高明華

（呼倫貝爾學(xué)院 生命科學(xué)與化學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾021008）

布魯菌病（Brucellosis）是由布魯菌（Brucella）引起的一類(lèi)重要的人獸共患病。根據(jù)致病性和宿主特異性，將布魯菌分為6個(gè)種19個(gè)生物型，除綿羊附睪種布魯菌（B.ovis）和沙林鼠種布魯菌（B.neotomae）2個(gè)種外，其余4個(gè)種包括犬種布魯菌（B.canis）、羊種布魯菌（B.meltensis）、牛種布魯菌（B.abortus）和豬種布魯菌（B.suis）均可以感染犬。石萍等從犬體內(nèi)分離到羊種布魯菌變異菌株［1］。

犬布魯菌病在全球多個(gè)國(guó)家和地區(qū)都有發(fā)生，而且發(fā)病數(shù)量逐年上升。我國(guó)多個(gè)省份存在犬布魯菌病，而且感染和發(fā)病率有上升的趨勢(shì)。由于我國(guó)養(yǎng)犬?dāng)?shù)量巨大，犬與人類(lèi)接觸密切，病犬作為人類(lèi)布魯菌病的傳染源不容忽視，因此應(yīng)加強(qiáng)對(duì)犬布魯菌病的研究和防控。而目前我國(guó)獸醫(yī)公報(bào)尚無(wú)犬患布魯菌病的報(bào)告。為此我們對(duì)呼倫貝爾部分地區(qū)犬布魯菌病血清抗體進(jìn)行檢測(cè)，以了解該病在當(dāng)?shù)氐陌l(fā)生情況，并探討其與人類(lèi)健康的關(guān)系，為當(dāng)?shù)孬F醫(yī)、衛(wèi)生行政管理部門(mén)制定相應(yīng)防控措施提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血液及血清樣品 采集地點(diǎn)為呼倫貝爾市部分地區(qū)，采集時(shí)間為2009年3月～2010年12月，犬齡1.5～6歲。無(wú)菌采取靜脈血，分離血清，共196份樣本，血液用于病原分離，血清－20℃保存，用于抗體檢測(cè)。其中牧區(qū)牧羊犬61份、農(nóng)區(qū)土犬63份和城市寵物犬72份。

1.1.2 布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、試管凝集抗原、陽(yáng)性血清和陰性血清，購(gòu)自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司。

1.2 方法 采用布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)對(duì)血清樣本進(jìn)行檢測(cè)。按照動(dòng)物布魯菌病診斷技術(shù)（GB/T18646－2002）的方法進(jìn)行。

1.2.1 平板凝集試驗(yàn) 用平板凝集試驗(yàn)對(duì)全部被檢血清進(jìn)行初篩。在陶瓷凝集板上先后滴加30μL平板凝集抗原和30μL被檢血清，充分混勻，觀察凝集情況，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性血清和陰性血清對(duì)照。

1.2.2 試管凝集試驗(yàn) 平板凝集試驗(yàn)呈陽(yáng)性的血清再進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)，并以試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果作為最終檢測(cè)結(jié)果。（1）于96孔板第1孔內(nèi)加入180μL 0.5%石炭酸，以后每孔加入90μL 0.5%石炭酸；（2）于第1孔中加入被檢血清20μL，混勻后吸出10μL加入第2孔中，依次倍比稀釋?zhuān)詈?0 μL棄去。第1孔棄去100μL。第1孔至第6孔血清稀釋度分別為1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320；（3）將90μL 20倍稀釋的抗原加入各孔中，振蕩混勻，此時(shí)血清稀釋度分別為1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640；（4）將凝集版置于濕盒內(nèi)放入37℃溫箱，24h后取出觀察結(jié)果；（5）同時(shí)設(shè)陽(yáng)性血清和陰性血清對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判定 （1）虎紅平板凝集試驗(yàn)：在對(duì)照成立的前提下，被檢血清在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象者判為陽(yáng)性；無(wú)凝集現(xiàn)象、呈均勻粉紅色者判為陰性。（2）試管凝集試驗(yàn)：在對(duì)照成立的前提下，以出現(xiàn)50%以上凝集現(xiàn)象的最高稀釋度為血清效價(jià)。血清效價(jià)在1∶80以上判為陽(yáng)性；1∶40判為疑似反應(yīng)；無(wú)凝集現(xiàn)象、液體均勻混濁者判為陰性。

1.2.4 血液樣本布魯菌的分離培養(yǎng)與初步鑒定將血清抗體陽(yáng)性的全血樣本接種于血瓊脂培養(yǎng)基，37℃，于有氧和厭氧環(huán)境條件進(jìn)行了布魯菌的分離培養(yǎng)，3～7d后觀察菌落形態(tài)并進(jìn)行科茲洛夫斯基染色、鏡檢。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 血清抗體檢測(cè)結(jié)果 犬血清抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 犬血清抗體檢測(cè)與病原分離

本次血清抗體調(diào)查共檢測(cè)了196份犬血清，其中呈陽(yáng)性的為75份，占調(diào)查總數(shù)的38.27%，陰性的為121份，占調(diào)查總數(shù)的61.73%。

在檢測(cè)的61份牧羊犬血清中，血清抗體呈陽(yáng)性的為36份，占59.07%。檢測(cè)的63份農(nóng)區(qū)土犬血清中，血清抗體呈陽(yáng)性的為27份，占42.86%。在檢測(cè)的72份寵物犬血清中，血清抗體呈陽(yáng)性的為12份，占16.67%。與何丹［2］等的檢測(cè)結(jié)果相比約高出15個(gè)百分點(diǎn)，這可能與檢測(cè)地區(qū)、時(shí)間和犬種等不同有關(guān)。

2.2 病原分離結(jié)果 共檢測(cè)了75份犬血液樣本用于病原分離。根據(jù)培養(yǎng)特性、鑒別染色和鏡檢等，共獲得11株分離菌，其中牧羊犬、農(nóng)區(qū)土犬和寵物犬血液樣本中，分別獲得7、3株和1株細(xì)菌，病原分離率分別為19.44%、11.11%和8.33%。占檢測(cè)總數(shù)的14.67%。

3 分析與討論

3.1 從檢測(cè)結(jié)果看，3類(lèi)犬布魯菌病血清抗體檢測(cè)陽(yáng)性率均較高。牧羊犬的陽(yáng)性率最高，為59.07%，病原分離率為19.44%。如此高的比例，與當(dāng)?shù)鼐d羊布魯菌病發(fā)生較為嚴(yán)重有關(guān)［3］。由于牧羊犬與羊群接觸密切，可以推斷他們的感染與地方羊布魯菌病持續(xù)發(fā)生和流行密切相關(guān)。農(nóng)區(qū)土犬血清抗體陽(yáng)性率次之，為42.86%，病原分離率為11.11%。這類(lèi)犬多為看家用或肉用，以散放為主，在病原散播和疾病傳播等方面起到了一定的作用。寵物犬的抗體陽(yáng)性率為16.67%，與主人的關(guān)系密切，在社區(qū)內(nèi)活動(dòng)自由，有時(shí)在環(huán)境中隨意排泄糞便，直接危害人類(lèi)健康。這可能是近些年來(lái)的城鎮(zhèn)居民感染比例在不斷上升和感染人員職業(yè)多元化的主要原因之一［4］。

在病原分離方面，3類(lèi)犬血液樣本病原分離率均較高，說(shuō)明血清抗體呈陽(yáng)性的犬只帶菌率較高。本次雖沒(méi)有對(duì)分離菌進(jìn)行種的鑒定，但無(wú)論是由犬種和是由羊種引起的，均可以感染人類(lèi)。這些犬必定成為人類(lèi)布魯菌病的重要傳染源。

3.2 犬布魯菌病與人類(lèi)的健康密切相關(guān)。近10多年來(lái)，布魯菌病發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)［5］。根據(jù)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心（CDC）報(bào)告，我國(guó)人布魯菌病發(fā)病嚴(yán)重，2007年～2011年全國(guó)布魯菌病新發(fā)病人數(shù)分別為19 013、21 901、35 816、33 772、38 151例，呈逐年上升趨勢(shì)，特別是2012年1～6月份為24 139例，已明顯超過(guò)歷史同期。呼倫貝爾市是布魯菌病嚴(yán)重流行區(qū)［6］，農(nóng)牧民占總發(fā)病數(shù)的81.11%，其他職業(yè)的占18.89%［7］。

人布魯菌病幾乎都來(lái)源于動(dòng)物，除牛、羊外，由犬感染人的病例報(bào)道也日益增多［8－11］，犬也是重要傳染源之一［5］。而動(dòng)物布魯菌病的報(bào)告病例遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于人布魯菌病報(bào)告病例，甚至出現(xiàn)了某些地方有布魯菌病人而沒(méi)有布魯菌病畜的情況［12］。這表明我們對(duì)動(dòng)物布魯菌病的監(jiān)測(cè)力度很不夠。近些年我國(guó)政府雖致力于牛、羊、豬的布魯菌病檢疫和撲滅工作，但尚未給犬布魯菌病以足夠重視［12］。

我國(guó)是養(yǎng)犬大國(guó)，隨著人們生活水平的提高，犬的數(shù)量還會(huì)不斷增加，因此我們應(yīng)控制養(yǎng)犬?dāng)?shù)量；實(shí)施強(qiáng)制免疫和病原監(jiān)測(cè)相結(jié)合等措施；將肉用犬的臨床檢疫和獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)督列入常規(guī)檢疫規(guī)范。加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物布魯菌病的認(rèn)識(shí)，實(shí)施以檢疫、免疫、淘汰為中心的綜合防控措施是有效控制人布魯菌病的根本措施［13］。

［1］ 石萍，郝繼浩，賀慶生，等.首次從犬體內(nèi)分離出羊種布魯菌變異菌株的鑒定［J］.中國(guó)地方病學(xué)雜志，1992，11（4）：205－206.

［2］ 何丹，韋海濤，施振聲，等.北京地區(qū)犬布魯桿菌病血清學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2009，45（2）：64－65.

［3］ 高明華，張志琰，樊慶德，等.呼倫貝爾地區(qū)綿羊布魯菌病血清抗體調(diào)查［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（2）：115－117.

［4］ 崔步云.中國(guó)布魯菌病疫情監(jiān)測(cè)與控制［J］.疾病監(jiān)測(cè)，2007，22（10）：649－651.

［5］ 夏咸柱.寵物與人類(lèi)健康［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2010，20（11－12）：5－7.

［6］ 陳文婧，崔步云，張慶華，等.內(nèi)蒙古自治區(qū)布氏菌病流行50年特征分析［J］.中國(guó)地方病防治雜志，2008，23（1）：56－58.

［7］ 韓永，吉祥，雷彩云.呼倫貝爾市1956－2008年布魯菌病疫情流行特征［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2009，31（11）：1071－1072.

［8］ Wallach J C，Giambartolomei G H，Baldi P C，etal.Human infection with M－strain of Brucella canis［J］.Emerg Infect Dis，2004，10：146－148.

［9］ Lucero N E，Jacob N O，Ayala S M，etal.Unusual clinical presentation of brucellosis caused by Brucella canis［J］.J Med Microbiol，2005，54：505－508.

［10］Imaoka K.Brucellosis（1999.4－2007.3）Infectious agents surveillance report in Japanese［J］.Tokyo：Ministry of Health，Labour and Welfare；and National Institute of Infectious Diseases，2007，28：227－228.

［11］Nomura A，Imaoka K，Imanishi H，etal.Human Brucella canis infections diagnosed by blood culture［J］.Emerg Infect Dis，2010，16（7）：1183－1184.

［12］周桂蘭，李秀敏，鄭瑞峰.犬布魯菌病防檢工作不容忽視［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2001，37（11）：60.

［13］米景川，張慶華，范蒙光，等.內(nèi)蒙古人間布魯菌病的流行形勢(shì)及其防治策略［J］.醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制，2009，25（2）：128－129.