陳利平 王發(fā)渭 孫志高 許成勇 黃泉智

（1.解放軍總醫(yī)院海南分院，海南 三亞 572004；2.解放軍總醫(yī)院，北京 100853）

缺血性腦血管病為中老年人常見?。?］。其病理過程包括神經細胞的自身損傷機制和腦缺血性損傷級聯(lián)反應［2］、炎性細胞因子增加［3］。其中炎性細胞因子對腦組織神經元具有保護作用［4-5］。筆者既往研究發(fā)現(xiàn)參龍湯具有補腎益氣活血的作用，能提高腦缺血大鼠的學習記憶能力［6］。本研究采用慢性腦缺血動物模型，觀察參龍湯對慢性腦缺血大鼠血清炎性因子含量的影響，探討參龍湯對腦缺血神經損傷的保護作用。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 SPF級Wistar大鼠。鼠齡3個月，體質量180～220 g，雌雄各半（由解放軍總醫(yī)院醫(yī)學動物實驗中心提供，許可證編號：SCXK（京）2009-0015。

1.2 藥品、試劑及實驗儀器 參龍湯（由解放軍總醫(yī)院中醫(yī)科提供處方，制劑室制備），吡拉西坦（腦復康）（石家莊中諾藥業(yè)有限公司），試劑：腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-8（IL-8）、細胞間黏附分子1（ICAM-1）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）測定盒均由中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所提供，用ELISA法測定IL-6、IL-8、ICAM-1、TNF-α含量，測定按照試劑盒說明嚴格進行。主要儀器Sunrise Romote酶標儀 （天津天美國際貿易有限公司），分析天平，飛鴿離心機（上海安亭科學儀器廠），恒溫水浴箱，Dy89-1型電動玻璃勻漿機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.3 模型制備 根據(jù)文獻 ［7］制備慢性腦缺血模型。大鼠禁食12 h，禁水6 h，10%水合氯醛腹腔麻醉（30 mg/100 g）后，仰臥固定在手術臺上，常規(guī)備皮消毒，剪開頸部皮膚，鈍性分離皮下組織，在氣管旁找到雙側頸總動脈，0號絲線結扎。傷口撒頭孢唑啉鈉粉末（0.25 g/只）后逐層縫合。放回籠中飼養(yǎng)。假手術組僅分離頸總動脈，不做任何處理。大鼠麻醉蘇醒后常規(guī)飲食飲水。全部造模過程保持大鼠肛溫在37℃，防止低溫的腦保護作用。

1.4 分組及給藥 60只大鼠造模后排除死亡的進行實驗，入選50只。實施假手術的10只大鼠設為對照組，其余大鼠隨機分為4組：模型組、小劑量參龍湯組、大劑量參龍湯組、腦復康組，每組10只。術后3 d開始給藥，參照陳奇［8］的方法，將藥物溶于生理鹽水中，根據(jù)參龍湯和腦復康的臨床口服用量按體質量換算出大鼠相對于人的等效劑量定為小劑量組及對照組的劑量，大劑量參龍湯組的劑量為小劑量參龍湯組的3倍，最終確定小劑量參龍湯組、大劑量參龍湯組和腦復康組分別含生藥80、240、90 g/L。大鼠灌胃量為1 mL/只，每日1次。假手術組和模型組大鼠給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)4周。水迷宮實驗結束后斷頭處死大鼠，在冰面上迅速取腦，分離大腦皮層，生理鹽水沖洗后，稱重、制備成10%的組織勻漿。

1.5 統(tǒng)計學處理 應用SPSS10.0統(tǒng)計軟件。所有數(shù)據(jù)以（）表示。進行正態(tài)性檢驗，多個樣本均數(shù)比較采用方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠血清IL-6和IL-8含量比較 見表1。模型組大鼠血清炎性細胞因子IL-6和IL-8的含量較對照組顯著升高（P<0.05或0.01）。參龍湯能顯著降低血清IL-6、IL-8的含量，大劑量參龍湯組與模型組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

表1 各組大鼠血清IL-6和IL-8含量比較（pg/mL，）

表1 各組大鼠血清IL-6和IL-8含量比較（pg/mL，）

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

2.2 參龍湯對腦缺血大鼠血清TNF-α和ICAM-1的影響 見表2。與對照組比較，模型組大鼠血清TNF-α和ICAM-1含量顯著升高（P<0.05或0.01）。與模型組比較，大劑量參龍湯組能顯著降低TNF-α和ICAM-1的含量（P<0.05）。

表2 各組大鼠血清TNF-α、ICAM-1含量比較（）

表2 各組大鼠血清TNF-α、ICAM-1含量比較（）

3 討 論

慢性腦缺血是神經系統(tǒng)的一種常見病理狀態(tài)，是由多種因素參與的復雜病理過程［9］。缺血性腦血管病導致的神經功能損傷的重要機制之一是缺血后引起的腦組織神經元損傷，慢性炎癥在腦動脈硬化的過程中起重要的作用［10］，腦缺血時氧自由基和其他介質激活炎性細胞因子和致炎癥酶原引起趨化因子釋放。TNF-α在缺血損傷后引起的白細胞浸潤和組織損傷中起重要作用，可誘導炎性細胞因子和細胞黏附分子釋放、增加表達，參與腦梗死發(fā)生發(fā)展過程［11］，還能使興奮性氨基酸釋放增加，產生神經損傷［12］。IL-6、IL-8能夠誘導其他炎性介質的產生，參與機體免疫應答和炎癥反應。近年來研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血病理過程中，機體的免疫應答反應、細胞因子的釋放起著重要作用［13］。腦缺血的免疫炎癥反應是以 IL-6、IL-8、ICAM-1、TNF-α 等細胞因子為代表的多種炎性介質失控后大量釋放而形成的“瀑布效應”，各種細胞因子相互作用，相互促進共同加劇了腦組織的廣泛損傷［14］。炎性細胞因子能誘導其他炎性介質產生黏附分子的表達、白細胞浸潤的增加、誘導興奮性氨基酸和自由基產生，啟動多種細胞因子級聯(lián)反應等，在神經組織早期炎癥反應中對中性粒細胞具有趨化活性和激活作用引起中性粒細胞在缺血灶的聚集造成組織損傷；還能生成氧化代謝產物釋放細胞內酶促進神經組織的炎性反應，引起多核白細胞聚集和激活并釋放炎癥介質因此如果通過各種措施阻斷的表達能減少缺血性神經元損傷［15］。

筆者研究結果顯示：正常大鼠血清細胞因子IL-6、IL-8、ICAM-1、TNF-α 基礎含量較低，腦缺血模型組IL-6、IL-8、ICAM-1、TNF-α 含量顯著增高， 提示炎性細胞因子參與腦缺血損傷過程；參龍湯大劑量組IL-6、IL-8、ICAM-1、TNF-α 含量呈現(xiàn)不同程度下降，說明參龍湯可減少血清中炎性因子的含量，這可能是參龍湯對腦缺血神經損傷的保護作用機制之一。

參龍湯由生曬參、制首烏、淫羊藿、干地龍、石菖蒲、川芎、遠志等藥物組成。其中君藥人參大補元氣、安神益智。臣藥制首烏補血養(yǎng)肝、益精固髓；淫羊藿溫腎壯陽，二者配伍切合了腎精不足的基本病機。佐以地龍、川芎活血行氣通絡，去除腦絡之瘀阻。石菖蒲、遠志開竅寧心安神。全方共奏補腎填精、益氣活血、安神增智的功效。前期臨床研究表明，參龍湯對于腦缺血及VD具有較好的療效，并能改善大鼠神經功能缺失癥狀，增加大鼠海馬血管內皮生長因子的表達，減輕大鼠腦缺血神經元的損傷［16-17］。本實驗結果顯示：參龍湯大劑量組可降低炎性細胞因子的含量，對大鼠腦缺血損傷有保護作用。

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