宓 丹 王 建 郗 歐

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽 110032；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽 110032；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧 沈陽 110034）

缺血性腦血管病是最常見的腦血管病，其發(fā)病率和致殘率極高。缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）是低氧應(yīng)答狀態(tài)中一種重要的轉(zhuǎn)錄因子。HIF-1α及其下游靶基因的表達(dá)在血管再生、糖代謝、細(xì)胞增殖和分化等方面發(fā)揮著重要作用［1］。眼針療法是彭靜山教授提出的治療腦病的有效方法。本研究旨在通過觀察眼針療法對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠HIF-1α表達(dá)的影響，探討該療法治療腦梗死的作用機(jī)制，為臨床實(shí)踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組 健康SPF級(jí)SD大鼠80只，雌雄不拘，體質(zhì)量（280±20）g，由上海西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（滬）2008－0016。大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、假手術(shù)組、模型組、眼針組。除空白組8只外，其余3組根據(jù)缺血及再灌注時(shí)間不同分為缺血2h后再灌注3、24、72h，每組每時(shí)間點(diǎn)8只。

1.2 模型制備 參照文獻(xiàn)［2］，模型組、眼針組及假手術(shù)組采用改良線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型。模型成功標(biāo)準(zhǔn)：大鼠清醒后出現(xiàn)左側(cè)霍納癥（左側(cè)眼臉變?。?，左側(cè)肢體屈伸不利或癱瘓。另假手術(shù)組與模型、眼針組不同之處在于釣魚線插入深度為0.5～1 cm?？瞻捉M未做任何處理。神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀參照ZeaLonga5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［3］：無癥狀為0分；不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪為1分；向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈為2分；向?qū)?cè)傾倒為3分；不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失為4分。評(píng)分為1～3分者納入下一步實(shí)驗(yàn)組，其余未達(dá)標(biāo)準(zhǔn)者排除。

1.3 眼針取穴及刺法 眼針組：取31號(hào)13 mm針，于大鼠眼眶周圍2 mm處針刺，參照人體取穴方法［4］，取肝區(qū)、上焦區(qū)、下焦區(qū)、腎區(qū)。手法：取平刺進(jìn)針3 mm。留針20 min，期間捻轉(zhuǎn)行針3次，1 min/次。眼針組于缺血2 h再灌注即刻針刺1次，以后每12小時(shí)針刺1次。模型組、假手術(shù)組每12小時(shí)抓取1次。

1.4 試劑 ELASA試劑盒購自北京博奧森試劑有限公司，其余試劑由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備。

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè) 動(dòng)物完成觀察時(shí)間后，以10%水合氯醛（3.5 mL/kg）腹腔麻醉后，剪開腹部，暴露腹主動(dòng)脈，抽取動(dòng)脈血2 mL。將血液靜置5 min后離心，取上部血清。嚴(yán)格按照ELASA試劑盒步驟要求操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（）表示；組間比較采用單因素方差分析處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 眼針對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)缺損程度評(píng)分影響 見表1。腦缺血再灌注即刻和72 h評(píng)價(jià)大鼠神經(jīng)缺損情況。腦缺血再灌注后模型組和眼針組大鼠均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能障礙，如提尾時(shí)左側(cè)前肢不能伸直，行走向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)或傾倒等；假手術(shù)組大鼠無神經(jīng)功能障礙表現(xiàn)。模型組與眼針組模型組在腦缺血再灌注即刻神經(jīng)功能評(píng)分無明顯差異（P＞0.05）。模型組大鼠神經(jīng)功能障礙在72 h略有減輕，而眼針組大鼠神經(jīng)功能障礙在72 h顯著減輕。眼針組與模型組比較有明顯差異（P＜0.05）。

表1 各組大鼠神經(jīng)缺損程度評(píng)分比較（分，）

表1 各組大鼠神經(jīng)缺損程度評(píng)分比較（分，）

與模型組同時(shí)期比較，*P＜0.05。下同。

2.2 眼針對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠HIF-1α表達(dá)的影響 見表2。在空白組HIF-1α少量表達(dá)，缺血、缺氧可以刺激的表達(dá)。模型組腦缺血后3 h可見HIF-1α表達(dá)增高，在24 h達(dá)到高峰，72 h表達(dá)略有下降。眼針組與模型組HIF-1α表達(dá)趨勢(shì)相同，但眼針組各時(shí)間點(diǎn)與模型組比均有顯著差異（P＜0.05）。

表2 各組大鼠HIF-1α表達(dá)比較（）

表2 各組大鼠HIF-1α表達(dá)比較（）

3 討 論

HIF-1α是一種調(diào)節(jié)氧穩(wěn)態(tài)平衡的轉(zhuǎn)錄因子。常氧狀態(tài)下，HIF-1α迅速降解；而在低氧狀態(tài)下，變得穩(wěn)定，并具有轉(zhuǎn)錄活性，廣泛參與哺乳動(dòng)物細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)的特異應(yīng)答［5］。活化的HIF-1α與靶基因的低氧反應(yīng)元件結(jié)合促進(jìn)靶基因轉(zhuǎn)錄。研究已發(fā)現(xiàn)受其調(diào)控的下游靶基因有100多個(gè)，HIF-1α通過調(diào)控靶基因在腦缺血時(shí)主要發(fā)揮以下作用：促進(jìn)血管新生、減輕神經(jīng)元損傷、促進(jìn)神經(jīng)元再生［6-9］。HIF-1α在缺血缺氧損傷中的重要作用，使通過基因或藥物手段調(diào)節(jié)HIF-1α的活性成為近年研究的熱點(diǎn)。譚新杰等［10］采用攜帶HIF-1α基因的重組腺病毒載體（Ad-HIF-1α）注射缺血側(cè)腦室治療缺血再灌注鼠模型發(fā)現(xiàn)，Ad-HIF-1α治療組腦梗死體積較其他組明顯減小，具有顯著差異。楊續(xù)艷等［11］通過電項(xiàng)針刺激可以提高HIF-1α及HIF-1α mRNA的表達(dá)，改善缺血半影區(qū)神經(jīng)細(xì)胞功能狀態(tài)，促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的增生。

眼針是彭靜山教授發(fā)明的微針技術(shù)。彭老根據(jù)中醫(yī)理論“五輪八廓學(xué)說”，用后天八卦將眼睛分為八個(gè)區(qū)，每區(qū)代表一個(gè)卦位，再配以臟腑，有根據(jù)各區(qū)內(nèi)白睛上的脈絡(luò)變化，用以觀眼識(shí)病，并在此基礎(chǔ)上發(fā)明了眼針［12］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，眼針組與模型組在腦缺血再灌注即刻，神經(jīng)功能缺損評(píng)分無差異，再灌注72 h眼針組與模型組神經(jīng)功能缺損評(píng)分均有改善，說明眼針治療可以改善急性腦缺血再灌注損傷模型大鼠的神經(jīng)功能障礙。細(xì)胞因子結(jié)果表明，模型組3 h可以檢測(cè)HIF-1α表達(dá)上調(diào)，24 h達(dá)到高峰，72 h表達(dá)下降，但仍高于3 h（表2結(jié)果顯示，72 h低于3 h）；這說明缺氧可以刺激的表達(dá)。眼針組與模型組表達(dá)趨勢(shì)相同，但眼針組各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α與模型組比表達(dá)顯著升高。表明眼針治療可以通過促進(jìn)HIF-1α的表達(dá)，提高腦神經(jīng)元對(duì)缺氧的耐受，發(fā)揮腦保護(hù)的作用。

［1］蔡拓，周艷芳，鄧宇斌.缺氧誘導(dǎo)因子-1在缺血性腦損傷中的作用［J］.國際腦血管病雜志，2010，18（4）：330-335.

［2］馬賢德，孫宏偉.線栓法制備大鼠腦缺血再灌注模型的方法研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2009，27（6）：1200-1201.

［3］Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebralarteryocclusionwithoutcraniectomyinrats［J］.Stroke，1989，20（1）：84-91.

［4］彭靜山.眼針療法［M］.沈陽：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，1990：11.

［5］田飛，楊金升.缺氧誘導(dǎo)因子1α與腦缺血缺氧性損傷［J］.國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志，2009，36（2）：138-140.

［6］Mart Hl，Bernaudin M，Bellail A，et a1.Hypoxia-induced vascular endothelial growth factor expression precedes neovascularization after cerebral ischemia ［J］.Am J Path，2000，156：965-976.

［7］Freret T，Valable S，Chazalviel L，et al.Delayed administration of deferoxamine reduces brain damage and promotes functional recovery after transient focal cerebral ischemia in the rat［J］.Eur J Neurosci，2006，23：1757-1765.

［8］Iwai M，Cao G，Yin W，et al.Erythropoietin promotes neuronal replacement through revascularization and neurogenesis after neonatal hypoxia/ischemic in rats［J］.Stroke，2007，38：2795-2803.

［9］劉喬飛，馮超，隆艷艷，等.缺氧誘導(dǎo)因子-1與腦缺血缺氧性損傷研究進(jìn)展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008，4（2）：23-27.

［10］譚新杰，胡長林.缺氧誘導(dǎo)因子-1α基因在成年大鼠局灶性腦缺血中的治療作用研究［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2006，86（15）：1057-1060.

［11］楊續(xù)艷，郭淑穎，王銳，等.電項(xiàng)針療法對(duì)大鼠腦缺血再灌注模型 HIF-1α 及 HIF-1α mRNA 表達(dá)的影響［J］.針灸臨床雜志，2009，25（3）：33-35

［12］田維柱.中華眼針［M］.沈陽：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，1999：34-55