李秀賢，王怡君，沈書博，張 迪

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧沈陽 110034;2.遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧沈陽 110023)

鴉膽子油乳注射液收載于衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)第十四冊(cè)，處方組成為精制鴉膽子油、精制豆磷脂、甘油，主要用于治療癌癥［1-2］。其中精制豆磷脂在制劑中起乳化劑作用，除含有與人體有益的飽和脂肪酸及不飽和脂肪酸外，其磷脂代謝的產(chǎn)物—溶血磷脂酰膽堿，具有較強(qiáng)的表面活性［3］，雖然其含有量較低，但由于它是磷脂代謝的重要產(chǎn)物，具有多種生物學(xué)效應(yīng)，如可誘導(dǎo)細(xì)胞性狀的改變，促進(jìn)細(xì)胞融合、引起溶血和改變細(xì)胞的滲透性等［4～7］，并與動(dòng)脈粥狀硬化及血栓形成關(guān)系密切［8～10］。因而制劑中也應(yīng)嚴(yán)格控制溶血磷脂的量，以保證臨床用藥的安全性。

1 儀器與試藥

Waters 2695型HPLC色譜儀;Waters 2420型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。鴉膽子油乳注射液(沈陽藥大藥業(yè)有限公司，批號(hào)10122111，規(guī)格為每支10 mL);溶血磷脂酰膽堿對(duì)照品(由Sigma公司提供);正庚烷(色譜純);異丙醇(色譜純);水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以二羥基丙基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以正庚烷-異丙醇(43∶57)為流動(dòng)相A，正庚烷-異丙醇-水(29.5∶59∶11.5)為流動(dòng)相B，按表1的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。進(jìn)樣量:10μL。理論板數(shù)以溶血磷脂酰膽堿計(jì)算應(yīng)不低于5000。

表1 梯度洗脫順序

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取溶血磷脂酰膽堿對(duì)照品適量，加正庚烷-異丙醇(1∶2)混合溶液溶解并稀釋，制成每1 mL含溶血磷脂酰膽堿0.2226 mg的溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取本品1 mL，置10 mL量瓶中，加正庚烷－異丙醇(1∶2)混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按工藝方法制備缺精制豆磷脂的陰性樣品，并按2.2.2項(xiàng)方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 干擾試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液，供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10uL，在2.1項(xiàng)色譜條件下分別注入液相色譜儀，繪制色譜圖，見圖1。由圖可見，在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性液在此峰處無干擾。

圖1 供試品溶液(A)、對(duì)照品溶液(B)、陰性樣品溶液(C)

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μL注入液相色譜儀，記錄圖譜。以對(duì)照品進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程:y=1.0616x+9.6276，r=0.9994，表明溶血磷脂酰膽堿進(jìn)樣量在0.44～2.23μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液，在2.1項(xiàng)色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄面積，RSD為0.88%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批樣品按正文方法，分別于配制后0、2、4、8、16 h，依法測(cè)定，RSD為1.1%，結(jié)果表明，供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取本品1 mL，共取6份，按2.2.2項(xiàng)方法平行制備6份供試品溶液，在2.1項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，計(jì)算，RSD為1.2%。表明重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法。精密量取已知準(zhǔn)確含有量的同一批樣品(沈陽藥大藥業(yè)有限公司，批號(hào):10122111)5份各0.5 mL，分別精密加入溶血磷脂酰膽堿對(duì)照品溶液(0.4452 mg/mL)3 mL，按2.2.2項(xiàng)方法操作，進(jìn)樣量為5μL，測(cè)定加標(biāo)樣品中的溶血磷脂酰膽堿的量，計(jì)算平均回收率101.6%，RSD為1.3%，見表2。

表2 樣品分析結(jié)果與回收率(n=5)

2.9 最低檢測(cè)限 取對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，經(jīng)多步稀釋后進(jìn)樣，記錄色譜圖，信噪比約為3∶1時(shí)，其最小檢測(cè)限約為0.02μg。

3 討論

3.1 由于溶血磷脂酰膽堿的紫外吸收較弱，屬于末端吸收，響應(yīng)值差異較大;而蒸發(fā)光散射檢測(cè)器為質(zhì)量型通用檢測(cè)器，對(duì)無紫外吸收或紫外吸收較弱的成分檢測(cè)效果較好。因此，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法，為制劑中溶血磷脂酰膽堿的測(cè)定提供有效方法［11-13］。

3.2 對(duì)3個(gè)生產(chǎn)企業(yè)共19批次樣品進(jìn)行溶血磷脂酰膽堿的測(cè)定，結(jié)果在0.65～4.86 mg/mL之間，表明不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品間存在較大差距，因此應(yīng)制定限度以確保產(chǎn)品質(zhì)量。見表3。

表3 溶血磷脂酰膽堿測(cè)定結(jié)果(n=2)

3.3 3家生產(chǎn)企業(yè)的樣品貯藏條件為A，不超過20℃，B，C為2～10℃。有一家企業(yè)未采用冷鏈運(yùn)輸。我們選取部分樣品分別存放在4℃和25℃環(huán)境中，3個(gè)月后測(cè)定，見表4?？梢钥闯鰧?duì)同一批樣品而言，25℃環(huán)境中樣品的溶血磷脂酰膽堿的量大大高于存放在4℃環(huán)境中樣品的量。

表4 樣品中溶血磷脂酰膽堿測(cè)定結(jié)果

對(duì)于磷脂類產(chǎn)品的制劑，由于在溶液狀態(tài)下磷脂可能會(huì)發(fā)生部分水解，在放置過程中溶血磷脂的量有可能增加［14-15］，因而制劑的生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯存條件應(yīng)按規(guī)定執(zhí)行，嚴(yán)格控制制劑中溶血磷脂的量是保證成品質(zhì)量的一個(gè)重要技術(shù)環(huán)節(jié)。

3.4 中藥注射劑是我國(guó)中醫(yī)藥文化的組成部分，是現(xiàn)代中醫(yī)藥創(chuàng)新取得的成果，已經(jīng)成為疾病治療的獨(dú)特手段，發(fā)揮著不可替代的作用。隨著臨床使用的增加，中藥注射劑的安全性也日益受到關(guān)注。因此，在質(zhì)量控制方面應(yīng)加大安全性指標(biāo)的檢測(cè)項(xiàng)目，保證中藥注射劑的臨床用藥安全。

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