王玉平，丁建伶，邢 婧，趙新紅

承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，承德 067000

婦炎康復(fù)片來(lái)源于臨床經(jīng)驗(yàn)處方，由赤芍、當(dāng)歸、黃柏等11味中藥組成，具有清熱解毒、除濕止帶、消腫散結(jié)等功效，主要用于濕熱下注、毒淤互阻所致帶下病等。作為廣泛應(yīng)用臨床多年的制劑，其良好的臨床療效得到廣泛認(rèn)可，然而對(duì)于其質(zhì)量控制僅僅局限于薄層鑒別，質(zhì)量控制仍需進(jìn)一步加強(qiáng)。溶出度作為一種重要的固體制劑的質(zhì)量控制方法，已在多國(guó)質(zhì)量控制中收載，因此，為了進(jìn)一步控制該制劑的質(zhì)量，進(jìn)而提高臨床療效，我們參考相關(guān)文獻(xiàn)［1-3］中的含量測(cè)定方法，以方中君藥赤芍的主要成分芍藥苷為指標(biāo)，HPLC法測(cè)定其體外溶出情況，以便于控制其內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters e2695高效液相色譜儀(美國(guó))、2998光電二極管陣列檢測(cè)器、Empower 2軟件;Sartorius CP225D分析天平(德國(guó)Sartorius公司);ZRS-8型智能溶出儀(天津大學(xué)無(wú)線電廠)。

1.2 試劑

芍藥苷對(duì)照品(批號(hào):201104，純度大于98%，購(gòu)于四川維克奇生物科技有限公司);婦炎康復(fù)片(自制，批號(hào)為 20110508、20110611、20110725);乙腈、甲醇、磷酸為色譜純;水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent TC-C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85);流速1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm;柱溫30℃;進(jìn)樣體積20 μL;理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密稱取芍藥苷對(duì)照品3.68 mg，置于5 mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻。再精密吸取2 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，即得147.2 μg/mL的對(duì)照品溶液。分別精密吸取該對(duì)照品溶液1、2、3、5、8、10 mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻。按照已經(jīng)確定的色譜條件，進(jìn)樣體積20 μL進(jìn)行測(cè)定。以峰面積(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為Y=4932．21X-13548．77(R2=0.9998)。說(shuō)明濃度在 14.72 ～147.2 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.2.2 專屬性考察

按照原工藝制備不含赤芍的陰性樣品，并制備溶出2 h的溶出液，分別取對(duì)照品溶液、供試品溶出液、陰性樣品溶出液進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，供試品溶出液中芍藥苷色譜峰與其他組分峰可達(dá)到基線分離，陰性樣品無(wú)干擾。

圖1 芍藥苷對(duì)照品溶液(A)、陰性樣品溶液(B)和供試品溶液(C)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC Chromatogram of paeoniflorin standard(A)，blank(B)and sample(C)

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于 0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.78%，表明供試品溶液在室溫條件下放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.2.4 精密度試驗(yàn)

取取樣時(shí)間為24 h的溶出液制備供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為1.49%，說(shuō)明本方法精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次的樣品，平行制備6份取樣時(shí)間為4 h的溶出液，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為0.85%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.2.6 加樣回收試驗(yàn)

取同一批次的樣品，平行制備6份溶出液，精密吸取3 mL置于10 mL量瓶中，再精密吸取濃度為147.2 μg/mL的芍藥苷對(duì)照品溶液置于上述溶出液中，加甲醇至刻度線，搖勻。按照已經(jīng)確定的色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算含量及回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知:平均加樣回收率及其RSD值分別為99.89%、2.76%，結(jié)果符合要求。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)Table 1 The recovery rate of paeoniflorin

5 0.298 0.294 0.579 95.58 6 0.29 0.294 0.593 104.08

2.3 婦炎康復(fù)片中芍藥苷溶出度測(cè)定

2.3.1 溶出度測(cè)定方法

精密量取已超聲30 min進(jìn)行脫氣處理的水900 mL，加入溶出杯中，開啟電源開關(guān)至(37±0.5℃)保溫30 min，調(diào)整轉(zhuǎn)速至100 rpm，稱取婦炎康復(fù)片約10 g，精密稱定，置于溶出杯中，分別在開啟轉(zhuǎn)槳后的 5、15、30、45、60、120、240、1440 min，迅速取樣10 mL，補(bǔ)液，濾過(guò)，殘?jiān)尤肴艹霰?。精密吸取濾液2 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，進(jìn)樣，測(cè)定。

2.3.2 三批樣品溶出度測(cè)定

取三批樣品，每批樣品平行稱取6份，照溶出度測(cè)定方法下的操作，進(jìn)行溶出度測(cè)定，計(jì)算每批樣品的平均溶出度，結(jié)果顯示了三品樣品測(cè)定結(jié)果基本一致，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3批婦炎康復(fù)片中芍藥苷累積溶出度(n=6，±s，%)Table 2 Dissolution of paeoniflorin in Fuyan Kangfu tablets(n=6，±s，%)

表2 3批婦炎康復(fù)片中芍藥苷累積溶出度(n=6，±s，%)Table 2 Dissolution of paeoniflorin in Fuyan Kangfu tablets(n=6，±s，%)

批 號(hào)Lot No.取樣時(shí)間/minSampling time/min 5 15 30 45 60 90 120 240 20110508 34.00±1.23 49.07±1.09 68.09±1.85 74.95±2.26 78.82±3.04 82.18±3.28 87.66±2.5694.39±3.10 20110611 29.28±1.67 46.89±1.84 64.99±2.55 74.86±1.69 81.76±2.29 86.67±2.45 90.18±1.99 93.82±2.35 20110725 28.45±0.79 45.20±1.61 70.65±1.85 77.06±3.16 80.70±0.98 87.78±1.48 91.09±1.5694.43±2.30

2.3.3 溶出參數(shù)提取

中的方法［4，5］，選擇 1stOpt軟件進(jìn)行威布爾溶出模型、零級(jí)速率模型、一級(jí)速率模型、Higuchi模型、Hixson-Crowell模型、Ritger-Peppas模型等6種溶出模型優(yōu)選，結(jié)果最優(yōu)模型為威布爾溶出模型。選擇SAS軟件實(shí)現(xiàn)溶出參數(shù)T50、Td提取，為了編寫程序的簡(jiǎn)便，參考文獻(xiàn)中的方法［6］，設(shè)定威布爾溶出模型為y=1-exp(-b*(t-a)^m)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 溶出模型選擇及溶出參數(shù)提取(n=6，±s)Table 3 Selection of dissolution models and parameters(n=6，±s)

表3 溶出模型選擇及溶出參數(shù)提取(n=6，±s)Table 3 Selection of dissolution models and parameters(n=6，±s)

批號(hào)Lot No.最優(yōu)模型The optimal dissolution model R2 T50/min Td /min 26.36±0.45 20110508 威布爾溶出模型/Weibull dissolution model 0.9900 13.00±1.16 20110611 威布爾溶出模型/Weibull dissolution model 0.9932 15.41±1.44 27.99±0.32 20110725 威布爾溶出模型/Weibull dissolution model 0.9843 14.82±1.3526.26±0.24

2.3.4 溶出參數(shù)方差分析

三批樣品的溶出參數(shù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明三批樣品的溶出參數(shù) a、b、m、T50、Td無(wú)顯著性差異(P ＜0．05)。

3 討論

在進(jìn)行溶出方法選擇時(shí)，考慮到婦炎康復(fù)片中芍藥苷的含量偏低，這不僅需要加大投藥量才可以實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，同時(shí)，也給溶出方法選擇帶來(lái)一定難度。預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，選擇轉(zhuǎn)籃法進(jìn)行取樣測(cè)定時(shí)，籃內(nèi)片劑裝得較滿，在溶出試驗(yàn)過(guò)程中僅轉(zhuǎn)籃外層的片劑才能接觸溶出介質(zhì)，從而影響片劑實(shí)際溶出。因此，綜合考慮選擇槳法為溶出方法。

在溶出度模型優(yōu)選中，百分之百溶出量的選擇是其中的關(guān)鍵一步。既有選擇“制備藥粉的溶出24 h的量”為溶出百分之百，亦存在“直接測(cè)定藥物中的含量”為溶出百分之百的計(jì)算方法［7］。本試驗(yàn)中，曾對(duì)上述兩種方法進(jìn)行比較，考慮到上述兩種方法選擇的水為提取溶劑時(shí)，測(cè)定結(jié)果不理想，最終選擇以溶出取樣時(shí)間為24h的累積溶出量作為溶出百分之百。

本試驗(yàn)所建立的婦炎康復(fù)片溶出度測(cè)定方法，存在操作簡(jiǎn)便易行，準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)，在一定程度上可以達(dá)到控制其內(nèi)在質(zhì)量的目的。然而，本試驗(yàn)主要研究的是婦炎康復(fù)片中芍藥苷的體外溶出度，對(duì)于體內(nèi)吸收機(jī)制等有待于進(jìn)一步深入研究。

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