張培松，周玉香，王 潔

(寧夏大學(xué) 農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)系，寧夏 銀川 750021)

動物的健康狀況與其抗氧化功能密不可分。日常管理過程中造成不同程度的應(yīng)激會導(dǎo)致免疫和抗氧化功能的降低，最終影響動物生產(chǎn)性能的發(fā)揮。因此，研究提高動物的免疫和抗氧化功能，促進(jìn)其健康生長，具有十分重要的意義。目前，研究的熱點(diǎn)是利用一些生物活性物質(zhì)，如酵母培養(yǎng)物、益生酵母和苜蓿皂甙等，以優(yōu)化飼料的營養(yǎng)價(jià)值、改善動物的健康狀態(tài)，提高飼料的消化率和轉(zhuǎn)化率，最終起到提高動物的生產(chǎn)性能的作用[1-3]。本研究通過在灘羊日糧中，分別添加不同比例的酵母培養(yǎng)物、益生酵母和苜蓿皂甙，研究三種日糧添加物對灘羊抗氧化功能的影響，為提高灘羊生產(chǎn)性能和免疫提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時間與地點(diǎn)

飼養(yǎng)試驗(yàn)于2011年5月7日到2011年7月14日，在寧夏農(nóng)墾暖泉魯寧小尾寒羊種羊繁育中心進(jìn)行，試驗(yàn)期67 d，其中預(yù)試期7 d，正試期60 d。

1.2 試驗(yàn)材料

酵母培養(yǎng)物益康“XP”由美國達(dá)農(nóng)威生物發(fā)酵工程技術(shù)(深圳)有限公司提供。益生酵母1026由奧特奇生物制品(中國)有限公司提供。苜蓿皂甙(紫花苜蓿全株提取物，皂甙含量20%)購于河北寶恩生物技術(shù)有限公司。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇健康、生長發(fā)育狀況良好，年齡相近的周歲灘羊羯羊12只、周歲母羊12只進(jìn)行試驗(yàn)。將試驗(yàn)羊隨機(jī)分為4組，即對照組、試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組，每組6只。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ組在對照組日糧的基礎(chǔ)上添加2.0%的酵母培養(yǎng)物，試驗(yàn)Ⅱ組在對照組日糧的基礎(chǔ)上添加0.3%的益生酵母，試驗(yàn)Ⅲ組在對照組日糧的基礎(chǔ)上添加3.0%的苜蓿皂甙?；A(chǔ)日糧配方設(shè)計(jì)見表1。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 血樣采集與處理 在正試期開始的第0天、第20天、第40天、第60天早晨晨飼前，頸靜脈采集血液20 mL，其中10 mL用肝素抗凝，3 500 r/min離心10 min，取血漿保存于-20 ℃冰箱中待測；另外10 mL在恒溫箱中溫育30 min后，3 500 r/min離心15 min，取血漿保存于-20 ℃冰箱中待測。

1.4.2 測定指標(biāo)與方法 抗氧化指標(biāo)包括血漿丙二醛(MDA)、血漿超氧化物歧化酶(SOD)活性和血漿總抗氧化能力(T-AOC)。

表1 日糧配方設(shè)計(jì)Table 1 Ration formulation

注：①每千克預(yù)混料提供：維生素A 25 000 IU，維生素D 325 000 IU，維生素E 300 IU，鎂 3.25 g,銅 0.7 g，鐵 1.7 g，錳 0.8 g，鋅 2 g，硒 15 g，碘 20 g，鈷 30 g，鈣 75 g，磷 55 g；②營養(yǎng)水平除代謝能為計(jì)算值，其余為實(shí)測值。

Note：①The premix provided per kilogram of diet：vitamin A 25 000 IU， vitamin 325 000 IU， vitamin E 300 IU，Mg 3.25 g，F(xiàn)e 1.7 g，Mn 0.8 g，Zn 2.0 g，Se 15.0 g，I 20.0 g，Co 30.0 g，Ca 75.0 g，P 55.0 g；②Nutrient levels were the determined values except for ME which was calculated.

MDA測定用硫代巴比妥酸(TBA)法。測定原理是過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的MDA可與TBA縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532 nm處有最大吸收峰。

血漿超氧化物歧化酶活性采用黃嘌呤氧化酶法。通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現(xiàn)紫紅色，用可見光分度度計(jì)測其吸光度。當(dāng)被測樣品中含SOD時，則對超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，比色時測定管的吸光度值低于對照管的吸光度值，通過公式計(jì)算可求出被測樣品中的SOD活性。

SOD(U/mL)=(對照管吸光度-樣品管吸光度)/對照管吸光度/0.5×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)×樣本測試前的稀釋倍數(shù)血漿總抗氧化能力測定的原理是由于機(jī)體中有許多抗氧化物質(zhì)，能使Fe3+還原成Fe2+，后者可與菲啉類物質(zhì)形成穩(wěn)固的絡(luò)合物，通過比色可測出其抗氧化能力的高低。

所有試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SAS 6.12軟件包中的ANOVA過程進(jìn)行方差分析，多重比較用Duncan法。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同日糧添加物對血漿MDA含量的影響

試驗(yàn)各組羊血漿中MDA的含量變化如表2所示。在試驗(yàn)開始后的第0天，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組分別與對照組的血漿MDA含量差異不顯著(P>0.05)。在試驗(yàn)第20天、第60天時，試驗(yàn)Ⅰ組與對照組的血漿MDA含量差異極顯著(P<0.01)，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組與對照組血漿MDA含量差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)第40天時各試驗(yàn)組之間血漿MDA含量差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組血漿MDA含量在試驗(yàn)第40天時開始呈現(xiàn)下降趨勢，說明添加酵母培養(yǎng)物、益生酵母和苜蓿皂甙后，均能使機(jī)體MDA含量下降。

表2 不同日糧添加物對灘羊血漿MDA 含量的影響Table 2 Effects of different additives of diet on plasma MDA in stabling Tan sheep nmol/L

注：同列肩標(biāo)不同大寫字母為差異極顯著(P<0.01),同列肩標(biāo)不同小寫字母的為差異顯著(P<0.05)。下同。

Note:Values with different capitalized superscripts in the same column mean extreme difference(P<0.01),and those with different lowercase superscripts mean significant difference(P<0.05).The same below.

2.2 不同日糧添加物對灘羊血漿SOD含量的影響

不同日糧添加物對灘羊血漿SOD含量的影響如表3所示。在試驗(yàn)開始后第0天，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組分別與對照組的血漿SOD含量差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)Ⅱ組在試驗(yàn)第20天、第40天時血漿SOD含量極顯著高于與對照組(P<0.01)，在其他時期均無顯著差異(P>0.05)，但血漿SOD含量均略高于對照組。試驗(yàn)Ⅲ組與對照組血漿SOD含量在試驗(yàn)開始后的第20天差異顯著(P<0.05)，第40天時差異極顯著(P<0.01)，同時也在試驗(yàn)開始后第60天時其含量達(dá)到峰值，為85.62 U/mL，在試驗(yàn)開始后第40天、第60天時較對照組高了33.93%、2.92%。

2.3 不同日糧添加物對灘羊血漿T-AOC的影響

試驗(yàn)開始后的0、20、60 d各處理組之間T-AOC含量差異不顯著(P>0.05)，但40 d時試驗(yàn)I、II組顯著高于對照組(P<0.05)。灘羊血漿的總抗氧化能力隨著飼養(yǎng)時間而發(fā)生了變化，對照組、試驗(yàn)Ⅱ組羊只的血漿T-AOC持續(xù)逐漸降低，而試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅲ組的血漿T-AOC均呈現(xiàn)先增加，后下降的趨勢，但試驗(yàn)組的血漿T-AOC均不同程度的略高于對照組，如表4所示。在試驗(yàn)開始后的第0天，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組分別與對照組的血漿T-AOC差異不顯著(P>0.05)。各試驗(yàn)組在試驗(yàn)開始后第20天時其血漿T-AOC達(dá)到峰值，試驗(yàn)Ⅰ組為4.44 U/mL，試驗(yàn)Ⅱ組為5.02 U/mL，試驗(yàn)Ⅲ組為4.10 U/mL。

表3 不同日糧添加物對灘羊血漿SOD含量的影響Table 3 Effects of different additives ofdiet on plasma SOD in Tan sheep U/mL

表4 不同日糧添加物對灘羊血漿T-AOC的影響Table 4 Effects of different additives ofdiet on serumT-AOC in Tan sheep U/mL

3 討 論

動物機(jī)體防御體系抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度密切相關(guān)。作為抗氧化酶之一的SOD對機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞膜免受損傷，維持機(jī)體的健康。SOD的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力。正常情況下生物機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生，利用和消除保持著動態(tài)平衡。否則，自由基的產(chǎn)生和增加，或機(jī)體清除自由基的能力減弱，都會對機(jī)體造成損傷[4]。氧自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并因此形成脂質(zhì)過氧化物，如MDA。MDA的含量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細(xì)胞受損的程度。作為重要抗氧化劑之一的SOD，其測定常常與MDA的測定相結(jié)合，以反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度和機(jī)體清除氧自由基的能力。

張愛忠等[5]報(bào)道，在精粗比為2∶8的絨山羊日糧中添加2%的酵母培養(yǎng)物，可有效清除自由基，防止活性氧對機(jī)體造成損傷，具有提高機(jī)體抗氧化酶活性的作用。在肉雞生產(chǎn)方面，在飼料中添加酵母培養(yǎng)物，有提高肉雞機(jī)體抗氧化功能和降低血漿、肌肉總膽固醇含量的趨勢[3,6-8]。關(guān)于添加苜蓿皂甙對動物機(jī)體抗氧化功能的影響的報(bào)道也有很多。潘俊良[9]選擇給1日齡健康海蘭褐蛋雛雞飼喂不同劑量的苜蓿皂甙后發(fā)現(xiàn)，當(dāng)添加量為200 mg/kg時，試驗(yàn)雞血漿和肝臟中的SOD活力均較對照組高；當(dāng)添加量為400 mg/kg時，試驗(yàn)雞血漿SOD活力均較對照組高，同時其肝臟MDA顯著下降；當(dāng)添加量為400 mg/kg時，試驗(yàn)雞的血漿MDA顯著下降，說明苜蓿皂甙對改善蛋雛雞抗氧化機(jī)能有幫助。張勇[10]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加苜蓿總甙，不同程度地提高了肉仔雞血漿和肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)水平，降低MDA水平，保護(hù)機(jī)體免受脂質(zhì)過氧化物的損傷，增加機(jī)體抗氧化能力。胡明等[11]在精粗比為2∶8日糧條件下，給綿羊日糧添加不同水平的苜蓿皂甙后，可提高綿羊機(jī)體的抗氧化能力：綿羊血漿GSH-Px酶活(P>0.05)、血漿總SOD酶活(P<0.05)及血漿抑制羥自由基能力增加(P>0.05)；降低血漿中MDA含量(P>0.05)。本試驗(yàn)中，在灘羊日糧中添加酵母培養(yǎng)物、益生酵母和苜蓿皂甙后，均在一定程度上降低了機(jī)體血漿MDA含量，說明酵母培養(yǎng)物、益生酵母、苜蓿皂甙可減輕機(jī)體的脂質(zhì)過氧化作用，能有效增加機(jī)體抗氧化能力，有利于機(jī)體健康作用。

4 結(jié) 論

精粗比為3∶7日糧條件下，在基礎(chǔ)日糧中添加2.0%酵母培養(yǎng)物、0.3%益生酵母和3.0%苜蓿皂甙后，降低了試驗(yàn)羊血漿的MDA的含量，同時提高了其血漿SOD含量和血漿T-AOC，說明，以上三種營養(yǎng)物質(zhì)均可以增強(qiáng)灘羊的抗氧化功能。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張愛忠．酵母培養(yǎng)物對內(nèi)蒙古白絨山羊瘤胃發(fā)酵及其它生理功能調(diào)控作用的研究[D]．呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005．

[2] 胡 明,盧德勛,牛文藝,等.苜蓿皂甙對綿羊氮平衡及生產(chǎn)性能的影響[J].中國畜牧獸醫(yī)，2006，33(10)：3-5.

[3] 劉大程,程 艷,盧德勛，等.酵母培養(yǎng)物對隱性乳房炎奶牛免疫功能和抗氧化功能的影[J]．畜牧與飼料科學(xué)，2011，32(9-10)：165-166.

[4] 莊允中，李文杰．自由基與酶[M].北京：科學(xué)出版社，1994：44-69.

[5] 張愛忠,盧德勛,王立志.酵母培養(yǎng)物對絨山羊體外瘤胃發(fā)酵的影響[J].中國畜牧雜志，2008，44(3)：31-34．

[6] Osweiler G D,Jagannatha S，Trampel D W，et al．Evaluation of XPC and prototypes on aflatoxin-challenged broilers[J].Poult Sci，2010，89(9)：1 887-1 893.

[7] 周淑芹，孫文志.酵母培養(yǎng)物對肉仔雞免疫和生產(chǎn)性能影響的研究[J].飼料工業(yè)，2004，25(11)：38-40．

[8] Gao J,Zhang H J,Yu S H,et al．Effects of Yeast Culture in Broiler Diets on Performance and Immunomodulatory Functions[J].Poultry Science，2008(87)：1 377-1 384.

[9] 潘俊良．苜蓿皂甙在產(chǎn)蛋雞和蛋雛雞飼糧中的應(yīng)用研究[D]．鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[10] 張 勇.苜?？傔皩θ庾须u胴體品質(zhì)、血脂及抗氧化性能的影響[D].鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.