李素萍，矯 瑋

1.Hanshan Normal University，Chaozhou 521041，China；2.Beijing Sport University，Beijing 100084，China.

乳腺癌嚴(yán)重威脅女性健康，其防治一直是研究的熱點(diǎn)。隨著醫(yī)學(xué)模式的演變，乳腺癌的治療觀念也在不斷更新。為了降低乳腺癌患者的死亡率、提高生存率，并力求維持患者身體的完整性，改善其生存質(zhì)量，人們一直在努力尋找新的治療手段?，F(xiàn)在，人們逐漸認(rèn)識(shí)到乳腺癌不僅是一種“慢性病”，也是一種“生活方式病”。對(duì)于糖尿病、高血壓等慢性疾病，運(yùn)動(dòng)在其防治中作用突出［11］，目前也有研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)在乳腺癌的預(yù)防、臨床治療后的康復(fù)中有積極作用［10，14，24］。然而，鑒于癌癥的特殊性和復(fù)雜性，有關(guān)運(yùn)動(dòng)對(duì)乳腺癌的治療有何影響，鮮有相關(guān)研究。運(yùn)動(dòng)可以加速血流速度，以往人們擔(dān)心運(yùn)動(dòng)同樣也會(huì)加速腫瘤組織的血液供應(yīng)，使得瘤細(xì)胞增殖加快，加上癌癥患者本身體能下降，因此，正處在治療期的乳腺癌患者能否進(jìn)行運(yùn)動(dòng)，學(xué)界一直持謹(jǐn)慎態(tài)度。如果這些患者可以運(yùn)動(dòng)，應(yīng)該以什么樣的方式、強(qiáng)度，以及頻率去運(yùn)動(dòng)，都是困惑學(xué)界的問(wèn)題。近年，有研究報(bào)道，有氧運(yùn)動(dòng)可以使乳腺癌組織的微環(huán)境“正常化”［16］，這啟示我們，癌細(xì)胞微環(huán)境的正?；蛟S可以影響乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)；運(yùn)動(dòng)或許可以作為傳統(tǒng)療法的輔助手段，在乳腺癌的治療中起一定的作用。

紫杉醇是針對(duì)G2晚期、M期的特異性藥物，可干擾微管蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞正常有絲分裂的紡錘體形成，將細(xì)胞周期阻斷在G2和 M期，導(dǎo)致癌細(xì)胞的死亡［5］。NF－κB的過(guò)度激活不僅能保護(hù)惡變細(xì)胞免受凋亡，從而促進(jìn)腫瘤形成，還能促進(jìn)癌細(xì)胞增殖。NF－κB的異?；罨侨橄侔┌l(fā)生、發(fā)展的重要病理、生理機(jī)制，這也是當(dāng)前乳腺癌治療的一個(gè)熱點(diǎn)。規(guī)律的中等強(qiáng)度鍛煉能降低與年齡有關(guān)的 NF－κB活性和p50、p65亞基的表達(dá)［21］，運(yùn)動(dòng)能否調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞NF－κB的活性？能否增強(qiáng)抗癌藥物的療效？本研究通過(guò)制備4T1小鼠乳腺癌模型，施予規(guī)律的有氧運(yùn)動(dòng)、紫杉醇的單獨(dú)及聯(lián)合干預(yù)，以NF－κBp65、細(xì)胞凋亡為觀測(cè)點(diǎn)，研究運(yùn)動(dòng)及其與紫杉醇聯(lián)合使用在乳腺癌治療期的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞株

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)BALB／c小鼠（6～8周齡，雌性），購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證編號(hào)：SCXK（京）2006－0009。小鼠飼養(yǎng)在北京市腫瘤防治研究所動(dòng)物房（屏障環(huán)境），許可證號(hào)：SYXK（京）2011－0015。小鼠每籠4只群養(yǎng)，自由攝食、飲水，室溫22℃～24℃，濕度50%±10%，人工12／12晝夜節(jié)律光照。每3天更換一次鼠料及清理飼養(yǎng)籠具。

2.細(xì)胞株 ：4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)，按常規(guī)貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)方法培養(yǎng)，收集細(xì)胞后，用1640培養(yǎng)液洗滌2次，臺(tái)盼藍(lán)實(shí)驗(yàn)證實(shí)細(xì)胞活力≥95%，用1640培養(yǎng)液調(diào)整活細(xì)胞濃度為4×105／ml，備用。

1.2 主要儀器設(shè)備

SLY－RTML六道動(dòng)物跑臺(tái)、OLYMPUS IX51倒置顯微鏡、日本AIRTECH超凈工作臺(tái)、HERA cell 150CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀。

1.3 主要試劑

紫杉醇注射液（北京協(xié)和藥廠）、ANXN V FITC APOPTOSIS DTEC KIT I（美 國(guó) BD 公 司 ）、NFκB p65 抗 體（BS1253）和IκB－α抗體（BS3601）（美國(guó) Bioworld公司）、PIκBα抗體（9246）（美國(guó) CST 公司）。

1.4 乳腺癌皮下移植模型的制備

碘伏消毒小鼠接種部位，用1ml注射器吸取4T1細(xì)胞懸液0.2ml（含有0.8×105個(gè)細(xì)胞）接種于小鼠右腋皮下，當(dāng)腫瘤大小2mm×2mm時(shí)，判斷為模型建立成功［8］。

1.5 動(dòng)物分組及干預(yù)方案

小鼠購(gòu)入安靜飼養(yǎng)3天后，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組（N，8只）和模型組（64只）。模型組接種4T1乳腺癌細(xì)胞，建立小鼠乳腺癌模型。造模期間，運(yùn)動(dòng)干預(yù)組以7m／min的速度進(jìn)行適應(yīng)性跑步。建模成功后，按體重分為生理鹽水組（C）、紫杉醇組（P）、運(yùn)動(dòng)組（E）和聯(lián)合組（EP），共4組，每組16只（實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，隨機(jī)取8只用于指標(biāo)測(cè)試，其余用于生存期的觀察）。各組之間體重沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）（表1）。P組和EP組小鼠腹腔內(nèi)注射紫素（紫杉醇注射液，PACLITAXEL INJECTION，產(chǎn)品批號(hào)：110401，無(wú)色至淡黃色澄明黏稠的液體，規(guī)格為5ml：30 mg，北京協(xié)和藥廠，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字 H10980069），劑量為20mg／kg／w［23］，C組和 E組小鼠每周按體重腹腔內(nèi)注射等體積生理鹽水。E組和EP組小鼠以17m／min的速度（中 等強(qiáng)度）持 續(xù)運(yùn)動(dòng)［12］，跑臺(tái)坡 度為0°，運(yùn)動(dòng) 30 min／次，5次／周，共5周。在小鼠運(yùn)動(dòng)中不進(jìn)行電刺激。

表1 本研究干預(yù)前各組小鼠的體重一覽表Table 1 Body Weight of Mouse in Different Group before Experiment （X±S）

1.6 測(cè)試指標(biāo)

每周用游標(biāo)卡尺（精度0.02mm）測(cè)量荷瘤的最長(zhǎng)徑和最寬徑各2次，處死小鼠前測(cè)量1次最長(zhǎng)徑和最寬徑。按照公式［19］：V＝0.52×a×b2（a為荷瘤最長(zhǎng)徑，b為與a垂直的最寬徑）計(jì)算荷瘤體積。第5周干預(yù)結(jié)束后24h，各組隨機(jī)選取8只小鼠，處死小鼠后剝離瘤體，仔細(xì)去除瘤體表面的增生血管、被膜等結(jié)締組織后，稱重（g），分為兩份，一份制成單細(xì)胞懸液，采用Annexin V－FITC／PI復(fù)染法對(duì)荷瘤組織細(xì)胞的早期凋亡和晚期凋亡比例進(jìn)行檢測(cè)［7］。其實(shí)驗(yàn)原理是，在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）分布在脂質(zhì)雙分子層的內(nèi)側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，細(xì)胞膜首先發(fā)生翻轉(zhuǎn)，磷脂酰絲氨酸由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)，磷脂酰絲氨酸能與AnnexinⅤ發(fā)生特異性結(jié)合［7］。因此，Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一，而AnnexinⅤ不能穿過(guò)細(xì)胞膜，因此，正常細(xì)胞不能夠被AnnexinⅤ染上顏色。PI為核酸熒光染料，不能透過(guò)正常的細(xì)胞膜，只能進(jìn)入已經(jīng)破損的細(xì)胞膜，但在凋亡的中晚期細(xì)胞和壞死細(xì)胞，PI能夠通過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。因此，將Annexin V與PI匹配使用，就可以定量分析凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。

另一份采用Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)荷瘤小鼠荷瘤組織中 NF－κBp65、IκBα和 Phospho－IκBα的表達(dá)，具體方法如下：

1.配膠：根據(jù)目的蛋白的分子量，配制12%的分離膠，5%的濃縮膠。

2.上樣：每孔的上樣量為10μl，蛋白量為20μg。

3.電泳：樣品通過(guò)濃縮膠時(shí)恒壓90V，約20min；當(dāng)溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠后，電壓改為160V，通過(guò)預(yù)染蛋白marker來(lái)確定電泳停止時(shí)間。

4.轉(zhuǎn)膜：采用濕轉(zhuǎn)法。300mA恒流，使用0.45μm孔徑的 NC 膜，轉(zhuǎn) 膜 時(shí) 間：IκBα轉(zhuǎn) 膜 30min，P－IκBα轉(zhuǎn) 膜 40 min，NF－κBp65轉(zhuǎn)膜1.5h。轉(zhuǎn)膜完成后，用麗春紅S染色液對(duì)膜進(jìn)行染色，觀察轉(zhuǎn)膜效果。

5.封閉：將膜完全浸沒(méi)在3%的BSA－TBST中，室溫輕搖1h。

6.一 抗孵育：用3%的 BSA－TBST 稀 釋 一 抗，NF－κBp65和IκBα稀釋比例為1∶2 000，P－IκBα稀釋比例為1∶1 000，GAPDH稀釋比例為1∶5 000。室溫孵育10min，放4℃過(guò)夜。

7.洗膜：第2天從4℃冰箱中拿出膜，在室溫孵育30 min。棄去一抗，用TBST洗膜3次，每次10min。

8.二抗孵育：用5%的脫脂奶粉－TBST稀釋 HRP標(biāo)記的二抗，稀釋比例為1∶10 000，室溫輕搖40min。

9.洗膜：棄去二抗，用TBST洗膜3次，每次10min。

10.顯色反應(yīng)：將ECL加到膜上后反應(yīng)3～5min，膠片曝光10s～5min（曝光時(shí)間隨不同光強(qiáng)度而調(diào)整），顯影2min，定影。用自來(lái)水沖洗，去除殘留的定影液后，室溫晾干。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，利用SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)齊性用Tukey，不齊時(shí)采用Tamhane’s。生存時(shí)間采用Kaplan－Meier分析，用Log Rank檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，顯著性水平定在0.05和0.01。

2 結(jié)果

2.1 不同干預(yù)手段對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠瘤重與瘤體比的影響

EP組的瘤重和瘤體比小于C組的瘤重和瘤體比，有顯著性差異（P＜0.05），其他各組和C組相比，雖然瘤重和瘤體比都低于C組，但均無(wú)顯著性差異（P＞0.05，表2），提示運(yùn)動(dòng)聯(lián)合紫杉醇有較好的控瘤效果。

表2 本研究運(yùn)動(dòng)、紫杉醇及聯(lián)合干預(yù)對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠瘤重、瘤體比的影響一覽表Table 2 Tumor Weight and Ratio of Tumor Weitht and Body Weight in 4T1Mouse in Different Group （X±S，n＝8）

2.2 不同干預(yù)手段對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠荷瘤體積的影響

在第1周開(kāi)始干預(yù)前，各組小鼠荷瘤體積無(wú)明顯差異（P＞0.05），符合實(shí)驗(yàn)要求（圖1）。在前2周，各組荷瘤體積增長(zhǎng)緩慢。2周后，小鼠的荷瘤體積迅速增長(zhǎng)，到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，C組小鼠荷瘤體積最大，和C組相比，EP組的荷瘤體積縮小，差異顯著（P＜0.05，表3），提示運(yùn)動(dòng)聯(lián)合紫杉醇對(duì)荷瘤的增長(zhǎng)有一定的抑制作用。

表3 本研究運(yùn)動(dòng)、紫杉醇及聯(lián)合干預(yù)對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠荷瘤體積的影響一覽表Table 3 Changes of Tumor Volume in 4T1Mouse in Different Group （X±S，n＝8）

圖1 本研究運(yùn)動(dòng)、紫杉醇及聯(lián)合干預(yù)對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠荷瘤體積的影響示意圖Figure 1. Comparison of Tumor Volume of 4T1Mouse in Different Group

2.3 不同干預(yù)手段對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠生存時(shí)間的影響

P組和C組相比，中位生存時(shí)間的差異具有顯著性（P＜0.05），說(shuō)明紫杉醇可以延長(zhǎng)荷瘤小鼠的存活時(shí)間（表4、圖2）。E組、EP組和C組相比，差異非常顯著（P＜0.01），說(shuō)明荷瘤小鼠以17m／min的速度運(yùn)動(dòng)，能延長(zhǎng)其存活時(shí)間。EP組與P組和E組相比，其延長(zhǎng)生存時(shí)間的差異也非常顯著（P＜0.01），提示中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)聯(lián)合紫杉醇對(duì)延長(zhǎng)荷瘤小鼠的存活時(shí)間有較好的效果。

表4 本研究運(yùn)動(dòng)、紫杉醇及聯(lián)合干預(yù)對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠中位生存時(shí)間的影響一覽表Table 4 The Median Survival Time in 4T1Mouse in Different Group （n＝8）

圖2 本研究不同干預(yù)手段下的乳腺癌小鼠的生存曲線示意圖Figure 2. Comparison of Survival Time of Mouse in Different Group

2.4 不同干預(yù)手段對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠荷瘤組織細(xì)胞早、晚期凋亡的影響

與C組相比，EP組早期凋亡比例增加，有顯著性差異（P＜0.05），其他各組間相比，則無(wú)顯著差異（P＞0.05）（表5）。與C組相比，EP組晚期凋亡比例增加非常顯著（P＜0.01），與P組相比，EP組晚期凋亡比例增加顯著（P＜0.05），其他各組間相比，無(wú)顯著差異（P＞0.05，圖3）。

表5 本研究運(yùn)動(dòng)、紫杉醇及聯(lián)合干預(yù)對(duì)4T1小鼠荷瘤組織細(xì)胞早、晚期凋亡的影響一覽表Table 5 Proportion of Early and Late Apoptosis of Tumor Cell in 4T1Mouse in Different Group （X±S，n＝8）

2.5 不同干預(yù)手段對(duì)4T1乳腺癌模型小鼠荷瘤組織NF－κBp65、IκBα和 Phospho－IκBα蛋白光密度值的影響

與C組相比，EP組NF－κBp65的表達(dá)下降，差異非常顯著（P＜0.01），其他各組與C組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05，表6）。各組IκBα的表達(dá)無(wú)顯著差異（P＞0.05）。與C組和P組相比，E組、EP組的Phospho－IκBα的表達(dá)下降，差異非常顯著（P＜0.01），提示運(yùn)動(dòng)對(duì) Phospho－IκBα的表達(dá)有一定的下調(diào)作用（圖4）。

表6 本研究運(yùn)動(dòng)、紫杉醇及聯(lián)合干預(yù)對(duì)4T1模型小鼠荷瘤組織 NF－κBp65、IκBα和Phospho－IκBα蛋白光密度值的影響一覽表Table 6 Optical Density Value of NF－κBp65、IκBα and Phospho－IκBαin 4T1Mouse in Different Group （X±S，n＝6①因試劑昂貴，每組測(cè)試了最少有效數(shù)6只。）

3 討論

瘤重、瘤體比與荷瘤體積均反映荷瘤生長(zhǎng)的情況。有關(guān)運(yùn)動(dòng)對(duì)荷瘤生長(zhǎng)影響的相關(guān)研究目前較少，Sasvari認(rèn)為，每天1h的10周規(guī)律運(yùn)動(dòng)可以減緩S－180肉瘤的生長(zhǎng)［22］。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，干預(yù)結(jié)束時(shí)，模型各組小鼠的瘤體平均重4.42g，瘤體最大的在C組，達(dá)5.66g；最小的在EP組，為2.88g。各干預(yù)組的瘤重、瘤體比均小于C組，但除EP組外，其他各組和C組相比，瘤重和瘤體比降低均無(wú)顯著性差異。從荷瘤體積來(lái)看，各干預(yù)組小鼠荷瘤的體積均小于C組，但只有EP組小鼠的荷瘤體積減小差異顯著，提示17m／min的中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)聯(lián)合紫杉醇對(duì)荷瘤的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，而運(yùn)動(dòng)、紫杉醇的單獨(dú)干預(yù)對(duì)荷瘤的生長(zhǎng)則沒(méi)有明顯的抑制作用，說(shuō)明運(yùn)動(dòng)可以提高紫杉醇的療效。中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)聯(lián)合紫杉醇能較好的控制瘤體的增長(zhǎng)，這可能與運(yùn)動(dòng)改變了紫杉醇在小鼠體內(nèi)的分布有關(guān)［6］，運(yùn)動(dòng)對(duì)紫杉醇在體內(nèi)的分布產(chǎn)生了有利影響，使得較多的紫杉醇在荷瘤組織中聚集、可以對(duì)瘤細(xì)胞充分發(fā)揮其藥效。

圖3 本研究流式細(xì)胞儀檢測(cè)4T1模型小鼠荷瘤組織細(xì)胞早、晚期凋亡的比例示意圖Figure 3. Comparison of the Proportion of Early and Late Apoptosis of Tumor Cell in 4T1Mouse

圖4 本研究各組小鼠荷瘤組織NF－κBp65、IκBα和Phospho－IκBα的 Western blotting蛋白條帶示意圖Figure 4. Western Blotting of NF－κBp65，IκBα and Phospho－IκBαin 4T1Mouse

本研究發(fā)現(xiàn)，單純的運(yùn)動(dòng)并沒(méi)有促進(jìn)荷瘤的增長(zhǎng)，提示運(yùn)動(dòng)并不會(huì)導(dǎo)致瘤細(xì)胞快速增殖。結(jié)合生存時(shí)間看，E組小鼠的生存時(shí)間顯著長(zhǎng)于C組，這提示乳腺癌荷瘤小鼠進(jìn)行17m／min的中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)有助于其“帶瘤生存”。

研究表明，無(wú)論是單藥還是聯(lián)合用藥，紫杉醇治療乳腺癌都有較好的療效，紫杉醇單藥用于一線治療晚期乳腺癌的有效率為32%～60%［18］。在本研究中，P組沒(méi)有表現(xiàn)出很好的控瘤效果，其原因可能是，臨床上紫杉醇的使用方法為靜滴［5］，而對(duì)于小鼠，靜滴或靜脈注射給藥比較困難。小鼠尾靜脈非常細(xì)小，加上紫杉醇在水中的溶解度極小，臨床現(xiàn)行使用的紫杉醇注射液多使用聚氧乙烯蓖麻油來(lái)增加紫杉醇的水溶性。如果給小鼠進(jìn)行靜脈注射紫杉醇注射液，很容易導(dǎo)致小鼠尾靜脈壞死，故本研究采用了腹腔注射的方法，因此，本實(shí)驗(yàn)中紫杉醇的藥效可能沒(méi)有最大程度地發(fā)揮。

乳腺癌模型動(dòng)物的生存時(shí)間受動(dòng)物品種、腫瘤細(xì)胞系、運(yùn)動(dòng)方式、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間、抗癌藥物等多種因素的影響。Jones等認(rèn)為，8周的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)聯(lián)合多柔比星對(duì)乳腺癌裸鼠有影響［15］，雖然該實(shí)驗(yàn)也是采用的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度也和本實(shí)驗(yàn)基本一致，但該實(shí)驗(yàn)選用的是裸鼠，其結(jié)果是只有多柔比星組能夠顯著提高荷瘤裸鼠的存活時(shí)間，而運(yùn)動(dòng)組和運(yùn)動(dòng)聯(lián)合多柔比星組均未能顯著提高乳腺癌裸鼠的存活時(shí)間，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致。這可能和裸鼠沒(méi)有免疫力，運(yùn)動(dòng)無(wú)法提高其自身免疫機(jī)能有關(guān)。

本研究中的生存時(shí)間是從給小鼠接種瘤細(xì)胞當(dāng)天開(kāi)始，到干預(yù)結(jié)束時(shí)各組小鼠的存活時(shí)間。在記錄截止時(shí)，EP組有4只小鼠仍存活，其他組的小鼠都已死亡。通過(guò)Kaplan－Meier分析顯示，EP組小鼠的生存率最高，且干預(yù)各組與C組相比，其平均生存時(shí)間均延長(zhǎng)，說(shuō)明紫杉醇、17 m／min的中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)、紫杉醇聯(lián)合運(yùn)動(dòng)均能延長(zhǎng)乳腺癌小鼠的存活時(shí)間。EP組與P組相比，其延長(zhǎng)生存時(shí)間的差異非常顯著，說(shuō)明在使用藥物的同時(shí)結(jié)合運(yùn)動(dòng)能起到了更好的效果。

Schipper認(rèn)為，對(duì)于癌癥，有效的治療有時(shí)并不需要腫瘤的完全消退，機(jī)體的反應(yīng)對(duì)癌癥治療最為重要［4］。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，適量運(yùn)動(dòng)雖然不能完全消除癌細(xì)胞，但是可以提高荷瘤小鼠的存活時(shí)間。

研究表明，影響凋亡的因素與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。細(xì)胞凋亡對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)起負(fù)調(diào)控作用，腫瘤的生長(zhǎng)不僅與細(xì)胞增殖速度高有關(guān)，還與細(xì)胞死亡速率下降有關(guān)。在腫瘤細(xì)胞的增殖過(guò)程中，瘤細(xì)胞的凋亡常常被抑制，通過(guò)細(xì)胞凋亡途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡，已成為當(dāng)前腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。

有關(guān)運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞凋亡的研究目前大多集中在運(yùn)動(dòng)與骨骼肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的凋亡［2，13，20］，運(yùn)動(dòng)與腫瘤細(xì)胞的凋亡研究較少。本研究發(fā)現(xiàn)，單純的運(yùn)動(dòng)和紫杉醇干預(yù)對(duì)乳腺癌小鼠體內(nèi)癌細(xì)胞的增殖和凋亡作用不顯著，這可能與選擇的癌細(xì)胞惡性程度高有關(guān)，而17 m／min的中強(qiáng)度聯(lián)合紫杉醇可以顯著促進(jìn)癌細(xì)胞早期凋亡和晚期凋亡的發(fā)生，這可能與17m／min的運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)了NF－κB的活性有關(guān)。

在乳腺腫瘤組織中普遍存在NF－κB激活現(xiàn)象，在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中具有重要作用［17］。調(diào)控 NF－κB的活性對(duì)于抑制腫瘤生長(zhǎng)是一種有效的治療策略。目前，人們?cè)噲D使用蛋白激酶抑制劑、免疫抑制劑等，從NF－κB激活的關(guān)鍵環(huán)節(jié)阻斷其激活過(guò)程，以阻斷NF－κB對(duì)抗凋亡基因、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等基因的調(diào)控，從而達(dá)到抑制甚至消滅腫瘤的目的［1］。由于NF－κB在真核細(xì)胞中廣泛存在，它在免疫和其他防御應(yīng)答中同樣至關(guān)重要，事實(shí)上，也不能長(zhǎng)時(shí)間阻止NF－κB的激活，因?yàn)?，通過(guò)藥物對(duì)NF－κB進(jìn)行直接調(diào)控有很大的副作用。NF－κB在細(xì)胞中廣泛存在，使用NF－κB抑制物有可能對(duì)正常細(xì)胞產(chǎn)生損害，尤其是B、T淋巴細(xì)胞［17］，因此，尋找能適度調(diào)控 NF－κB活性的手段在乳腺癌的治療中有重要的意義。

運(yùn)動(dòng)可以調(diào)節(jié)NF－κB的活性，但其作用與運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間、運(yùn)動(dòng)頻率等有關(guān)。有研究認(rèn)為，不管是離心、向心還是平坡運(yùn)動(dòng)，急性運(yùn)動(dòng)都能激活 NF－κB信號(hào)通路［3］，而長(zhǎng)期有規(guī)律的有氧運(yùn)動(dòng)會(huì)降低NF－κB的活性［21］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，17m／min的中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)能顯著下調(diào) Phospho－IκBα的表達(dá)，說(shuō)明17m／min的中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可以減少I(mǎi)κBα的磷酸化。紫杉醇組NF－κBp65的表達(dá)沒(méi)有明顯下調(diào)，可能與紫杉醇在導(dǎo)致癌細(xì)胞發(fā)生周期阻滯的同時(shí)，也可能磷酸化Akt有關(guān)?；罨腁kt可進(jìn)一步激活NF－κB復(fù)合物p50／p65，使p65亞基轉(zhuǎn)位入核，從而使腫瘤細(xì)胞對(duì)紫杉醇產(chǎn)生耐藥性，降低療效［9］。17m／min的中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)聯(lián)合紫杉醇能顯著下調(diào)NF－κBp65的表達(dá)，并減少I(mǎi)κBα的磷酸化，說(shuō)明運(yùn)動(dòng)干預(yù)起到了類(lèi)似NF－κB抑制劑的作用，有助于紫杉醇更好地發(fā)揮療效。

4 結(jié)論

中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)聯(lián)合紫杉醇能抑制乳腺癌模型小鼠荷瘤的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)其生存時(shí)間。減少癌細(xì)胞IκBα的磷酸化，調(diào)節(jié)NF－κB的活性，促進(jìn)瘤細(xì)胞的凋亡，可能是運(yùn)動(dòng)聯(lián)合紫杉醇影響小鼠乳腺癌移植模型荷瘤生長(zhǎng)的機(jī)制之一。

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