吳凡　屠蔭奇　宋歌

【摘 要】現(xiàn)階段，抗生素已經(jīng)成為全球使用量最大，應(yīng)用最廣泛的藥物之一?？股夭粌H在人類醫(yī)療中使用，每年都逐漸有大量的抗生素類藥物被用于禽畜養(yǎng)殖中，這其中70%-75%的抗生素不能完全被機(jī)體吸收，一部分在禽畜體內(nèi)長期累積，大部分隨禽畜糞尿進(jìn)入土壤，從而導(dǎo)致土壤污染。這不僅會影響土壤中微生物群落形態(tài)的變化，還可能誘導(dǎo)微生物產(chǎn)生抗生素抗性基因，耐藥性細(xì)菌的產(chǎn)生增加了養(yǎng)殖業(yè)的風(fēng)險，人在食用了含有抗生素的禽畜、植物后，威脅人類健康，由此引發(fā)的生態(tài)問題亦令人關(guān)注。深入研究禽畜糞便中抗生素的殘留狀況及糞便中微生物的抗性狀況具有重要意義，這些研究有助于我們從源頭上了解抗生素的污染，對于抗生素污染的的防治有重要意義。

【關(guān)鍵詞】抗生素污染；多重抗性微生物；生態(tài)分布

0.前言

隨著抗生素在養(yǎng)殖業(yè)方面濫用情況越發(fā)嚴(yán)重，越來越多的抗生素進(jìn)入環(huán)境已成為不爭的事實。尤其是畜禽排泄物作為有機(jī)肥用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，可能造成土壤抗生素污染，危及農(nóng)產(chǎn)品安全。殘留的抗生素隨動物糞便施肥進(jìn)入土壤后，會被植物吸收積累，并破壞植物根際周圍的微生態(tài)平衡?？股匚廴灸壳耙呀?jīng)成為國際上研究熱點之一，但據(jù)我們了解目前這些研究還處于初步階段，而且在我國還沒有引起足夠的重視。大多數(shù)研究局限于水生生態(tài)系統(tǒng)，而面對復(fù)雜的抗生素污染的源頭——糞便的行為歸趨、生態(tài)毒性的研究還不夠，抗生素廣泛應(yīng)用于畜禽的養(yǎng)殖業(yè)中，其中85%以上的抗生素以原形或代謝物的形式經(jīng)糞尿排入到環(huán)境中，導(dǎo)致畜禽的糞便中含有大量的抗生素，這是抗生素污染的源頭，所以，從糞便中篩選出抗性細(xì)菌就成了目前研究水平上的一個重要的課題，抗性細(xì)菌的篩選對如何減少抗生素污染、抗性基因在整個抗生素污染鏈條中的作用等等有重要的意義，因此我們以此為題進(jìn)行一系列基于抗性細(xì)菌篩選的實驗。

1.研究對象和研究方法

在項目開始之前，我們查閱了大量的文獻(xiàn)，并到當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖場進(jìn)行實地考察，掌握了第一手資料，對抗生素的濫用情況有了深入的了解。在暑期完成了酵母菌對污水染料的脫色及酶活測定研究，熟練掌握了微生物培養(yǎng)的基本流程、無菌操作技術(shù)、高速離心機(jī)等儀器的使用。

1.1調(diào)研了解在禽畜養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用情況

分別選擇五個豬養(yǎng)殖場和雞養(yǎng)殖場，并進(jìn)行調(diào)研，調(diào)研內(nèi)容包括養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖規(guī)模常用的抗生素種類，常用抗生素的用量及使用方法，每個養(yǎng)殖場每天的出糞量及糞便去向。

1.2分別測定豬，雞糞便中細(xì)菌，放線菌，真菌的數(shù)量

實驗糞便樣品按五點采樣法采取，用平板菌落計數(shù)法，細(xì)菌選用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，選取10-5，10-6，10-7三個稀釋度涂布；放線菌選用高氏一號培養(yǎng)基，取10-4，10-5，10-6涂布；真菌選用馬丁氏培養(yǎng)基，取10-2，10-3，10-4進(jìn)行涂布。培養(yǎng)后記錄每個平板上的菌落形成單位（cfu）。

1.3測定豬，雞糞便中，單抗和多抗性（雙抗，三抗和四抗）細(xì)菌的數(shù)量

在進(jìn)行了養(yǎng)殖戶調(diào)研之后得知，在豬和雞的養(yǎng)殖過程中常用的抗生素有青霉素、頭孢氨芐、鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、林可霉素、阿司匹林等，本實驗選取阿莫西林，慶大霉素，頭孢氨芐，卡那霉素四種抗生素進(jìn)行細(xì)菌的抗性研究，并分別進(jìn)行了單抗，雙抗，三抗和四抗共15種組合情況下抗性細(xì)菌的計數(shù)。

1.4研究抗生素與糞便中抗性細(xì)菌數(shù)量之間的劑量效應(yīng)關(guān)系

將采集的糞便樣品用無菌生理鹽水制成懸液，并加入不同濃度的慶大霉素（價格低廉、取材方便）進(jìn)行培養(yǎng)，每隔一段時間采用平板菌落計數(shù)法對其中的可培養(yǎng)異養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)和抗性細(xì)菌計數(shù)，對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

綜合各方面因素后選取了取阿莫西林，慶大霉素，頭孢氨芐，卡那霉素四種抗生素進(jìn)行細(xì)菌的抗性研究，并分別進(jìn)行了單抗，雙抗，三抗和四抗共15種組合情況下抗性細(xì)菌的計數(shù)。最后選取慶大霉素并設(shè)定不同濃度進(jìn)行抗生素與抗性細(xì)菌數(shù)量之間的劑量效應(yīng)關(guān)系研究?？傻玫街車B(yǎng)殖場糞便中抗生素含量的初步研究結(jié)果。

2.研究結(jié)果與分析

不同養(yǎng)殖時期雞糞和豬糞中多重抗生素抗性細(xì)菌的分布

3.結(jié)論與對策

經(jīng)過對豬，雞養(yǎng)殖戶進(jìn)行調(diào)研取樣，可以分析出禽畜糞便中微生物的分布狀況及抗生素的使用對禽畜糞便中微生物群落的影響。通過數(shù)據(jù)分析看出在養(yǎng)雞場中，青霉素的使用量最大，其次是氨基糖苷類的抗生素，在養(yǎng)豬場中則以頭孢類和青霉素類的抗生素居多。從養(yǎng)殖場的糞尿中分離出的細(xì)菌進(jìn)行實驗室篩選和培養(yǎng)，分別檢測其對于四種抗生素十五種不同組合形式的抗性情況。通過對抗生素抗性的檢驗，我們可以直觀的分析出不同抗生素的組合類型的所占比重，從而可以有針對性的采取措施減少土壤中抗生素污染。 [科]

【參考文獻(xiàn)】

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