張榮品，李玉芝，張敬雅，高翠華，馮 謹(jǐn)，張敬朋

觀察銀丹心腦通軟膠囊對動(dòng)脈硬化（AS）大鼠斑塊面積及高敏C反應(yīng)蛋白含量的影響，探討其抗動(dòng)脈硬化的作用機(jī)制，為臨床合理應(yīng)用銀丹心腦通軟膠囊預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化性疾病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料 雄性ApoE小鼠，C57BL／6J品系，10周齡，體重26g～28g，購自北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。無菌高脂高膽固醇飼料購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，含21%脂肪和0.15%膽固醇。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑 銀丹心腦通軟膠囊：貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥股份有限公司；批號：Z19980015。辛伐他?。汉贾菽硸|制藥有限公司；批號H19990366。膽固醇（TC）檢測試劑盒：北京中生北控生物科技股份有限公司；批號010617。三酰甘油（TG）檢測試劑盒：北京中生北控生物科技股份有限公司；批號015626。小鼠高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）ELISA檢測試劑盒：尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司；批號2B901。戊巴比妥鈉：北京盛旭百川科技有限公司；批號090234。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥 雄性ApoE小鼠飼養(yǎng)在SPF動(dòng)物房中。頸動(dòng)脈套環(huán)實(shí)驗(yàn)前兩周給予高脂高膽固醇飼料（21%脂肪＋0.15%膽固醇）飼養(yǎng)直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。除對照組外，其余各組ApoE小鼠均于實(shí)驗(yàn)初期行頸動(dòng)脈套管術(shù)以誘發(fā)頸動(dòng)脈粥樣硬化病變。實(shí)驗(yàn)分5組，每組12只，對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，其余各組均給予高脂飼料。辛伐他汀于頸動(dòng)脈套環(huán)術(shù)后按人體等效劑量給藥，為9.1mg／kg。銀丹心腦通于頸動(dòng)脈套環(huán)術(shù)后給予，按人體等效劑量的1倍、2倍、4倍給藥。給藥周期為4周。1.2.2 術(shù)前準(zhǔn)備 將0.3mm內(nèi)徑硅膠管縱向剖開，剪成0.5 cm長的小段，浸泡在95%乙醇中備用。高壓滅菌消毒手術(shù)用器械、棉球、手術(shù)針線等。

1.2.3 手術(shù)過程 ApoE-／-小鼠腹腔注射50mg／kg戊巴比妥鈉，消毒頸部及周圍皮膚，除毛；手術(shù)剪剪開皮膚，縱向鈍性分離頸部肌群，分離右頸總動(dòng)脈，小心將準(zhǔn)備好的硅膠管套在右頸總動(dòng)脈上，并用三根0號線分別結(jié)扎硅膠管的上、中、下端；術(shù)畢，將手術(shù)部位組織恢復(fù)，縫合頸部皮膚。

1.3 動(dòng)物采血及組織取材 最后一次注射后24h，小鼠摘眼球取血，3 500r／min離心10min，取血清，-80℃凍存待測。手術(shù)剪剪開胸腔，暴露心臟，用一次性輸液器針頭刺入左心室，剪開右心房，取右頸總動(dòng)脈置于10%中性緩沖甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。應(yīng)用SPSS 17.0軟件處理，采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），兩組用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 銀丹心腦通軟膠囊對小鼠血清脂質(zhì)及hs-CRP的影響與對照組相比，模型組可明顯升高血清總膽固醇水平；陽性藥可明顯降低血清總膽固醇水平；銀丹心腦通各組均可以明顯降低血清總膽固醇水平，但各給藥組與對照組相比TG水平?jīng)]有明顯變化。與對照組相比，模型組炎癥因子表達(dá)顯著升高；辛伐他汀和銀丹心腦通低、中劑量組對hs-CRP的表達(dá)顯著下降（P＜0.05）。詳見表1。

表1 銀丹心腦通軟膠囊對小鼠血清脂質(zhì)及hs-CRP的影響（x±s）

2.2 銀丹心腦通軟膠囊對動(dòng)脈硬化小鼠斑塊面積的影響 右側(cè)頸動(dòng)脈套環(huán)6周后，模型對照組小鼠頸動(dòng)脈出現(xiàn)明顯的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。銀丹心腦通低劑量組與模型對照組相比，斑塊面積沒有減少，中高劑量組與陽性藥組；模型組與對照組相比均能明顯較小動(dòng)脈硬化斑塊面積（P＜0.05）。詳見表2。

表2 銀丹心腦通軟膠囊對小鼠斑塊面積的影響（x±s）

3 討 論

動(dòng)脈粥樣硬化性疾病是嚴(yán)重危害人類健康的一大類疾病，被稱為發(fā)達(dá)國家的“頭號殺手”，在發(fā)展中國家發(fā)病率也逐年升高。世界衛(wèi)生組織預(yù)測，在世界范圍內(nèi)的傳染性疾病病死率得到有效控制之后，到2020年心血管疾病將成為全世界第一死因。AS是多因素疾病，病因復(fù)雜，近年來炎癥在其發(fā)生和發(fā)展過程中重要作用越來越被人們關(guān)注［1］。

ApoE-／-小鼠是目前研究動(dòng)脈粥樣硬化性疾病最為常用的動(dòng)物模型之一，可以通過高脂飲食誘發(fā)小鼠體內(nèi)高膽固醇血癥和動(dòng)脈粥樣硬化［2］。頸動(dòng)脈套環(huán)可以在保持內(nèi)皮結(jié)構(gòu)完整性同時(shí)快速、定點(diǎn)誘導(dǎo)AS的發(fā)生。高脂飲食飼養(yǎng)與頸動(dòng)脈套環(huán)相結(jié)合可以促進(jìn)更多動(dòng)脈粥樣硬化性斑塊的快速形成，并且所形成的斑塊在斑塊形態(tài)、內(nèi)皮表達(dá)形式和發(fā)病機(jī)制方面具有與人類斑塊更相似的優(yōu)點(diǎn)。

多項(xiàng)研究顯示，hs-CRP作為目前最可靠的AS炎癥標(biāo)志物，與斑塊的進(jìn)展密切相關(guān)［3］，hs-CRP對急性冠狀動(dòng)脈綜合征的預(yù)后和對“健康”成人將來冠狀動(dòng)脈事件具有預(yù)報(bào)作用［4］。

銀丹心腦通膠囊主要成分有銀杏葉、丹參、燈盞細(xì)辛、三七、絞股藍(lán)、大蒜、山楂、天然冰片八味苗藥，具有活血化瘀、行氣止痛、消食化滯的功能?，F(xiàn)代藥理研究顯示，具有快速改善心腦血管病引起的相關(guān)癥狀，同時(shí)又兼顧了對心腦血管病重要危險(xiǎn)因子血脂的調(diào)理。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，銀丹心腦通軟膠囊具有抑制動(dòng)脈硬化斑塊進(jìn)展的作用，且呈劑量依賴性，其作用的發(fā)揮不僅在于銀丹心腦通能顯著降低血脂，更重要的是它可抑制炎癥因子hs-CRP的釋放，這也為銀丹心腦通軟膠囊的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］ Ross R.Atherosclerosis-an inflammatory disease［J］.N EngI J Med，1999，34.115-126.

［2］ Baetta R，Silva F，Comparato C，et al.Perivascular carotid collar placement induces neointima formation and outward arterial remodeling in mice independent of apolipoprotein E deficiency or western-type diet feeding［J］.Atherosclerosis，2007，195：112-124.

［3］ 王衛(wèi)明.C反應(yīng)蛋白的研究進(jìn)展［J］.心血管病學(xué)進(jìn)展，2005，26（1）：7.

［4］ 龔瑞瑩，劉明，龐永誠，等.急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者h(yuǎn)s-CRP、血脂和膽紅素的臨床研究［J］.中國醫(yī)藥指南，2011，9（24）：275-277.