。

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