林麗君 嚴(yán)曉嵐 俞麗玲 丁建祖 陳 文 聞禮永

(浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，杭州 310013)

血吸蟲病是國(guó)家重大傳染病之一。經(jīng)過(guò)積極防治，全國(guó)先后有5個(gè)省達(dá)到血吸蟲病傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)，但這些省份仍存在一定面積的殘存釘螺，隨著人口流動(dòng)的日益頻繁，輸入性傳染源也時(shí)有發(fā)現(xiàn)，血吸蟲病重新傳播流行的因素依然存在(聞禮永等，2011)。湖北釘螺是日本血吸蟲Schistosomajaponicum唯一中間宿主，血吸蟲毛蚴感染釘螺宿主是血吸蟲病流行不可缺失的重要環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，釘螺的感染率與每只釘螺暴露于血吸蟲毛蚴的數(shù)量呈正相關(guān)(何毅勛等，1994)。當(dāng)釘螺與毛蚴都減少至很少的程度時(shí)，即便多次投放毛蚴，釘螺也不感染(何尚英等，1989)。不同地區(qū)存在不同血吸蟲品系和不同亞種湖北釘螺，且相互之間的相容性存在明顯差異(周曉農(nóng)等，2005)。不同地區(qū)、不同環(huán)境類型釘螺對(duì)血吸蟲的易感性不同，來(lái)自同一地區(qū)但屬于不同環(huán)境類型的釘螺，以及屬于同一環(huán)境類型而來(lái)自不同地區(qū)的釘螺也具有不同的易感性(洪青標(biāo)等，1995)。本研究通過(guò)了解傳播阻斷地區(qū)釘螺與輸入性血吸蟲毛蚴的相容性，以期為傳播阻斷地區(qū)血吸蟲病防治、監(jiān)測(cè)及科學(xué)研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血吸蟲毛蚴

采取安徽、江西省現(xiàn)場(chǎng)捕獲的陽(yáng)性釘螺及江蘇省血吸蟲病防治研究所實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)陽(yáng)性釘螺逸取血吸蟲尾蚴感染家兔，每只家兔感染毛蚴1 500只，飼養(yǎng)45 d后取兔肝蟲卵孵化毛蚴。以孵出4 h內(nèi)的毛蚴作感染用。

1.2 釘螺

采集浙江省山丘型流行區(qū)長(zhǎng)興、常山、婺城光殼釘螺Oncomelanianosophora和水網(wǎng)型流行區(qū)秀洲、平湖微肋釘螺O.sublevis，分別經(jīng)逸蚴試驗(yàn)(何尚英等，1989)，并抽取其中100只釘螺解剖觀察無(wú)血吸蟲感染，剩余釘螺做試驗(yàn)用。采集安徽、江西和江蘇省現(xiàn)場(chǎng)湖沼型流行區(qū)肋殼釘螺分別經(jīng)逸蚴試驗(yàn)，并抽取其中100只釘螺解剖觀察無(wú)血吸蟲感染，剩余釘螺作陽(yáng)性對(duì)照組實(shí)驗(yàn)用。

1.3 方法

1.3.1釘螺群體感染：吸取含毛蚴水于玻片上，抽樣3次，在解剖鏡下計(jì)數(shù)后，推算水中的毛蚴密度，按每只釘螺20只毛蚴的比例加入50 mL燒杯中，加水至50 mL，杯中預(yù)先放入50只釘螺，并加紗網(wǎng)固定。在室溫25℃左右，日光燈光照下感染2 h。每組感染200只釘螺。

1.3.2單個(gè)釘螺感染：吸取含毛蚴水于玻片上，在解剖鏡下計(jì)數(shù)，用水沖入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)，在每孔內(nèi)加釘螺一只，上蓋紗蓋，在室溫25℃左右，日光燈光照下感染2 h。感染過(guò)程中，釘螺爬至紗蓋上時(shí)，用解剖針輕輕撥入水中。毛蚴量分別為5、10、20、40只，每組分別感染浙江省山丘型長(zhǎng)興、常山、婺城釘螺和水網(wǎng)型秀洲、平湖釘螺各200只，感染同地域釘螺200只作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3.3飼養(yǎng)、鑒別：感染后釘螺采用搪瓷盤底部放置一層海綿，上鋪草紙置于25℃左右室溫分別飼養(yǎng)。每隔1周喂食1次，更換草紙1次。45 d后采用壓碎法對(duì)釘螺進(jìn)行鏡檢，如見釘螺軟體有收縮反應(yīng)為活螺，反之為死螺，有血吸蟲母胞蚴、子胞蚴或尾蚴的釘螺為陽(yáng)性螺，并做計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。

2 結(jié)果

2.1 釘螺群體感染情況

用湖沼型血吸蟲病流行區(qū)血吸蟲毛蚴感染血吸蟲病傳播阻斷地區(qū)釘螺結(jié)果見表1。

表1 不同地區(qū)血吸蟲毛蚴感染傳播阻斷地區(qū)釘螺的結(jié)果Tab.1 Susceptibility of Oncomelania hupensis from areas Schistosomiasis transmission-interrupted to Schistosoma japonicum miracidia from different areas

湖沼型血吸蟲病流行區(qū)安徽、江西和江蘇血吸蟲毛蚴均可感染浙江山丘型長(zhǎng)興、常山、婺城釘螺和水網(wǎng)型秀洲、平湖釘螺。三地血吸蟲毛蚴感染其本地釘螺，感染率均高于感染浙江各地釘螺。浙江水網(wǎng)型秀洲釘螺對(duì)三地血吸蟲易感性高，感染率分別為29.88%、26.35%和18.18%，三者感染率有顯著性差異(χ2=12.97，P<0.01)。浙江山丘型婺城釘螺對(duì)三地血吸蟲易感性低，感染率分別為1.69%、0.56%和0.57%，三者感染率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=1.62，P>0.05)。

2.2 單個(gè)釘螺感染情況

用湖沼型血吸蟲病流行區(qū)血吸蟲毛蚴以5、10、20和40個(gè)不同數(shù)量感染傳播阻斷地區(qū)單個(gè)釘螺結(jié)果見表2。

湖沼型血吸蟲病流行區(qū)安徽、江西和江蘇省血吸蟲毛蚴5個(gè)/螺的量感染浙江山丘型長(zhǎng)興、常山和婺城釘螺，除江西血吸蟲感染浙江山丘型常山釘螺發(fā)現(xiàn)2只陽(yáng)性螺，其余均未感染；感染浙江水網(wǎng)型秀洲、平湖釘螺感染率為5.52%～8.11%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.83，P>0.05)，均處于較低感染率。浙江山丘型婺城釘螺用上述三地血吸蟲毛蚴5、10個(gè)/螺感染后，除江蘇血吸蟲感染組發(fā)現(xiàn)1只陽(yáng)性釘螺，其余組均未發(fā)生感染。用湖沼地區(qū)血吸蟲20、40個(gè)/螺毛蚴量感染浙江各地釘螺，均有陽(yáng)性釘螺發(fā)現(xiàn)。各地釘螺隨著感染血吸蟲毛蚴量的增加，感染率也隨之增大。三地血吸蟲毛蚴感染浙江釘螺后感染率均低于感染其本地釘螺。

2.3 單個(gè)釘螺感染后死亡情況

不同數(shù)量血吸蟲毛蚴感染釘螺后，釘螺顯示出不同的死亡率，結(jié)果見表3。

表2 血吸蟲毛蚴數(shù)量與傳播阻斷地區(qū)釘螺易感性Tab.2 Susceptibility of Oncomelania hupensis from Schistosomiasis transmission-interrupted areaswith different dose of Schistosoma japonicum miracidia

表3 傳播阻斷地區(qū)釘螺與不同量血吸蟲毛蚴感染后死亡率Tab.3 Mortolity of Oncomelania hupensis infected in different dose of Schistosoma japonicum miracidia

用湖沼型血吸蟲病流行區(qū)安徽、江西和江蘇省血吸蟲毛蚴5個(gè)/螺感染釘螺，釘螺死亡率最低是安徽血吸蟲感染浙江山丘型長(zhǎng)興釘螺組為5.50%，最高是安徽血吸蟲感染浙江水網(wǎng)型秀洲釘螺組和江西血吸蟲感染浙江山丘型常山釘螺組，均為12%，5個(gè)毛蚴感染各組平均死亡率為9%。10只毛蚴感染釘螺，死亡率最低是江蘇血吸蟲感染常山釘螺為6.5%，最高為安徽、江西省血吸蟲感染浙江水網(wǎng)型秀洲釘螺組，均為17.5%，各組平均死亡率為11.69%。20只毛蚴感染釘螺，死亡率最低是江西血吸蟲感染浙江山丘型婺城釘螺組為10.5%，最高是江西血吸蟲感染浙江水網(wǎng)型秀洲釘螺，為25.5%，各組平均死亡率為17.14%。40只毛蚴感染釘螺，死亡率最低是江西血吸蟲感染浙江山丘型長(zhǎng)興和婺城釘螺組，均為14.5%，最高是安徽血吸蟲感染長(zhǎng)興釘螺，為28.5%，各組平均死亡率為19.47%。不同毛蚴量感染釘螺后平均死亡率具有顯著性差異(χ2=204.43，P<0.01)，釘螺隨著感染血吸蟲毛蚴量的增加死亡率也隨之增高。

3 討論

血吸蟲中間宿主釘螺是血吸蟲病流行的重要環(huán)節(jié)，釘螺對(duì)血吸蟲的易感性直接影響血吸蟲病的流行程度，在血吸蟲病傳播動(dòng)力學(xué)中發(fā)揮重要作用。全國(guó)先后有5個(gè)省達(dá)到血吸蟲病傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)，但尚有一定面積的殘存釘螺，其中浙江省殘存釘螺面積最大，螺情抽樣調(diào)查結(jié)果顯示浙江省有螺面積約為150～200 hm2(聞禮永等，2004)。本文根據(jù)傳播阻斷地區(qū)殘存釘螺面積大小和地域分布特點(diǎn)抽取了浙江省3個(gè)山丘型血吸蟲病歷史流行區(qū)長(zhǎng)興、常山、婺城和2個(gè)水網(wǎng)型歷史流行區(qū)秀洲、平湖釘螺作為實(shí)驗(yàn)螺。隨著城市化建設(shè)的進(jìn)展，流動(dòng)人口日益增多，傳播阻斷地區(qū)輸入性血吸蟲病例也呈上升勢(shì)頭(張劍鋒等，2007；江西均等，2007)。研究顯示，浙江省66%以上輸入性血吸蟲病人來(lái)自江西、安徽，而浙江省近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的輸入性血吸蟲病病例多以江西、安徽居多(李理等，2012)。上海市流動(dòng)人口中來(lái)自安徽省流動(dòng)人口的血清學(xué)陽(yáng)性數(shù)和發(fā)病人數(shù)均占首位(周曉農(nóng)等，2007)。因此本研究選用血吸蟲地域株分別為與浙江省和上海市毗鄰的尚未達(dá)到血吸蟲病傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)的安徽、江西和江蘇省血吸蟲。

結(jié)果顯示，輸入性的血吸蟲可以感染浙江釘螺，提示血吸蟲病流行區(qū)外源性傳染源的輸入可感染傳播阻斷地區(qū)釘螺形成疫水，從而導(dǎo)致血吸蟲病在這些地區(qū)重新傳播流行。浙江釘螺對(duì)湖沼型血吸蟲病流行區(qū)血吸蟲毛蚴易感性低，與許學(xué)積等(1987)報(bào)道血吸蟲毛蚴對(duì)異地釘螺的感染率一般低于本地的感染率相符。不同類型血吸蟲病歷史流行區(qū)釘螺對(duì)輸入性的血吸蟲表現(xiàn)出了不同的易感性，水網(wǎng)型地區(qū)釘螺對(duì)湖沼型地區(qū)血吸蟲毛蚴易感性高，山丘型歷史流行區(qū)釘螺對(duì)湖沼型地區(qū)血吸蟲毛蚴易感性低。水網(wǎng)型血吸蟲病歷史流行區(qū)一旦釘螺面積回升，只要輸入少量病原體，即有可能引起血吸蟲病重新傳播流行，因此需加強(qiáng)查滅殘存釘螺力度，以鞏固血防成果。山丘型歷史流行區(qū)釘螺對(duì)湖沼型流行區(qū)血吸蟲的易感性低，但當(dāng)血吸蟲毛蚴數(shù)量達(dá)到一定程度，仍可引發(fā)血吸蟲病重新傳播流行，且本次研究未采集到陽(yáng)性光殼釘螺，我省山丘型光殼釘螺可能對(duì)這些地域株血吸蟲的易感性高，因此，這些地區(qū)仍不能放松警惕。

研究結(jié)果顯示，用安徽、江西和江蘇血吸蟲毛蚴以5個(gè)/螺感染浙江山丘型血吸蟲病歷史流行區(qū)長(zhǎng)興、常山和婺城釘螺，除江西血吸蟲感染常山釘螺發(fā)現(xiàn)2只陽(yáng)性螺，其余均未感染，提示當(dāng)血吸蟲的毛蚴量下降后，釘螺可不發(fā)生感染。如果通過(guò)大量研究，找到釘螺與血吸蟲幼蟲的感染閾值，可為開展血吸蟲病流行病學(xué)研究、制定防治對(duì)策和監(jiān)測(cè)指標(biāo)、預(yù)測(cè)流行趨勢(shì)等提供理論依據(jù)，具有重要的現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義。