喻正科 陳志紅 顏 旭 李勇敏

（湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410006）

慢性心衰（CHF）是一種復(fù)雜臨床綜合征，亦稱慢性心功能不全，是各類心臟病的嚴(yán)重結(jié)局之一。近年認(rèn)識到CHF發(fā)生發(fā)展的基本機(jī)制是心室重塑（VR）。故CHF的藥物治療策略也從傳統(tǒng)的“強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)血管”為主的治療模式轉(zhuǎn)變?yōu)檗卓股窠?jīng)內(nèi)分泌激活、阻止心肌重塑為主的生物學(xué)治療模式。筆者以往的研究［1］發(fā)現(xiàn)參竹心康湯可提高慢性心衰患者的療效，改善血管內(nèi)皮功能及收縮與舒張功能。本實(shí)驗(yàn)旨在過去研究基礎(chǔ)上，觀察本方對慢性心力衰竭大鼠模型心室重構(gòu)的影響，進(jìn)一步為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康SD大鼠72只，雄性，清潔級，體質(zhì)量（220±10）g。購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證號:SCXK（湘）2011-0016，動(dòng)物合格證號：004535。常規(guī)飼料飼養(yǎng)，自由飲水。

1.2 藥物 參竹心康湯由黨參20 g，麥冬10 g，黃芪20 g，五味子6 g，丹參20 g等組成。由湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院購入飲片，為同一批藥材。經(jīng)鑒定符合2010年版《中國藥典》規(guī)定。將飲片先用清水浸泡30 min，第一煎加5倍體積水，煎熬30 min，第二煎加5倍體積水，煎熬30 min，兩煎混合后再濃縮至含生藥4.5 g/mL。卡托普利片，為湖南湘雅制藥有限公司生產(chǎn)，批號為20110024。研磨細(xì)粉后加入蒸餾水中以超聲震蕩制成質(zhì)量濃度為3.25 mg/mL混懸液。藥物配置好后均4℃冰箱冷藏備用。

1.3 試劑與儀器 血管緊張素Ⅱ （AngⅡ）和醛固酮（ALD）檢測放射免疫試劑盒，購于北京北方生物技術(shù)研究所；紫外分光度計(jì)：購自美國UVP公司；水平電泳儀（GE-100型）：杭州大和熱磁電子有限公司；電子天平（FA型）購自上海臺之衡電子衡器有限公司；高速微型離心機(jī)：購自德國Eppendorf公司；小動(dòng)物型呼吸機(jī)：購自美國KentScientific公司；Powerlab8/30生物信號處理和分析系統(tǒng)：購自澳大利亞埃德儀器公司。

1.4 分組與造模 所有大鼠購回后于湖南省中醫(yī)藥研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物房作實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)分為：假手術(shù)組，模型組，卡托普利組，參竹心康湯低、中、高劑量組，每組12只。參照文獻(xiàn)［2］方法，采用腹主動(dòng)脈縮窄法制作心衰大鼠模型。大鼠用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，劍突下腹正中切口，分層打開腹腔，在腎動(dòng)脈分支以上鈍性游離腹主動(dòng)脈，將7號注射器針頭平行置于腹主動(dòng)脈上，用4號手術(shù)絲線將腹主動(dòng)脈和注射器一同結(jié)扎，然后緩慢將注射器撤出，關(guān)腹，分層縫合，使大鼠腹主動(dòng)脈直徑縮窄為0.7 mm。假手術(shù)組開腹后將手術(shù)絲線穿過腹主動(dòng)脈，除不縮窄腹主動(dòng)脈外，其他操作與模型組完全相同。術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)6周后，開始出現(xiàn)明顯心力衰竭癥狀，如呼吸頻率增加，幅度增加，活動(dòng)明顯減少，飲食減少，毛發(fā)干枯無光澤，爪背紫紺，尿少水腫等。造模后大鼠各組分別死亡1、2、3、3、2、2 只。

1.5 給藥方法 造模成功后，各組大鼠開始灌胃給藥：假手術(shù)組、模型組予蒸餾水10 mL/kg灌胃；卡托普利組予卡托普利混懸液7.8 mg/kg；參竹心康湯低劑量組、中劑量組、高劑量組分別予參竹心康湯中藥煎液11、22、44 g/kg。以上各藥物組再用蒸餾水稀釋成等體積10 mL/kg灌胃，每日1次，連續(xù)給藥8周。

1.6 血流動(dòng)力學(xué)及心功能測定 術(shù)前大鼠稱體質(zhì)量，用3%戊巴比妥鈉（45 mg/kg）行腹腔注射，麻醉滿意后仰臥固定于手術(shù)臺，頸部正中切開皮膚，逐層分離皮膚、肌肉，分離氣管并行氣管插管，正壓人工通氣（頻率40次/min，潮氣量5.0 mL/kg）。分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，插入PE-50導(dǎo)管（導(dǎo)管中事先充以0.3%肝素生理鹽水），連接Powerlab生理記錄儀，計(jì)算機(jī)上以AD Instruments公司Chart5.0軟件，記錄心率（HR）、升主動(dòng)脈收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP），并計(jì)算平均動(dòng)脈壓（MAP）。在計(jì)算機(jī)顯示器輔助下，將導(dǎo)管逆行插入左心室，記錄左室收縮內(nèi)壓峰值（LVSP）、左室舒張末壓（LVEDP）、左室內(nèi)壓最大上升速率（+dp/dt）、左室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dt）等參數(shù)，共記錄 10 min。

1.7 血漿中AngⅡ和ALD測定 血流動(dòng)力學(xué)測定完成后，從大鼠腹主動(dòng)脈處留取血樣標(biāo)本，靜置20 h后3000 r/min離心10 min，-80℃冰箱保存。采用放射免疫法檢測大鼠血漿中AngⅡ和ALD的濃度，操作按說明書進(jìn)行。

1.8 左室質(zhì)量（LVW）測定 完成血流動(dòng)力學(xué)及采集血漿標(biāo)本后，經(jīng)靜脈注入10%KCl液2～3 mL，使心臟于舒張末停止跳動(dòng)狀態(tài)。迅速打開胸腔取出心臟置于冰鹽水中，沖洗干凈，沿室間隔剪去右心室，濾紙吸干后用電子天平稱取左室（包括室間隔）質(zhì)量，并與體質(zhì)量相除，計(jì)算左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)以（）表示，組間比較采用ANOVA分析和配對樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血流動(dòng)力學(xué)及心功能的比較 見表1。與假手術(shù)組相比較， 模型組 MAP、LVSP、±dp/dt均降低，LVEDP升高（P＜0.05或0.01）；而卡托普利組、低劑量組、中劑量組、高劑量組與假手術(shù)組相比較，上述指標(biāo)組間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）；卡托普利組、中劑量組、 高劑量組 MAP、LVSP、±dp/dt下降幅度和LVEDP上升幅度均低于模型組 （P＜0.05或0.01）；低劑量組與模型組相比較，LVSP、LVEDP差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：LVSP高于模型組（P＜0.05），LVEDP低于模型組（P＜0.05）；卡托普利組、中劑量組、高劑量組與低劑量組相比較，上述指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05或0.01）：卡托普利組、中劑量組、高劑量組 MAP、LVSP、±dp/dt下降幅度低于低劑量組，LVEDP上升幅度也低于低劑量組。心率在各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 大鼠血漿AngⅡ、ALD水平變化比較 見表2。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血漿AngⅡ及ALD濃度明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），其他4組也高于假手術(shù)組（P＜0.05或0.01）；與模型組比較，卡托普利組、低劑量組、中劑量組、高劑量組大鼠血漿AngⅡ及ALD濃度均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05或0.01）；而卡托普利組、中劑量組、高劑量組降低幅度高于低劑量組（P＜0.05）。

表1 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)及心功能比較（）

表1 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)及心功能比較（）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與低劑量組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。下同。

表2 各組大鼠血漿AngⅡ、ALD水平比較（）

表2 各組大鼠血漿AngⅡ、ALD水平比較（）

2.3 左室質(zhì)量（LVW）變化比較 見表3。模型組LVW與LVMI均明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01）；其他4組亦高于假手術(shù)組（P＜0.01）；卡托普利組、中劑量組、高劑量組LVW和LVMI均明顯低于模型組 （P＜0.01）；低劑量組與模型組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；卡托普利組、中劑量組、高劑量組明顯低于低劑量組（P＜0.01）。此結(jié)果表明參竹心康湯能改善左室重構(gòu)，并呈劑量依賴性。

表3 各組大鼠左室質(zhì)量（LVW）比較（）

表3 各組大鼠左室質(zhì)量（LVW）比較（）

3 討 論

目前已明確，導(dǎo)致心衰發(fā)生發(fā)展的基本機(jī)制是心肌重構(gòu)。心肌重構(gòu)是由于一系列復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制造成心肌結(jié)構(gòu)、功能和表型的變化［3］。臨床上可見心肌肌重和心室容量的增加以及心室形狀的改變。實(shí)際上，心衰是一種進(jìn)行性的病變，一旦起始，即使沒有新的心肌損害，臨床處于穩(wěn)定階段，仍可通過心肌重構(gòu)不斷發(fā)展。因此心衰的治療目標(biāo)不僅僅是改善癥狀，提高生活質(zhì)量，更重要的是針對心肌重構(gòu)的機(jī)制，防止和延緩心肌重構(gòu)的發(fā)展。

機(jī)體在初始的心肌損傷后，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng) （RAAS）和交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮性增高，AngⅡ、ALD等分泌增加，使心肌、血管平滑肌、血管內(nèi)皮細(xì)胞等發(fā)生一系列變化。心肌上AngⅡ通過各種途徑使新的收縮蛋白合成增加；在血管中使平滑肌細(xì)胞增生管腔狹窄，同時(shí)降低血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌一氧化氮的能力，使血管舒張受影響［4］。細(xì)胞外的醛固酮刺激成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟z原纖維，使膠原纖維增多，心肌間質(zhì)纖維化。這些不利因素的長期作用，使心肌重構(gòu)發(fā)展，心功能惡化，后者進(jìn)一步激活神經(jīng)體液機(jī)制，形成惡性循環(huán)［5］。

在本研究中以LVW及LVMI反映心肌肥厚程度，發(fā)現(xiàn)模型組的LVW及LVMI均明顯高于假手術(shù)組，反映心臟功能的指標(biāo)LVSP、LVEDP及±dp/dt也明顯差于假手術(shù)組，提示腹主動(dòng)脈縮窄后血管阻力增加，心臟后負(fù)荷加重導(dǎo)致了大鼠的左室重構(gòu)和心臟功能損害。模型組血漿AngⅡ、ALD水平明顯高于假手術(shù)組，提示體內(nèi)RAAS的激活，并且與大鼠縮窄腹主動(dòng)脈后左室重構(gòu)和心功能受損有關(guān)。筆者采用參竹心康湯低、中、高劑量組連續(xù)用藥6周后，LVW及LVMI盡管均高于假手術(shù)組，但中、高劑量組均低于模型組；LVSP各組均明顯高于模型組，LVEDP各組均低于模型組，±dp/dt中、大劑量組高于模型組。本結(jié)果提示，參竹心康湯改善了慢性心衰大鼠的心肌肥厚及收縮舒張功能，明顯降低了慢性心衰大鼠血漿中AngⅡ、ALD水平，顯示出本方在改善心衰大鼠心室重構(gòu)指標(biāo)方面發(fā)揮重要作用。

［1］喻正科，朱筱婧，陳志紅，等.參竹心康湯對慢性心衰患者血管內(nèi)皮功能的臨床研究［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（11）：32-34.

［2］胡詠梅，李法琦，羅羽慧，等.腹主動(dòng)脈縮窄大鼠模型制作及臨床意義［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，29（3）：322-324.

［3］中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì).慢性心力衰竭診斷治療指南［J］.中華心血管病雜志，2007，35（12）：1074.

［4］曹林生，廖玉華.心臟病學(xué) ［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：309.

［5］Chatterjeek.Neurohormonal activation in congestive heart failure and the role of vasopressin ［J］.Am J Cardiol，2005，95（9A）：813-1313.