劉娜 楊保仲 王穎莉 葛曙光

吡羅昔康（piroxicam）為非甾體類抗炎藥，具有鎮(zhèn)痛、抗炎及解熱作用，臨床上主要用于緩解各種關節(jié)炎及軟組織病變的疼痛和腫脹的對癥治療，通過抑制環(huán)氧合酶使組織局部前列腺素的合成減少，抑制白細胞的趨化性和溶酶體酶的釋放而發(fā)揮藥理作用，具有半衰期長（50 h）、劑量小、無蓄積作用等特點，但由于藥物口服存在首過效應，易刺激胃腸道，長期服用易導致消化道出血、潰瘍、肝功能異常、血小板減少等不良反應。經(jīng)皮給藥是其有效給藥途徑之一，它可以提高患部藥物濃度，增強局部抗炎作用，避免對胃腸道的不良反應[1]。近年來對新型吡羅昔康透皮制劑的研究很多，如貼片、凝膠等。藥物只有溶解后才能透過皮膚[2-4]，但在普通外用制劑中，吡羅昔康溶解度較小，藥物含量較低，透皮較差，影響藥效發(fā)揮。

微乳是由水、油、表面活性劑和助表面活性劑按適當比例混合，自發(fā)形成的穩(wěn)定制劑，且對難溶性藥物的增溶作用明顯，可明顯提高藥物含量，增大藥物濃度梯度及膜的通透性，使其透皮擴散速率增加，藥物吸收明顯加快，減輕首過效應，提高生物利用度[5-6]。本研究制備吡羅昔康微乳并初步探討其抗炎鎮(zhèn)痛作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 昆明種小鼠（20±2）g，雄性Wistar大鼠（150±10）g，均由山西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

1.2 藥品與試劑 丙二醇月桂酸酯Lauroglycol FCC、聚氧乙烯蓖麻油EL-35 Cremophor EL-35、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯Labrasol、二乙二醇單乙基醚Transcutol P（均購自南京都萊生物科技有限公司），吡羅昔康（金壇市前藥制藥原料廠，白色粉末，批號20120906），卡拉膠（天津市博迪化工有限公司），二甲苯、甲醛、無水乙醇（均為分析純，天津市北辰方正試劑廠），醋酸（分析純，天津市耀華化學試劑有限責任公司），雙氯芬酸鈉凝膠（武漢馬應龍藥業(yè)集團股份有限公司，H10950214，1%），吡羅昔康凝膠（湖北廣濟藥業(yè)股份有限公司，國藥準字H10960333，20 g：100 mg），脫毛膏（廣州尚慧化妝品有限公司，SH/03/29，80 g）。

1.3 儀器 JA4003精密電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），78-1型磁力加熱攪拌器（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司），GZX-9076 MBE電熱鼓風干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠），微量移液器（上海求精生化試劑儀器有限公司），8 mm打孔器，千分尺（北京第二量具廠）。

1.4 方法

1.4.1 微乳的制備 采用油相Lauroglycol FCC，表面活性劑Labrasol、Cremophor EL，助表面活性劑Transcutol P，在室溫下將上述處方成分按比例充分混合后，加吡羅昔康原料藥，超聲溶解，在攪拌條件下加入水，即得透明的吡羅昔康微乳。本實驗制得的藥物含量為0.4%[7]。

1.4.2 動物分組及給藥 取昆明種小鼠72只，雌雄各半，隨機平均分為六組，即空白對照組，陽性對照組，低、中、高劑量微乳組，吡羅昔康凝膠組。各組小鼠用推子和脫毛膏去毛，面積不小于1.5 cm×1.5 cm。在去毛處，吡羅昔康微乳低、中、高劑量組分別按1、2、4 mg/kg用移液器精確給藥。吡羅昔康凝膠組涂抹0.5%的吡羅昔康凝膠0.008 g，陽性對照組涂抹1%的雙氯芬酸鈉凝膠0.02 g[8]?？瞻讓φ战M則給予相當于中劑量組給藥體積的生理鹽水，2次/d，連續(xù)7 d。

熱板法：控制熱板溫度為（55±0.5）℃，將小鼠逐只放在熱板上，測定其正常痛反應（舔后足或抬后足并回頭）時間，每只測兩次，間隔5 min，以平均值在5～30 s內(nèi)為合格。選出初試合格的雌性小鼠72只，隨機平均分為以上六組，給藥同上[6]。

取Wistar雄性大鼠60只，給藥前用千分尺測量各大鼠右后肢的正常足上下徑。微乳低、中、高劑量組分別按0.67、1.33、2.67 mg/kg給藥。吡羅昔康凝膠組涂抹0.036 g，陽性對照組涂抹0.2 g[8]。分組及給藥同上。

1.4.3 吡羅昔康微乳鎮(zhèn)痛作用研究

1.4.3.1 小鼠痛閾值的測定（熱板法） 給藥7 d，末次給藥后分別記錄各組小鼠15、30、45、60、90 min時的痛反應時間，如小鼠在熱板上60 s無反應計60 s。計算：痛閾提高百分率 =（b-a）/a×100%（b：用藥后痛閾值；a：用藥前痛閾值）[9]。

1.4.3.2 抑制醋酸致小鼠扭體反應實驗 六組小鼠給藥7 d，末次給藥30 min后各只小鼠腹腔注射0.6%的醋酸0.2 ml。觀察記錄注射醋酸后15 min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，計算：鎮(zhèn)痛抑制率=（a-b）/a×100%（a：空白對照組扭體數(shù)；b：給藥組扭體數(shù)）[10]。

1.4.4 吡羅昔康微乳抗炎作用研究

1.4.4.1 抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗 六組小鼠給藥7 d，末次給藥1 h后各只小鼠右耳涂20 μl二甲苯致炎，以左耳作對照。30 min后頸椎脫臼處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑8 mm的不銹鋼圓沖沿耳緣相同部位沖下，電子天平稱重，計算：腫脹度=右耳重-左耳重，腫脹抑制率=（a-b）/a×100%（a：空白對照組平均腫脹度；b：給藥組平均腫脹度）[8]。

1.4.4.2 抑制卡拉膠致大鼠足跖腫脹實驗 大鼠給藥7 d，末次給藥1 h后于各鼠右后足跖中部皮下注入1%的卡拉膠0.1 ml致炎，于致炎后30、60、90、120、240、360 min，分別用千分尺測定致炎側足的上下徑，計算：腫脹度=致炎后的足上下徑 致炎前的足上下徑。腫脹抑制率=（a-b）/a×100%（a：空白對照組平均腫脹度；b：給藥組平均腫脹度）[8]。

1.5 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以（±s）表示，熱板實驗和卡拉膠致大鼠足跖腫脹實驗的比較采用重復測量資料的方差分析，醋酸致小鼠扭體實驗和二甲苯致小鼠耳腫脹實驗進行單因素方差分析，各實驗組間兩兩比較采用DUNNET法分析檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組對小鼠痛閾的影響 與空白對照組相比，高、中、低劑量微乳組、凝膠組和陽性對照組于給藥后均能提高小鼠痛閾值。中、低劑量微乳組與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。中劑量組與陽性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與吡羅昔康凝膠組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。高劑量組對小鼠痛閾的提高在60 min時達最大，僅有41.97%。低劑量組在60 min內(nèi)鎮(zhèn)痛作用逐漸增強，且痛閾提高率在60 min時達到最大，可達136.06%以上。見表1。

表1 對小鼠痛閾提高百分率的影響

2.2 各組對醋酸致小鼠扭體反應的影響 與空白對照組相比，局部外用不同劑量的吡羅昔康微乳、吡羅昔康凝膠及雙氯芬酸鈉凝膠均能抑制醋酸所致小鼠腹部疼痛，減少扭體次數(shù)，其中中、低劑量組更為明顯，抑制率分別為75.7%、59.6%，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。與陽性對照組比較，中劑量組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），高、低劑量組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。從劑型比較來看，微乳與凝膠相比，中劑量組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 各組對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 與空白對照組比較，微乳高劑量組抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹作用不明顯，比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；中、低劑量組有明顯抑制作用，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），抑制率分別為61.39%和60.25%。與陽性對照組比較，高劑量組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），中、低劑量組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），劑型比較差異亦無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表3。

表2 各組小鼠扭體次數(shù)及抑制率比較

表3 各組小鼠耳廓腫脹度及抑制率比較

2.4 各組對卡拉膠致足跖腫脹的影響 與空白對照組相比，各微乳組均能顯著抑制卡拉膠所致大鼠的足跖腫脹（P<0.01），與陽性對照組比較，高、中劑量組有顯著差異（P<0.01），低劑量組無統(tǒng)計學差異（P>0.05），中劑量微乳組與凝膠組比較2 h后無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。見表4。

2.5 給藥后皮膚給藥部位病理結果 實驗結束后，取下空白組和中劑量微乳組皮膚制作切片。顯微鏡下觀察：對照組皮膚結構完整（如圖1中A圖所示），被覆鱗狀上皮完整無缺失，表皮層未見增厚，真皮內(nèi)未見血管擴張充血、炎細胞浸潤，毛囊、皮脂腺結構完整，無皮膚刺激性；微乳組皮膚經(jīng)處理后（如B圖所示），皮膚結構完整，角化層未見增厚，同A圖對比，皮下視野所見基本相同，無皮膚刺激性。綜上所示，在多次給藥的皮膚刺激性實驗中，微乳是安全的，對皮膚無刺激性。

表4 各組對卡拉膠致足跖腫脹作用的影響

圖1 多次給藥皮膚刺激性實驗病理切片圖

3 討論

動物脫毛后，要用棉簽蘸取溫生理鹽水清洗皮膚并恢復1 d后再給藥，防止脫毛膏對皮膚造成的損傷影響經(jīng)皮滲透結果，給藥后可見，微乳比凝膠經(jīng)皮吸收迅速，為避免藥物流失，要待其充分吸收后方能將動物放入侍養(yǎng)箱中，以免影響實驗結果。

藥效學實驗結果表明：（1）抗炎實驗結果表明，低、中、高劑量的吡羅昔康微乳都有不同程度的抗炎作用，以中、低劑量組的效果更為顯著。（2）鎮(zhèn)痛實驗中，吡羅昔康各劑量組均能抑制醋酸所致小鼠腹部疼痛，減少扭體反應的發(fā)生。中、低劑量組可明顯改善小鼠痛閾提高率，以中劑量組鎮(zhèn)痛作用最為顯著，且可延長小鼠的痛反應潛伏期，有效鎮(zhèn)痛作用持久，可見其有與陽性對照藥相近或更優(yōu)的鎮(zhèn)痛作用，并且優(yōu)于市售的吡羅昔康凝膠。（3）吡羅昔康微乳具有促滲和緩釋的雙重作用，使藥物能夠快速、持續(xù)的發(fā)揮作用且連續(xù)使用對皮膚無刺激性。

由此可見，吡羅昔康新制劑微乳局部外用安全可靠，經(jīng)皮吸收效果良好，有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用，可提高生物利用度，減少不良反應的發(fā)生，作為一種新型制劑，為下一步開發(fā)及在臨床方面的深入研究奠定了基礎。

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