謝云發(fā), 汪生貴,韓廷義

(1.青海省西寧市湟中縣農(nóng)牧和扶貧開發(fā)局田家寨畜牧獸醫(yī)工作站, 青海 湟中 811600;2. 青海省湟中縣總寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站,青海 湟中 811600)

飼料中霉菌毒素污染是指飼料在生產(chǎn)、加工、運(yùn)輸、貯存等過程中，飼料發(fā)生霉變而產(chǎn)生霉菌毒素等具有危害性的成分，其可導(dǎo)致畜禽的生產(chǎn)性能下降、免疫抑制、引起動(dòng)物致病，畜禽體內(nèi)殘留的霉菌毒素通過食物鏈對人類健康產(chǎn)生潛在危害[1]。飼料中霉菌毒素的污染嚴(yán)重威脅著飼料、畜禽、人類健康的安全，給飼料生產(chǎn)企業(yè)、畜禽養(yǎng)殖業(yè)、食品安全均帶來巨大的危害[2-3]?，F(xiàn)已知的霉菌毒素約有200種，飼料中常污染的、對畜禽具毒性的霉菌毒素約有20余種，其中以赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)、黃曲霉毒素B1(AflatoxinB1，AFB1)、嘔吐毒素(vomitoxin)又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZON)等較為嚴(yán)重[4]。飼料中赭曲霉毒素含量達(dá)200 μg/kg畜禽就會出現(xiàn)腎臟形態(tài)學(xué)損傷；黃曲霉毒素含量達(dá)200 μg/kg畜禽就會出現(xiàn)生長受阻、免疫抑制，達(dá)400 μg/kg以上就會出現(xiàn)肝臟形態(tài)學(xué)損傷[5]。由于畜禽攝取飼料的連續(xù)性，極其微量的霉菌毒素通過在體內(nèi)沉淀蓄積，也可達(dá)到致病量[6]。為準(zhǔn)確評估青海省豬飼料中的霉菌毒素污染現(xiàn)狀，本研究對2012年采集的205份豬飼料樣品中OTA、AFB1、DON、ZON含量進(jìn)行了檢測與分析，以期為青海省豬飼料的評價(jià)、調(diào)查和安全應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 飼料樣品 2012年3月至10月，采集青海省部分地區(qū)21個(gè)養(yǎng)豬場不同時(shí)期、飼喂不同生產(chǎn)階段豬群的飼料樣品共計(jì)205份，其中含仔豬商品化飼料35份，自制飼料2份；保育豬商品化飼料52份，自制飼料24份；育肥豬商品化飼料54份，自制飼料21份；后備母豬商品化飼料12份，自制飼料2份；生產(chǎn)公母豬商品化飼料3份，自制飼料0份；共計(jì)商品化飼料156份，自制飼料49份，每種飼料均選取500 g左右，運(yùn)至青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室后隨即進(jìn)行檢測。

1.1.2 試 劑 赭曲霉毒素A(OTA)、黃曲霉毒素B1(AFB1)、嘔吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZON)ELISA檢測試劑盒均為德國拜發(fā) R-Biopharm公司產(chǎn)品；氯化鈉、甲醇等均為國產(chǎn)分析純試劑。

1.2 方 法

1.2.1 毒素的提取與檢測 分別參照赭曲霉毒素A(OTA)、黃曲霉毒素B1(AFB1)、嘔吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZON)ELISA檢測試劑盒使用說明書的操作步驟與操作方法進(jìn)行赭OTA、AFB1、DON、ZON的提取與ELISA檢測。

1.2.2 結(jié)果判定 參照美國FDA對飼料霉菌毒素限量標(biāo)準(zhǔn)、我國飼料中霉菌毒素限量規(guī)定、百奧明飼料添加劑有限公司的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)[7-9]，本研究規(guī)定各種毒素的陽性限值：OTA為2 μg/kg、AFB1為1 μg/kg、DON為50 μg/kg、ZON為32 μg/kg。檢測樣品的檢測數(shù)值等于或超過以上設(shè)定的限值，即判為陽性樣品。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品的檢測結(jié)果

應(yīng)用ELISA檢測試劑盒對收集于青海省部分縣市的156份商品化飼料、49份自制飼料進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1、表2所示，在156份商品化飼料中，OTA陽性11份，陽性率為7.05%，AFB1陽性25份，陽性率為16.03%，DON陽性130份，陽性率為83.33%，ZON陽性109份，陽性率為69.87%，而完全沒有檢測到4種霉菌毒素污染的樣品僅14份，占總樣品數(shù)的8.97%；在49份自制飼料中，OTA陽性3份，陽性率為6.12%，AFB1陽性14份，陽性率為28.57%，DON陽性42份，陽性率為85.71%，ZON陽性36份，陽性率為73.47%，自制飼料中無完全沒有檢測到4種霉菌毒素的樣品?？傆?jì)的205份飼料樣品共進(jìn)行了820項(xiàng)檢測，其中有370項(xiàng)呈陽性，總陽性率為45.12 %。OTA陽性14份，陽性率為6.83%，AFB1陽性39份，陽性率為19.02%，DON陽性172份，陽性率為83.90%，ZON陽性145份，陽性率為70.73%，而完全沒有檢測到4種霉菌毒素的樣品僅14份，占總樣品數(shù)的8.97%。該結(jié)果表明青海省部分地區(qū)飼料中存在霉菌毒素的污染，且以DON和ZON的污染最為突出。同時(shí)，從檢測結(jié)果明顯顯示出，霉菌毒素含量的高值都出現(xiàn)在保育豬和育肥豬飼料中，當(dāng)然這一結(jié)果與這2種豬飼料的檢測樣品較多有一定關(guān)系，但經(jīng)對豬場的回訪與調(diào)查發(fā)現(xiàn)，AFB1、DON和ZON含量較高的幾個(gè)豬場，豬群已明顯表現(xiàn)出厭食、生長緩慢等不適現(xiàn)象，與本次檢測結(jié)果存在一定的相關(guān)性。

表1 商品化飼料檢測結(jié)果Table 1 Results of commercial feed detection

表2 自制飼料檢測結(jié)果Table 2 Results of self-made feed detection

2.2 污染情況的統(tǒng)計(jì)結(jié)果

對156份商品化飼料、49份自制飼料的檢測結(jié)果進(jìn)行污染情況的統(tǒng)計(jì)與分析，結(jié)果如表3和表4所示，在156份商品化飼料中，只檢測到1種霉菌毒素的樣品18份，占總樣品數(shù)的11.54 %，檢測到2種和2種以上霉菌毒素的樣品共計(jì)124份，占總樣品數(shù)的79.49%，其中同時(shí)檢測到4種霉菌毒素的樣品13份，占總樣品數(shù)的8.33%。在49份自制飼料中，只檢測到1種霉菌毒素的樣品4份，占總樣品數(shù)的8.16%，檢測到2種和2種以上霉菌毒素的樣品共計(jì)45份，占總樣品數(shù)的91.84%，其中同時(shí)檢測到4種霉菌毒素的樣品5份，占總樣品數(shù)的10.02%?？傆?jì)的205份飼料樣品中單一霉菌毒素污染樣品共計(jì)22份，總單污率為10.73%，2種和2種以上霉菌毒素混合污染樣品共計(jì)169份，總混污率為82.44%，其中同時(shí)檢測到4種霉菌毒素的樣品18份，占總樣品數(shù)的8.78%。該結(jié)果表明青海省部分地區(qū)飼料中存在霉菌毒素的單獨(dú)污染和混合污染，且總混污率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于總單污率，混合污染程度較深，且存在4種霉菌毒素的同時(shí)污染，混合污染情況非常嚴(yán)重。

表3 商品化飼料污染種類的統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 3 Statistical results of pollution variety for commercial feed

表4 自制飼料污染種類的統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 4 Statistical results of pollution variety for self-made feed

2.3 商品化飼料和自制飼料的比較分析

統(tǒng)計(jì)分析商品化飼料和自制飼料中OTA、AFB1、DON、ZON的污染情況，在OTA、AFB1、DON、ZON污染的陽性率方面，結(jié)果如圖1所示，商品化飼料中OTA的陽性率高于自制飼料，而AFB1、DON、ZON的陽性率均顯著低于自制飼料，表明在OTA方面商品化飼料的污染情況比自制飼料嚴(yán)重，而在AFB1、DON、ZON方面自制飼料的污染情況比商品化飼料嚴(yán)重；在飼料的污染種類方面，結(jié)果如圖2所示，商品化飼料中1種霉菌毒素的污染率高于自制飼料，而2種和2種以上霉菌毒素、4種霉菌毒素的污染率均低于自制飼料，表明在污染的種類方面，自制飼料的混合污染現(xiàn)象要比商品化飼料嚴(yán)重。同時(shí)商品化飼料存在8.97 %的無OTA、AFB1、DON、ZON污染飼料，而自制飼料中不存在無OTA、AFB1、DON、ZON污染飼料。

圖1 商品化飼料、自制飼料中各種霉菌毒素的陽性檢出率Fig.1 The positive rate of various mycotoxins in commercialfeed and self-made feed

圖2 商品化飼料、自制飼料中各種霉菌毒素的單污率和混污率Fig.2 Single pollution rate and mixing pollution rate of variousmycotoxins in commercial feed and self-made feed

3 討 論

本研究通過對采集于青海省部分養(yǎng)殖場的156份商品化飼料和49份自制飼料進(jìn)行OTA、AFB1、DON、ZON含量的檢測與分析，發(fā)現(xiàn)青海省部分地區(qū)豬飼料嚴(yán)重存在OTA、AFB1、DON、ZON的污染情況，且以ZON和DON較為嚴(yán)重，這與張丞等[7-8]對2008年、2009年中國飼料和原料中霉菌毒素污染情況的調(diào)查、王金勇等[9]對2012年中國飼料和原料霉菌毒素檢測的結(jié)果存在高度的一致性。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，目前青海省部分地區(qū)豬飼料中霉菌毒素的混合污染(同時(shí)含2種或2種以上霉菌毒素)現(xiàn)象嚴(yán)重，且4種霉菌毒素同時(shí)污染的樣品達(dá)8.78%，通過對豬場的回訪與調(diào)查發(fā)現(xiàn)含量高的豬群曾經(jīng)表現(xiàn)出生長緩慢存在一定的關(guān)聯(lián)性，究其原因可能是當(dāng)多種霉菌毒素同時(shí)存在時(shí)，他們之間的協(xié)同效應(yīng)會對動(dòng)物產(chǎn)生更大的影響與危害[10]。本研究還通過對商品化飼料與自制飼料的比較分析發(fā)現(xiàn)，商品化飼料在AFB1、DON、ZON的陽性檢出率方面，以及混合污染方面都明顯好于自制飼料，且商品化飼料中存在8.97 %的無OTA、AFB1、DON、ZON污染飼料，而自制飼料中不存在無OTA、AFB1、DON、ZON污染的飼料，究其原因可能是自制飼料在原料的選擇、飼料生產(chǎn)、加工過程中，因工作環(huán)境與條件有限，飼料加工廠即無控濕裝置，又無防霉污染設(shè)施，致使成品飼料霉變，產(chǎn)生大量霉菌毒素。綜合本次調(diào)查結(jié)果，筆者認(rèn)為目前青海省部分地區(qū)豬飼料中存在霉菌毒素污染現(xiàn)象，為保障該地區(qū)的飼料安全，筆者建議堅(jiān)強(qiáng)對飼料生產(chǎn)企業(yè)及飼料加工廠的科學(xué)管理，加強(qiáng)對飼料原料的控制，同時(shí)加強(qiáng)對飼料運(yùn)輸、保存條件的管理，定期對飼喂的飼料進(jìn)行監(jiān)測，及時(shí)淘汰霉變飼料。

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