魏歡平，李 翠，羅 罡，賀筱蓉

(浙江外國(guó)語(yǔ)學(xué)院科學(xué)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州310012)

1 引言

楨楠(Phoebe zhennan S.Lee et F.N.Wei)為樟科楠屬大喬木，高達(dá)30余米，樹(shù)干通直，為我國(guó)特有，是國(guó)家二級(jí)保護(hù)物種［1］.楨楠耐腐蝕性強(qiáng)，埋在地里幾千年不腐爛，并且具有幽香，在光照下發(fā)出絲絲金光，故被稱作金絲楠木.楨楠又名楠木、金絲楠、湖南楠、雅楠、光葉楠、巴楠、細(xì)葉潤(rùn)楠和小葉楠［2］.如楊家駒在《楨楠的研究與鑒別》［3］中所言，楨楠木是國(guó)人引以自豪的瑰寶，它也使庭院建筑的中國(guó)風(fēng)味更濃.

楨楠自然生長(zhǎng)和人工栽培十分緩慢，適生生境少，成材率低，因此價(jià)格不斷上升，產(chǎn)品供不應(yīng)求.為了實(shí)現(xiàn)楨楠資源的可持續(xù)利用，科學(xué)家近幾年開(kāi)始了人工栽培技術(shù)研究工作，但直到現(xiàn)在，雖然保護(hù)工作比較到位，但種子生產(chǎn)、組織培養(yǎng)和設(shè)施栽培等人工繁育關(guān)鍵技術(shù)還不夠完善［4］.楨楠幼苗栽培技術(shù)雖然取得一些進(jìn)步，但在組織培養(yǎng)上仍存在技術(shù)難度大、投資成本高、風(fēng)險(xiǎn)大等問(wèn)題.基于此，我們希望通過(guò)對(duì)楨楠葉子和嫩莖誘導(dǎo)形成愈傷組織，為進(jìn)一步提高楨楠人工載培技術(shù)水平提供參考和依據(jù).

2 材料與方法

本實(shí)驗(yàn)采用的楨楠植株來(lái)自四川省峨眉山，外植體取帶葉芽的莖段和葉.

2.1 外植體消毒處理方法

參考劉雪紅等的方法，實(shí)驗(yàn)者將選取好的外植體用自來(lái)水沖洗，然后用濃度為5%的洗衣粉水溶液漂洗5min，再用自來(lái)水沖洗30min，接著用濃度為75%的乙醇擦洗表面，再接著用0.1%升汞溶液消毒8min后，再用無(wú)菌水沖洗4～6次，用無(wú)菌吸水紙吸干水分.最后在無(wú)菌工作臺(tái)中將外植體切成約1.0cm長(zhǎng)的小段，將葉切成約1.0×1.0cm2小塊，分別接種到各種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上.葉片正接(上表皮朝上)，莖段橫接(水平放置)，每瓶接種1個(gè)外植體，每種配方接種20瓶［5］.

2.2 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

本實(shí)驗(yàn)以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑6-BA、2.4-D和NAA，具體方案見(jiàn)表1.pH值調(diào)節(jié)為5.8～6.0，培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，每天光照時(shí)間為12 h，光照強(qiáng)度為1700 lx.接種70d后觀察統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)情況.

表1 不同激素配比方案對(duì)比

3 結(jié)果與分析

3.1 不同配比的激素誘導(dǎo)葉形成愈傷組織的比較

以楨楠葉為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA、2.4-D和NAA，經(jīng)過(guò)70d的培養(yǎng)后，對(duì)所形成的愈傷組織進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 不同激素配比對(duì)楨楠葉誘導(dǎo)愈傷組織的影響

由表2可知，在4個(gè)不同激素配比的配方中，培養(yǎng)70d，Ⅳ的愈傷組織形成情況好于其余3個(gè)配方.此外，Ⅳ誘導(dǎo)愈傷組織較快，而且誘導(dǎo)的愈傷組織大，長(zhǎng)勢(shì)好;Ⅰ誘導(dǎo)愈傷組織較慢，且誘導(dǎo)的愈傷組織較小;Ⅱ、Ⅲ愈傷組織誘導(dǎo)情況介于I和Ⅳ之間.可見(jiàn)，當(dāng)以葉為外植體時(shí)，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:MS+2.0mg/L NAA+2.0mg/L 6－BA.

3.2 不同配比的激素誘導(dǎo)帶葉芽的莖段形成愈傷組織的比較

以帶葉芽的莖段為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6－BA、2.4－D和NAA，經(jīng)過(guò)70d的培養(yǎng)后，對(duì)所形成的愈傷組織進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)表3.

表3 不同激素配比對(duì)楨楠帶葉芽的莖段誘導(dǎo)愈傷組織的影響

由表3可知，在4個(gè)不同激素配比的配方中，培養(yǎng)70d，對(duì)于帶葉芽的莖段而言，Ⅳ的愈傷組織形成情況好于其余3個(gè)配方.此外，Ⅳ誘導(dǎo)愈傷組織較快，而且誘導(dǎo)的愈傷組織大，長(zhǎng)勢(shì)好;Ⅰ誘導(dǎo)愈傷組織較慢，且誘導(dǎo)的愈傷組織較小;Ⅱ、Ⅲ愈傷組織誘導(dǎo)情況介于I和Ⅳ之間.可見(jiàn)，當(dāng)以帶葉芽的莖段為外植體時(shí)，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:MS+2.0mg/L NAA+2.0mg/L 6－BA.

3.3 同種激素對(duì)楨楠莖和葉外植體誘導(dǎo)形成的愈傷組織比較

以葉和帶葉芽的莖段為外植體，在編號(hào)為Ⅳ最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方中誘導(dǎo)形成的愈傷組織進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)表4.

表4 同種激素配比對(duì)楨楠莖和葉外植體誘導(dǎo)形成的愈傷組織的影響

由表4可知，當(dāng)激素配比相同時(shí)，以楨楠植株葉和帶葉芽的莖段作為外植體誘導(dǎo)，以葉為外植體開(kāi)始形成愈傷組織的時(shí)間約在25d至30d，而以帶葉芽的莖段為外植體開(kāi)始形成愈傷組織的時(shí)間超過(guò)40d，說(shuō)明以葉為外植體開(kāi)始形成愈傷組織的速度比以帶葉芽的莖段為外植體開(kāi)始形成愈傷組織的速度快.經(jīng)過(guò)70d誘導(dǎo)培養(yǎng)，以葉和以帶葉芽的莖段作為外植體形成愈傷組織的平均重量分別為2.058g和1.223g，表明以葉為外植體形成愈傷組織在重量上明顯具有優(yōu)勢(shì).同時(shí)以葉作為外植體誘導(dǎo)形成的愈傷組織具有顏色偏綠、質(zhì)地緊密、褐化少的特點(diǎn);而以帶葉芽的莖段誘導(dǎo)形成的愈傷組織顏色深，褐化嚴(yán)重.

3.4 楨楠愈傷組織的增殖培養(yǎng)

增殖培養(yǎng)是將誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織等培養(yǎng)物反復(fù)多次重新分割、移植到新鮮培養(yǎng)基或其它培養(yǎng)基上進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)的過(guò)程.該過(guò)程是植物組織培養(yǎng)快速繁殖中決定繁殖速度快慢、繁殖系數(shù)高低的關(guān)鍵階段.將誘導(dǎo)形成的楨楠愈傷組織轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，結(jié)果表明由葉誘導(dǎo)形成的愈傷組織在繼代培養(yǎng)中具有增殖能力;而由帶葉芽的莖段誘導(dǎo)形成的愈傷組織顏色深、褐化嚴(yán)重，在繼代培養(yǎng)過(guò)程中增殖能力較差.

4 結(jié)論與討論

從理論上講，植物細(xì)胞都具有全能性，能夠再生新植株，任何器官、任何組織、單個(gè)細(xì)胞和原生質(zhì)體都可以作為外植體.但實(shí)際上，不同品種、不同器官之間的分化能力有巨大差異，培養(yǎng)的難易程度不同.為保證植物組織培養(yǎng)獲得成功，選擇合適的外植體是非常重要的［6］.例如在歐少云等對(duì)清遠(yuǎn)筆架茶的愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，嫩葉是誘導(dǎo)愈傷組織的最佳材料［7］.在實(shí)驗(yàn)研究比較中，在大部分情況下莖是最佳外植體材料，例如在高明波等對(duì)東北紅豆杉的愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，莖是誘導(dǎo)愈傷組織的最佳材料［8］;談凱等對(duì)日本紅楓的愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，嫩莖是誘導(dǎo)愈傷組織的最佳材料［9］;王曉娟等對(duì)大花萱草的愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，莖尖是誘導(dǎo)愈傷組織的最佳材料［10］.陳怡平等對(duì)紫斑牡丹的愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，幼芽是誘導(dǎo)愈傷組織的最佳材料［11］.根據(jù)現(xiàn)有的材料條件，我們選擇了楨楠的葉和部分帶葉芽的莖段，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:葉作為外植體進(jìn)行誘導(dǎo)，愈傷組織形成情況較好;而帶葉芽的莖段誘導(dǎo)形成的愈傷組織顏色深，褐化嚴(yán)重，繼代培養(yǎng)過(guò)程中，愈傷組織增殖能力差.這可能是因?yàn)槲覀內(nèi)〔臅r(shí)間是11月下旬，楨楠植物正處于生長(zhǎng)末期或休眠期，不利于愈傷組織的誘導(dǎo).

實(shí)驗(yàn)成果對(duì)今后楨楠在組培過(guò)程中誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基的選擇，以及培養(yǎng)環(huán)境的控制方面起到一定參考作用，可為其他培育機(jī)構(gòu)開(kāi)展大規(guī)模繁殖提供基礎(chǔ)性的幫助.

［1］譚鵬，李敏華.中國(guó)特有樹(shù)種:楨楠［J］.中國(guó)木材，2011，3:45.

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