肖立群 譚凌平 單明輝

（河北省大廠縣大廠鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)站，河北廊坊 065300）

目前，我國奶牛酮病發(fā)病率顯著增高，尤其是隱形酮病，會降低奶產(chǎn)量，給奶牛業(yè)發(fā)展帶來了重大的經(jīng)濟(jì)損失。其臨床表現(xiàn)為頑固性消化紊亂，呼出氣放酮味，產(chǎn)乳量下降，機(jī)體脫水和一定的神經(jīng)癥狀；臨床體征為酮血、酮尿、酮乳、低血糖、血漿游離脂肪酸濃度升高和肝糖含量降低[1]。為了進(jìn)一步研究奶牛酮病的發(fā)生機(jī)理，我們首次研究奶牛酮病對抗氧化系統(tǒng)的影響，旨在為臨床防治奶牛酮病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

奶牛酮病陽性血清和對照血清分別采自某牛場。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

1.2.1 722分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠制造。

1.2.2 低速臺式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.2.3 微量移液器，中外合資上海求精生化試劑儀器有限公司。

1.2.4 電熱恒溫水浴鍋，江蘇常熟醫(yī)療器械廠。

1.2.5 漩渦混勻器，上海第一醫(yī)學(xué)儀器廠。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

1.3.1 T-SOD、MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.3.2 無水乙醇（分析純）分子式：CH3CH2OH，天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑。

1.3.3 無水乙酸（分析純）分子式：CH3COOOH，天津市化學(xué)試劑二廠。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動物處理

應(yīng)用酮粉法對某農(nóng)場的荷斯坦奶牛進(jìn)行酮病抽樣檢測。實(shí)驗(yàn)動物分為兩組，每組10頭，分別為對照組和陽性組。粉劑配置及操作方法如下：

2.1.1 配制 亞硝基鐵氰化鈉0.5 g，無水碳酸鈉10 g，硫酸銨20 g，將以上藥物研磨混勻，不宜太細(xì)，貯存于棕色瓶中備用。

2.1.2 操作方法 取粉末0.1 g置于載玻片上或反應(yīng)盤內(nèi)，加入新鮮的尿液或乳液2滴，觀察顏色反應(yīng)[4]。

2.2 血清T-SOD活性測定

試劑盒比色法。

2.3 血清MDA含量的測定

試劑盒比色法。

2.4 數(shù)據(jù)處理

用Excel軟件處理。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 酮病陽性牛的診斷｛4｝

判斷方法：酮體的含量與實(shí)驗(yàn)色澤反應(yīng)的快，慢，深淺成正比，陰性反應(yīng)成土褐色。陽性結(jié)果以“+”表示，并代表酮體的大約含量，可分為：

3.1.1 有紫色跡象，并逐漸加深，于30 s達(dá)定點(diǎn)者為（+，+，+，+），約含酮體4.0 mg/l以上。

3.1.2 于30 s開始顯微紫色，60 s后呈現(xiàn)紫色為（+，+，+），約含酮體2.0～4.0 mg/l。

3.1.3 60 s開始淡紫色，2 min后呈較深紫色為（+，+），約含酮體1.5～2.0mg/l。

3.1.4 3min后有輕度紫色為（+），約含酮體1.0～1.5mg/l。

3.1.5 3min后有輕微紫色跡象，5min后仍無明顯改變?yōu)椋?/-），約含酮體0.5mg/l。

3.2 血清T-SOD活力及MDA含量測定結(jié)果

表1 各組實(shí)驗(yàn)血清中T-SOD活力及MDA含量測定結(jié)果

由上表數(shù)據(jù)表明對照組的T-SOD活力顯著大于陽性組（p<0.05），陽性組的MDA活力顯著大于對照組（p<0.05）

4 分析與討論

酮病的發(fā)病機(jī)理很復(fù)雜，普遍接受的學(xué)說是糖缺乏理論。機(jī)體低血糖是發(fā)生酮病的關(guān)鍵。由于各種原因所致碳水化合物供應(yīng)不足及高泌乳消耗大量的糖，導(dǎo)致機(jī)體低血糖及能量負(fù)平衡。為此，動用機(jī)體的脂肪和體蛋白，補(bǔ)充能量的不足。但是脂肪和蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生大量的游離脂肪酸和生酮氨基酸，經(jīng)過肝的β-氧化為乙酰coA，乙酰coA可與草酸乙酸縮合成檸檬酸，經(jīng)三羧循環(huán)氧化供能。如果生成草酸乙酸的先質(zhì)丙酸的碳水化合物不足，使得大量乙酰coA不能進(jìn)入三羧酸循環(huán)，導(dǎo)致酮體蓄積，進(jìn)而引起一系列的代謝與機(jī)能紊亂，如前胃消化紊亂，神經(jīng)機(jī)能障礙及內(nèi)分泌機(jī)能紊亂等｛1｝。

SOD是一類廣泛存在于動植物及微生物中含金屬酶類。MDA的測定常常與SOD的測定相互配合，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除自由基的能力，而MDA的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，通過SOD與MDA的測定使我們從抗氧化角度揭示奶牛酮病的發(fā)生機(jī)理。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為對照組的T-SOD活力顯著大于陽性組，陽性組的MDA活力顯著大于對照組。發(fā)生原因可能有以下幾個方面：一方面為奶牛發(fā)生酮病以后，機(jī)體發(fā)生營養(yǎng)代謝紊亂或自身采食量減少，引起體內(nèi)Cu、Zn量吸收不足，導(dǎo)致動物機(jī)體中SOD含量減少即T-SOD活力有所下降，消除自由基能力減弱。同時間接引起MDA含量增高。另一方面為酮病的產(chǎn)生直接原因是酮體濃度增高，而酮體的主要成分是酸性物質(zhì)，其大量蓄積的結(jié)果常導(dǎo)致動物酸堿平衡失調(diào)，引起酸中毒。溶液中的PH過大（過酸）、過大（過堿）都能使酶蛋白變性而失活。從而也可導(dǎo)致上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5 結(jié)論

5.1 酮病可導(dǎo)致血清中T-SOD活力下降，MDA含量增高。

5.2 酮病影響奶牛機(jī)體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的功能，對揭示酮病發(fā)生機(jī)理具有重要意義。

[1]張洪友，夏成，楊顆粒主編.實(shí)用動物內(nèi)科學(xué)[M].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2001：191.

[2]王永琴，梁宏德，金成漢主編.家畜病理生理學(xué)[M].長春：吉林科學(xué)技術(shù)出版社，1998：225.

[3]周順伍主編.動物生物化學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1995：115.

[4]張洪友，夏成，等.定性檢測荷斯坦奶牛圍產(chǎn)期和泌乳期尿酮、乳酮的變化規(guī)律[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展.2003，24（1）：89-91.