程弘夏，吳沁林，冉林榮，許臘英

(武漢理工大學(xué)華夏學(xué)院，湖北 武漢 430223)

2013-09-29

作者簡介：程弘夏(1970-)，女，天津人，博士，副教授，主要從事藥物制劑研究,E-mail：chenghx70@aliyun.com。

doi

：10.3969/j.issn.1672-5425.2013.12.020

紫外分光光度法測(cè)定茶堿緩釋片中茶堿的含量

程弘夏，吳沁林，冉林榮，許臘英

(武漢理工大學(xué)華夏學(xué)院，湖北 武漢 430223)

以蒸餾水為提取溶劑，檢測(cè)波長為272 nm,采用紫外分光光度法測(cè)定了茶堿緩釋片中的茶堿含量。結(jié)果表明，茶堿濃度在1.5～13.5 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9997)，平均加標(biāo)回收率為97.34%，RSD為0.70%。該法操作簡單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于茶堿緩釋片中茶堿含量的測(cè)定。

紫外分光光度法；茶堿緩釋片；茶堿；含量測(cè)定

茶堿為甲基嘌呤類藥物，具有強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、松弛支氣管平滑肌和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用，臨床主要用于治療支氣管性與心源性哮喘，也可用于心源性水腫的治療。由于茶堿治療窗窄，普通制劑血藥濃度波動(dòng)大，療效不穩(wěn)定，為此國內(nèi)外相繼研發(fā)出各種規(guī)格的茶堿緩釋制劑，如茶堿緩釋片、緩釋膠囊、緩釋小丸等。這些緩釋制劑可降低血液濃度峰谷差值，減少毒副作用。

茶堿的測(cè)定方法一般有HPLC法、GC法、TLC法、磷光分析法等[1，2]，2010版《中國藥典》采取容量分析方法測(cè)定茶堿緩釋片含量[3]。作者在此建立了茶堿緩釋片含量測(cè)定的紫外分光光度方法。

1 試藥與儀器

茶堿對(duì)照品(純度100%)，中國藥品生物制品檢定所；茶堿緩釋片(批號(hào)：20110902、20111207、20121101，規(guī)格0.1 g)，廣州某制藥公司。

TU-1900型雙光束紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；KQ600E型超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；AN7388型分析天平，上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長的確定

分別取茶堿對(duì)照品及3個(gè)批號(hào)茶堿緩釋片細(xì)粉適量，加熱水使其溶解，過濾，配制成適宜濃度，搖勻。以水為空白，在200～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果見圖1。

由圖1可以看出，茶堿在272 nm處有最大吸收，緩釋片溶液與對(duì)照品溶液的吸收曲線形態(tài)基本一致，說明輔料對(duì)茶堿光譜特征無干擾。故選擇272 nm作為茶堿緩釋片含量測(cè)定波長。

2.2 最優(yōu)提取方法的確定

2.2.1 提取溶劑的選擇

分別取不同批號(hào)的茶堿緩釋片各20片，精密稱定并計(jì)算平均片重，研細(xì)。每個(gè)批號(hào)精密稱取茶堿緩釋片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于無水茶堿0.1 g)各3份，置具塞錐形瓶中，分別加入等量蒸餾水、無水乙醇、無水氯仿，超聲20 min使充分溶解，過濾，續(xù)濾液定容于100 mL容量瓶中，搖勻。取1 mL至100 mL容量瓶中，加相應(yīng)的溶劑稀釋至刻度，在272 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果見表1。

表1不同提取溶劑對(duì)茶堿含量測(cè)定的影響

Tab.1Effectofdifferentextractionsolventsondeterminationoftheophyllinecontent

由表1可以看出，在相同的提取條件下，以蒸餾水為提取溶劑時(shí)的平均吸光度較高，提取效果較好。

2.2.2 水浴提取時(shí)間的選擇

圖1 茶堿對(duì)照品(a)和茶堿緩釋片(b～d)的紫外吸收光譜Fig.1 UV Spectra of theophylline standard(a) and theophylline sustained-release tablets(b～d)

分別取不同批號(hào)的茶堿緩釋片各20片，精密稱定并計(jì)算平均片重，研細(xì)。每個(gè)批號(hào)精密稱取茶堿緩釋片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于無水茶堿0.1 g)各5份，在70 ℃水浴中，以蒸餾水為提取溶劑分別提取10 min、20 min、30 min、45 min、60 min。充分溶解，過濾。續(xù)濾液按2.2.1方法定容后，在272 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果見表2。

表2水浴提取時(shí)間對(duì)茶堿吸光度的影響

Tab.2Effectofextractiontimeforwaterbathonabundanceoftheophylline

由表2可知，在相同的水浴溫度下，前30 min的吸光度隨提取時(shí)間的延長上升較快，30 min后吸光度升幅趨緩。

2.2.3 超聲提取時(shí)間的選擇

分別取不同批號(hào)的茶堿緩釋片各20片，精密稱定并計(jì)算平均片重，研細(xì)。每個(gè)批號(hào)精密稱取茶堿緩釋片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于無水茶堿0.1 g)各5份，以蒸餾水為提取溶劑分別超聲提取10 min、20 min、30 min、45 min、60 min。充分溶解，過濾。續(xù)濾液按2.2.1方法定容后，在272 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果見表3。

表3超聲提取時(shí)間對(duì)茶堿吸光度的影響

Tab.3Effectofextractiontimeforultrasoundonabundanceoftheophylline

由表3可知，在超聲提取中，前30 min的吸光度隨超聲時(shí)間的延長上升較快，30 min后吸光度變化不顯著。

因此，確定以蒸餾水為提取溶劑，在70 ℃水浴中超聲30 min提取茶堿緩釋片中的茶堿，用于含量測(cè)定。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取茶堿對(duì)照品7.5 mg，置具塞錐形瓶中，加熱水適量，在70 ℃水浴中超聲30 min使充分溶解，放冷。定量轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得75 μg·mL-1茶堿對(duì)照品貯備液。分別精密量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、7.0 mL、8.0 mL、9.0 mL對(duì)照品貯備液置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。以水為空白，在272 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度(y)為縱坐標(biāo)、茶堿濃度(x)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并進(jìn)行回歸分析。得到回歸方程為y=0.06614x+0.01704(R=0.9997)，茶堿在1.5～13.5 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。

2.4 精密度考察

分別配制3 μg·mL-1、9 μg·mL-1、12 μg·mL-1低、中、高三個(gè)濃度茶堿對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定5次吸光度，RSD分別為1.67%、1.02%、0.72%。表明方法的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取同一濃度對(duì)照品溶液，在0 h、2 h、6 h、8 h、10 h、24 h分別測(cè)定吸光度，RSD為0.86%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 樣品測(cè)定

分別取3批茶堿緩釋片各20片，精密稱定并計(jì)算平均片重，研細(xì)。精密稱取茶堿緩釋片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于無水茶堿0.1 g )，放入研缽中，加熱水分次研磨，并轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中。在70 ℃恒溫水浴中超聲提取30 min，充分溶解，過濾。續(xù)濾液用水定容于100 mL容量瓶中，搖勻。取1 mL至100 mL的容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，測(cè)定吸光度，利用回歸方程計(jì)算各樣品的茶堿含量，結(jié)果見表4。

2.7 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

分別精密量取0.4 mL已知含量(約1000 μg·mL-1)的供試品母液9份，加入到100 mL容量瓶中，再依次精密加入400 μg·mL-1茶堿對(duì)照品溶液1 mL、1.5 mL、2 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，測(cè)定茶堿含量。結(jié)果表明，茶堿平均加標(biāo)回收率為97.34%(n=9)，RSD為0.70%。

表4不同批號(hào)茶堿緩釋片中茶堿含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

Tab.4Thedeterminationresultsofcontentoftheophyllineindifferentbatchesoftheophyllinesustained-releasetablet

3 結(jié)論

以蒸餾水為提取溶劑，在70 ℃水浴中超聲30 min提取茶堿緩釋片中的茶堿，并采用紫外分光光度法測(cè)定其含量。結(jié)果表明，茶堿濃度在1.5～13.5 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9997)，平均加標(biāo)回收率為97.34%,RSD為0.70%。該法操作簡單、快速、經(jīng)濟(jì)、高效，且不受輔料干擾、重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于茶堿緩釋片中茶堿含量的測(cè)定。

[1] 衛(wèi)艷麗，董川，楊穎.可可堿、咖啡因、茶堿的濾紙基質(zhì)室溫磷光測(cè)定[J].分析化學(xué)，2002，30(3)：301-303.

[2] 蔡濤，祝業(yè)光.高效液相色譜法測(cè)定茶堿的緩釋片中茶堿的含量[J].中國藥事，2007，21(1)：46-47.

[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中國藥典(2010版)二部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010:514.

DeterminationofContentofTheophyllineinTheophyllineSustained-ReleaseTabletbyUltravioletSpectrophotometry

CHENG Hong-xia,WU Qin-lin,RAN Lin-rong,XU La-ying

(WuhanUniversityofTechnologyHuaxiaCollege，Wuhan430223,China)

The content of theophylline in theophylline sustained-release tablet was determined by ultraviolet spectrophotometry by using distilled water as solvent.The detection wavelength was 272 nm.The calibration curve was linear in the range of 1.5～13.5 μg·mL-1(R=0.9997) and the average recovery was 97.34%,RSD was 0.70%.The method was rapid and simple with accurate result,which could be used for the quality control and determination of content of theophylline in theophylline sustained-release tablet.

ultraviolet spectrophotometry;theophylline sustained-release tablet;theophylline;determination of content

O 657.32

A

1672-5425(2013)12-0075-03