★ 李爽呂佳佳馬興苗范玲劉志輝（.南京中醫(yī)藥大學(xué)200級(jí)碩士研究生 南京 20046；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)一附院 南京 20036）

清肺消痤顆粒由黃芩、丹參、赤芍等九味中藥組成，具有清火解毒、涼血活血之功效，用于痤瘡的治療，療效顯著。方中黃芩為君藥，黃芩苷為黃芩中的活性成分之一，具有抗菌消炎等作用[1-3]。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)制劑中黃芩的有效成分進(jìn)行了定量研究，為建立該制劑的質(zhì)量控制方法提供了參考依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；Mettler Toledo精密電子天平（瑞士梅特勒-托利多（上海）公司）；Millipore-Q純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）。

黃芩苷對(duì)照品（購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用，批號(hào)為110715-200815）；液相測(cè)定用甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil柱，（250mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸水（76：24）；流速：1mL/分；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：315 nm；進(jìn)樣量10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

精密稱取黃芩苷對(duì)照品20.94 mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度即得。

2.2.2 供試品溶液

將清熱消痤顆粒研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加70%乙醇40 mL，加熱回流3小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液至100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌圓底燒瓶和殘?jiān)?，洗滌液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液

取缺黃芩的陰性樣品，分別按“2.1.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)得HPLC圖譜（見(jiàn)圖1）。結(jié)果表明，樣品與對(duì)照品在相同位置有吸收，分離度大于1.5，陰性無(wú)干擾，理論塔板數(shù)按黃芩苷計(jì)算應(yīng)不低于3000。

圖1 黃芩苷對(duì)照品（A）、供試品（B）、陰性樣品（C）色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取對(duì)照品儲(chǔ)備液，加甲醇依次稀釋得到濃度分別為52.35、26.18、13.09、6.54和3.18 μg/mL的對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得到回歸方程Y=25.689X-6.8359，r=0.9999，結(jié) 果 表明 黃 芩 苷 在0.032 μg-0.523 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為20.9 μg/mL的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果以黃芩苷峰面積計(jì)RSD為0.72%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12和24小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定，黃芩苷以峰面積計(jì)RSD為1.5%，說(shuō)明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次清肺消痤顆粒約0.2g，精密稱定，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果黃芩苷的平均含量為27.58 mg?g-1，RSD為1.6%，

2.8 加樣回收試驗(yàn)

精密稱一定量取清肺消痤顆粒（黃芩苷含量為24.3mg?g-1），共6份，每份加入黃芩苷對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定、計(jì)算（結(jié)果見(jiàn)表1）。

表1 黃芩苷加樣回收率結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定

取清肺消痤顆粒中試產(chǎn)品3批，依法制備供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算。結(jié)果三批中試樣品黃芩苷含量分別為26.30、25.28、23.18 mg/g。

3 討論

黃芩為方中君藥，故以其所含的有效成分黃芩苷作為制劑的質(zhì)量控制的指標(biāo)。黃芩苷在280nm及315nm均有較大的吸收，但若以280nm波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，在黃芩苷峰前有一雜質(zhì)峰干擾，且不易削除和減小，故選擇測(cè)定波長(zhǎng)確定315nm，方法學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，準(zhǔn)確可靠。黃芩苷是一種相對(duì)不穩(wěn)定的化合物[4]，所以提取液應(yīng)避光保存并及時(shí)測(cè)定，以免產(chǎn)生誤差。而且不同產(chǎn)地的黃芩中黃芩苷含量差異較大[5]，并受采收、加工、貯藏等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響，應(yīng)加強(qiáng)飲片的質(zhì)量監(jiān)測(cè)，以保證投料飲片的質(zhì)量穩(wěn)定。

[1]王玲玲，王凌，楊菲，等.RP-HPLC測(cè)定銀黃顆粒中綠原酸和黃芩苷的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，12（18）：124-126.

[2]何曉山，周寧娜，林青，等.滇黃琴總黃酮抗心律失常作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（4）：508-510.

[3]汪長(zhǎng)中，程慧娟，張雄飛，等.黃芩苷對(duì)非白念珠菌生物膜抑制作用的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（5）：639-641.

[4]薛黎明，秦雪梅，張麗增.不同產(chǎn)地黃芩藥材的黃芩苷含量測(cè)定及指紋圖譜研究[J].中成藥，2008，1（30）：10-14.

[5]許臘英，毛維倫，趙亞玲，等.酒黃芩與生黃芩不同提取工藝對(duì)黃芩苷煎出量的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2003，28（7）：699.