劉國新 馬 沛 易建華

乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變(IDPL)是一類常見的危害女性健康的病變，乳腺非典型增生和早期原位癌的鑒別對于臨床治療方案的選擇具有提示意義，對乳腺非典型增生與早期原位癌，采用蘇木精-伊紅(HE)染色很難鑒別，需要采用免疫組化(IHC)染色才能鑒別。本研究采用免疫組化方法，檢測34βE12、CK5/6、p63、SMA在乳腺增生、不典型增生及原位癌組織中的表達(dá)情況，探討其在乳腺良惡性病變鑒別診斷中的價值。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2008年～2011年湖北鄖縣婦幼保健院及外院收治并確診的30例乳腺普通型增生(UDH)、30例非典型導(dǎo)管增生(ADH)、20例導(dǎo)管原位癌(DCIS)和20例浸潤性導(dǎo)管癌(IDC)?？?4βE12、CK5/6、p63 和SMA單克隆抗體及試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶(SP)法進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代一抗作為陰性對照，已知陽性的乳腺組織切片作為陽性對照，操作步驟按SP試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 陽性判定標(biāo)準(zhǔn)

鏡下觀察切片中陽性著色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比例，按許良中等評分標(biāo)準(zhǔn)［1］進(jìn)行綜合判定。每張切片陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度評分按無著色、黃色、棕黃色和棕褐色分別記為0、1、2、3分;陽性細(xì)胞數(shù)＜5%、5%～25%、26%～50%和＞50%，分別記為0、1、2和3分。根據(jù)上述2項指標(biāo)的乘積將最后結(jié)果分為4級:0～1分為(－);2～4分為(+);5～7分為(++);≥8分為(+++)，其中(+)～(+++)為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用χ2檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 34βE12 表達(dá)

34βE12陽性顆粒分布于乳腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中，UDH組30例34βE12均呈陽性表達(dá)，均為(++)～(+++);ADH組30例34βE12均呈陽性表達(dá)，多為(++)～(+++);DCIS組20例中6例34βE12呈陽性表達(dá)，多為(+)，較UDH組及ADH組明顯下降(P＜0.05);IDS組20例中4例34βE12呈陽性表達(dá)，均為(+)，與UDH組及ADH組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 CK5/6 表達(dá)

CK5/6陽性顆粒分布于乳腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中，UDH組30例CK5/6均呈陽性表達(dá)，多為(++)～(+++);ADH組30例中4例CK5/6呈陽性表達(dá)，均為(+)，較UDH組明顯下降(P＜0.05);DCIS組20例中3例CK5/6呈陽性表達(dá)，均為(+);IDS組20例中1例CK5/6呈陽性表達(dá)，為(+)，見表1。

表1 34βE12、CK5/6、p63、SMA 在乳腺良惡性病變中的表達(dá)情況

2.3 p63 表達(dá)

p63陽性顆粒分布于肌上皮細(xì)胞的胞核，UDH組30例P63均呈陽性表達(dá)，多為(++)～(+++);ADH組30例p63均呈陽性表達(dá)，多為(+)～(++)，與UDH組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);DCIS組20例p63均呈陽性表達(dá)，多為(+)，與UDH組及ADH組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05);IDS組20例p63均呈陰性表達(dá)，與UDH組、ADH及DCIS組比較明顯下降(P＜0.05)，見表1。

2.4 SMA 表達(dá)

SMA陽性顆粒分布于肌上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中，UDH組30例SMA均呈陽性表達(dá)，多為(++)～(+++);ADH組30例SMA均呈陽性表達(dá)，多為(+)～(++)，與 UDH組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);DCIS組20例SMA均呈陽性表達(dá)，多為(+)～(++)，與 UDH組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);IDS組20例中2例 SMA呈陽性表達(dá)，且為(+)，較UDH組、ADH組及 DCIS組明顯減少(P＜0.05)，見表1。

3 討論

乳腺增生、不典型增生及原位癌一直是鑒別診斷中的難點，大部分病例通過形態(tài)學(xué)能夠鑒別，但仍有部分病例需要通過免疫組織化學(xué)檢查進(jìn)一步明確診斷。

34βE12是由細(xì)胞角蛋白1、5、10和14按一定比例混合而成的高分子量細(xì)胞角蛋白組合。本實驗結(jié)果顯示其在 UDH、ADH中均呈中-高強(qiáng)度著色，而在DCIS、IDC 中大部分呈陰性表達(dá)，這與 Lacroix-Triki［2］的研究一致。由此可見，34βE12可作為乳腺病變鑒別診斷中的標(biāo)記物，上皮細(xì)胞34βE12表達(dá)缺失時高度提示為癌;大量上皮細(xì)胞表達(dá)34βE12，且為細(xì)胞膜強(qiáng)陽性時，則應(yīng)多考慮為良性病變。

CK5/6是1種基底細(xì)胞的標(biāo)記物，在正常組織中，鱗狀上皮和導(dǎo)管上皮的基底細(xì)胞以及部分鱗狀上皮生發(fā)層細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞和間皮細(xì)胞呈陽性表達(dá)。本組資料中顯示，除了基底層細(xì)胞呈陽性外，腺腔內(nèi)部分細(xì)胞也呈陽性，ADH中間型細(xì)胞則減少，表現(xiàn)為腺腔內(nèi)表達(dá)CK5/6的細(xì)胞減少。在部分腫瘤性病變的導(dǎo)管中心可見一些梭形小細(xì)胞呈CK5/6陽性表達(dá)，考慮為殘存的導(dǎo)管上皮細(xì)胞，而不是腫瘤細(xì)胞［3］。CK5/6在UDH中均為陽性表達(dá)，這與Rabban［4］的研究結(jié)果一致。而在ADH、DCIS及IDS中大部分呈陰性表達(dá)，說明在普通型增生和腫瘤增生性組織中CK5/6表達(dá)存在明顯差異。

p63基因位于染色體3q27片段，與p53屬同源基因，均為腫瘤抑制基因［5，6］，有文獻(xiàn)［7］表明它是所有肌上皮抗體中唯一標(biāo)記核陽性的，在血管平滑肌和肌纖維母細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)，在良性病變中接近100%的陽性表達(dá)。本組研究顯示，在UDH、ADH及DCIS組織中p63均呈陽性表達(dá)，而在IDS組織中均呈陰性表達(dá)，由此認(rèn)為p63是乳腺肌上皮較好的標(biāo)記物，有較強(qiáng)的特異性和敏感性，對乳腺病變的診斷起到很好的輔助作用。

SMA是1種標(biāo)記平滑肌的肌動蛋白，可以與平滑肌肌動蛋白α異構(gòu)體反應(yīng)，本組實驗顯示SMA在UDH、ADH及部分DCIS的腺上皮周圍呈明顯的彌漫陽性著色，而在IDC中未見明顯陽性表達(dá)，但SMA同時也在間質(zhì)肌纖維母細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞中表達(dá)。盡管這可以作為很好的內(nèi)對照，但也是SMA抗體的缺點，它易出現(xiàn)背景染色，影響診斷。所以認(rèn)為SMA是1種敏感性較好但特異性較差的標(biāo)記物。

綜上所述，我們在實際工作中最好聯(lián)合運(yùn)用34βE12、CK5/6、p63、SMA 這4 種抗體，同時一定要以光鏡下形態(tài)學(xué)的觀察為基礎(chǔ)，這樣才能明確診斷，為臨床提供可靠的診療依據(jù)。

［1］許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)〔J〕.中國癌癥雜志，1996，6(4):229.

［2］Lacroix-Triki M，Mery E，Vaigt JJ，et al.Value of cytokeratin 5/6 immunostaining using D5/6 B4 antibody in the spectrum of proliferative intraepithelial lesions of the breast:a comparative study with 34βE12 antibody〔J〕.Virchows Arch，2003，442:548.

［3］Otterbach F，Bankfalvi A，Bergner S，et al.Cytokeration5/6 immunohistochemistry assists the differential diagnosis of atypical proliferations of the brest〔J〕.Histopathology，2000，37(3):232.

［4］Rabban JT，Koemer FC，Lerwill MF.Solid papillary ductal carcinoma in situ versus cytokeratin 5/6〔J〕.Hum Pathol，2006，37(7):787.

［5］Strano S，Rossi M，F(xiàn)ontemaggi G，et al.From P63 to P53 across P73〔J〕.FEBS Lett，2001，490(3):163.

［6］Barbareschi M，Pecciarini L，Cangi MG，et al.P63，a P53 homologue，is a selective nuclear marker of myoepithelial cells of the human breast〔J〕.Am J Surg Pathol，2001，25(8):1054.

［7］Tse GM，Tan PH，Moriya T.The role of immunohistochemistry in the differential diagnosis of papillary lesions of the breast〔J〕.J Clin Pathol，2009，62(5):407.