【摘 要】 選擇一株嗜酸乳桿菌優(yōu)良菌株為研究對象，用牛津杯法測定嗜酸乳桿菌對6種細菌的抑菌作用，根據(jù)抑菌圈的大小來判斷抑菌效果。實驗表明嗜酸乳桿菌對6種細菌起抑菌作用的并非菌體本身而是其代謝產(chǎn)物，且抑菌作用并非由于pH的變化引起的。

【關(guān)鍵詞】嗜酸乳桿菌；牛津杯法；抑菌圈；發(fā)酵液

文章編號：ISSN1006—656X（2013）09 -0100-01

【前言】嗜酸乳桿菌是人體腸道內(nèi)的重要益生菌，能調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，抑制病原微生物生長，緩解乳糖不耐癥，降低膽固醇和抑制腸道腹瀉等作用，被視為第三代酸乳發(fā)酵劑菌種[1]。研究嗜酸乳桿菌對不同病原菌的抑菌效果、探討其抑菌因素，對嗜酸乳桿菌產(chǎn)品的應(yīng)用具有一定的意義。

一、材料與儀器

（一）材料：

（1）實驗菌株：嗜酸乳桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌、八疊球菌、枯草芽孢桿菌（實驗室保存的菌株）

（2）培養(yǎng)基：PCA培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基

13%牛奶培養(yǎng)基（用脫脂乳粉配制成13%水溶液，115℃10min滅菌）

（3）設(shè)備名稱、型號、廠家

YXQ-LS-50SL型高壓蒸汽滅菌鍋（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）

PYX-DHS型隔水式點熱恒溫培養(yǎng)箱（上海市躍進醫(yī)療器械廠）

JT-5003型精密電子天平（深圳市華恒儀器有限公司）

微生物實驗常規(guī)玻璃儀器

（二）實驗方法

（1）嗜酸乳桿菌發(fā)酵菌懸液、發(fā)酵液抑菌效果試驗

將加有溴鉀酚紫指示劑的PCA培養(yǎng)基分裝于試管中，每管約15mL，可確保每個平板的營養(yǎng)成分基本相同，添加指示劑有利于觀察抑菌圈，然后于121℃滅菌20min。分別吸取1mL指示菌的10-1稀釋液于冷卻至45-50℃培養(yǎng)基中，這一稀釋度生長的菌落能夠均勻的布滿整個平板，確保實驗的準確度，混勻后倒入9cm的滅菌平板中。培養(yǎng)基凝固后，在無菌條件下將3個滅菌的牛津杯均勻地放置在平板上，輕輕按壓，使其與平板培養(yǎng)基接觸面無空隙。在3個杯中分別加入0.1mL的嗜酸乳桿菌菌懸液、嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液、MRS液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h，測定抑菌圈直徑。每個樣品做兩個重復(fù)，結(jié)果取平均值。

（2）牛奶發(fā)酵物抑菌效果試驗

13%牛奶培養(yǎng)基，115℃10min滅菌，冷卻40℃左右，按5%的接種量接入嗜酸乳桿菌菌種，42℃恒溫培養(yǎng)約4h至牛奶凝固，即牛奶發(fā)酵物。用牛奶發(fā)酵物及其析出的上清液分別進行抑菌實驗，以13%牛奶培養(yǎng)基作對照，觀察抑菌效果。

（3）酸度對嗜酸乳桿菌抑菌作用影響試驗

嗜酸乳桿菌的發(fā)酵物pH值呈酸性，說明其代謝產(chǎn)物中含酸性物質(zhì)，而pH值對細菌生長都有一定的影響，為了驗證嗜酸乳桿菌代謝產(chǎn)物的抑菌作用是否是由于pH變化引起的，用1mol/LHCL、1mol/LNaCL將MRS培養(yǎng)基、嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液、牛奶發(fā)酵物析出液的pH進行調(diào)整，然后做抑菌實驗，觀察酸度是否影響抑菌作用。MRS培養(yǎng)基的pH調(diào)整到培養(yǎng)后的pH，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液pH調(diào)整到培養(yǎng)前的pH，牛奶發(fā)酵物析出液的pH調(diào)整到發(fā)酵前的pH。

嗜酸乳桿菌MRS培養(yǎng)液制備：將實驗室保存在牛奶培養(yǎng)基中的嗜酸乳桿菌以5%的接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)18h，即為嗜酸乳桿菌MRS培養(yǎng)液。靜置乳酸菌培養(yǎng)液，待其菌體完全沉淀后取其上清液，再經(jīng)0.22um膜過濾即為嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液 。

實驗菌株培養(yǎng)液制備：將試管斜面保存的實驗菌株接種到LB培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，為指示菌培養(yǎng)液。

二、結(jié)果

（一）嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的抑菌結(jié)果

表1 嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物對6種細菌的抑菌作用/mm（如下表）

由表1可知

1、嗜酸乳桿菌菌懸液和嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液對6種細菌都有抑制作用；

2、二者的抑菌能力無明顯差別，說明起到抑菌作用的并非菌體本身而是其代謝產(chǎn)物；

3、調(diào)整pH值后的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液、MRS培養(yǎng)基的抑菌結(jié)果與未調(diào)整的結(jié)果一致，說明其抑菌作用并非是pH值的變化引起的；同時也說明嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物pH值變化幅度均在這6種細菌的適應(yīng)范圍內(nèi)；

4、從抑菌圈直徑可以看出嗜酸乳桿菌培養(yǎng)菌懸液和嗜酸乳桿菌培養(yǎng)上清液對金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、八疊球菌的抑制能力較強，對大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的抑制能力相對弱些，對副溶血性弧菌的抑制能力最弱。

（二）嗜酸乳桿菌牛奶發(fā)酵物的抑菌結(jié)果

表2 嗜酸乳桿菌發(fā)酵物對6種細菌的抑菌作用/mm

1、牛奶發(fā)酵物及析出液對6種細菌具有一定的抑制作用，但抑菌效果比嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物差，這可能是由于發(fā)酵物與培養(yǎng)物的原培養(yǎng)基成分不同因而代謝產(chǎn)物成分不同、兩者培養(yǎng)發(fā)酵時間不同因而代謝產(chǎn)物數(shù)量也不同引起的，嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物培養(yǎng)18h大大超過牛奶發(fā)酵的時間約4h；

2、牛奶發(fā)酵物及析出液的抑菌效果無明顯差別，也說明牛奶發(fā)酵物中對細菌的抑制作用并非菌體而是其代謝產(chǎn)物；

3、調(diào)整pH值后的析出液、牛奶培養(yǎng)基抑菌效果與未調(diào)整的效果無明顯差別，也說明其抑菌作用并非是pH值的變化引起的；同時也說明嗜酸乳桿菌牛奶發(fā)酵物pH值變化幅度均在這6種細菌的適應(yīng)范圍內(nèi)。

三、結(jié)論

被視為第三代乳酸發(fā)酵劑的嗜酸乳桿菌，其真正起到抑菌作用的是它的代謝產(chǎn)物的某些物質(zhì)而非菌體本身也不是代謝產(chǎn)物中酸的因素；嗜酸乳桿菌的代謝產(chǎn)物對不同細菌抑菌能力也不同；由嗜酸乳桿菌發(fā)酵的牛奶產(chǎn)品同樣具有抑制作用，所以多喝酸奶可調(diào)節(jié)腸道健康。

參考文獻：

[1]張帆，王建華，劉立恒等.嗜酸性桿菌的培養(yǎng)條件及其生物學(xué)特性[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2005（31）3：43-47.

[2]程秀云，羅玉芳.嗜酸乳桿菌生物抗性研究[J].食品工業(yè)科技，2011，06：232-233轉(zhuǎn)237

[3]徐登峰，曹國文，戴榮國.植物乳酸菌對致病性大腸桿菌的抑制試驗[J].四川畜牧獸醫(yī)，2005（9）：36轉(zhuǎn)38。

[4]張輝華，曹永長，畢英佐. 6株乳酸菌體外抑菌實驗[J].中國獸醫(yī)雜志，2001，37（7）：8-10。

[5]王小紅，謝筆鈞，史賢明.乳酸菌對金黃色葡萄球菌生物拮抗作用的初步研究[J].食品工業(yè)科技，2005，26（1）：68-70轉(zhuǎn)73。

[6]呂兵，張國農(nóng)，楊瑞歡.嗜酸乳桿菌生物特性及其發(fā)酵乳的研究[J].中國乳品工業(yè)，2002（30）5：37-39.