賈 波，申書昌

(1.齊齊哈爾大學(xué) 分析測(cè)試中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006;2.齊齊哈爾市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，黑龍江 齊齊哈爾 161005)

食品安全分析檢測(cè)樣品的復(fù)雜性、分析介質(zhì)的多樣性及超低含量的待測(cè)物質(zhì)量濃度等因素，對(duì)于分析化學(xué)樣品處理技術(shù)不斷提出更高的要求［1］.被分析目標(biāo)化合物的提純、分離、凈化和濃縮等樣品前處理過程，不僅能夠去除干擾物，而且能夠提高檢測(cè)靈敏度和分析結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性.針對(duì)不同的檢測(cè)項(xiàng)目，分析工作者發(fā)展了行之有效的樣品前處理技術(shù).固相萃取(SPE)是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種樣品前處理技術(shù)［2－3］，在食品安全分析檢測(cè)樣品前處理中得到了較多的應(yīng)用［4－5］.SPE 是萃取柱內(nèi)固定相對(duì)目標(biāo)化合物的吸附、解吸附/洗脫的過程，合理使用萃取材料尤為重要.目前，商品化的固相萃取柱有十幾種，其性質(zhì)和應(yīng)用范圍有所不同.在我國，盡管有些分析方法中規(guī)定了使用SPE 樣品處理技術(shù)，但由于固相萃取柱主要來源于進(jìn)口商品，價(jià)格較貴，一次性使用，不同型號(hào)產(chǎn)品不可替換等原因，使得這項(xiàng)工作的開展落后于國外一些分析檢測(cè)行業(yè).在商品化的固相萃取填料中，硅膠基質(zhì)填料化學(xué)穩(wěn)定性差，不能在強(qiáng)酸和堿性溶液中使用，聚合物基質(zhì)填料吸附容量大，pH 適用范圍廣，但機(jī)械強(qiáng)度差.因此自行研制開發(fā)無機(jī)/高分子聚合物復(fù)合固相萃取填料具有十分重要的價(jià)值和意義［6］.

鹽酸芬氟拉明為苯丙胺類藥物，是一種抑制食欲型減肥藥，可對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)造成損傷，口服鹽酸芬氟拉明可導(dǎo)致急性腎衰.我國衛(wèi)生部禁止在保健品中添加鹽酸芬氟拉明.目前所報(bào)道的鹽酸芬氟拉明的檢測(cè)主要是高效液相色譜法、質(zhì)聯(lián)法及其聯(lián)用法［7－9］，而固相萃取用于樣品中鹽酸芬氟拉明的測(cè)定尚未見報(bào)道.

苯乙烯－甲基丙烯酸共聚物［10］具有優(yōu)良的耐熱性、耐熱水性、耐化學(xué)性和透明性，由于結(jié)構(gòu)中的苯環(huán)和羧基，使其具有良好的親脂性和陽離子交換特性.本文制備了苯乙烯/甲基丙烯酸－二氧化鈦納米復(fù)合材料［11］固相萃取柱，使用該柱對(duì)減肥餅干和減肥咖啡中鹽酸芬氟拉明進(jìn)行提取，用洗脫液洗脫后，用液相色譜檢測(cè)，使用單因素分析法對(duì)柱溫，流速，流動(dòng)相配比等色譜條件進(jìn)行優(yōu)化.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1100 高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)，MTN－20800D 氮吹儀(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)，AS20500AT 超聲清洗震蕩器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)，旋渦振蕩器、TGL－16M 離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，MODEL 固相萃取儀(天津奧特賽恩斯儀器有限公司).

鹽酸芬氟拉明對(duì)照品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%，中國藥品生物制品檢定所)，甲醇(色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)，無水乙醇(分析純，天津市興復(fù)發(fā)展有限公司)、乙腈(色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)，乙酸鈉(分析純，哈爾濱化工化學(xué)試劑廠)、鈦酸四丁酯(分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)，甲基丙烯酸(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)，苯乙烯(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠).實(shí)驗(yàn)用水均為超純水

1.2 固相萃取柱的制備及樣品分析

1.2.1 苯乙烯/甲基丙烯酸－二氧化鈦復(fù)合材料固相萃取柱的制備

在250 mL 圓底燒瓶中加入100 mL 水、25 mL無水乙醇和0.5 mL 甲基丙烯酸，用75 %的HNO3調(diào)節(jié)體系的pH值為1～2 之間，加入15 mL，5%鈦酸四丁酯乙醇溶液，55 ℃下攪拌反應(yīng)2 h，然后加入5 mL 苯乙烯，在N2保護(hù)下充分?jǐn)嚢韬?，加?0 mL 水溶液，于80℃恒溫反應(yīng)8 h，用砂芯漏斗過濾除去不溶物，之后破乳、過濾、洗滌、在室溫下真空干燥得粉末樣品.

取一支2.5mL 醫(yī)用塑料注射器管，下端安裝一層玻璃棉，稱取0.3 g 二氧化硅/聚苯乙烯材料填至塑料注射器管中，適度加壓后再加一層玻璃棉，制成固相萃取小柱.

1.2.2 色譜分析條件

色譜柱為XDB－C18(150 mm× 4.6 mm i.d.，5 μm);柱溫為室溫;檢測(cè)波長(zhǎng)為263 nm;流動(dòng)相為甲醇/乙腈+乙酸鈉水溶液(乙腈和乙酸鈉(0.02 mol/L)的配比為1∶1)，流速為1.0 mL/min;進(jìn)樣量為20 μL.

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取鹽酸芬弗拉明用甲醇配置成質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)系列，用HPLC 測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積，按峰面積對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列的質(zhì)量濃度作圖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.

1.2.4 樣品分析

用2 mL 甲醇潤(rùn)濕活化苯乙烯/甲基丙烯酸－二氧化鈦固相萃取小柱，再用5 mL 去離子水淋洗固相萃取柱.稱取1 g 樣品于錐形瓶中，用30 mL去離子水分3 次提取，提取溫度為50 ℃，超聲時(shí)間20 min，合并提取液，離心10 min，上層清液過固相萃取柱，流速為5 mL/min，真空抽干水分.用5 mL甲醇洗脫SPE 柱，收集洗脫液，用氮?dú)獯得摑饪s至1 mL，用0.45 μm 的濾膜過濾后，用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè).

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 溫度對(duì)鹽酸芬氟拉明保留時(shí)間及峰面積的影響

鹽酸芬氟拉明的質(zhì)量濃度為0.3 mg/mL，流速為1.0 mL/min，流動(dòng)相為甲醇∶乙腈+乙酸鈉溶液(75∶25).隨著柱溫的升高鹽酸芬氟拉明的保留時(shí)間有所減小，而峰面積稍有增加，因此選擇在室溫下工作，見表1.

表1 柱溫對(duì)保留時(shí)間及峰面積的影響

2.1.2 流動(dòng)相配比對(duì)鹽酸芬氟拉明保留時(shí)間及峰面積的影響

鹽酸芬氟拉明的質(zhì)量濃度為0.3 mg/mL，柱溫為室溫，流動(dòng)相流速為1.0 mL/min.隨著甲醇比例的增加鹽酸芬氟拉明的峰面積顯著增加，而保留時(shí)間有所減小，配比為85∶15 時(shí)其峰面積最大值，保留時(shí)間達(dá)到最小值，并趨于不變，見表2.

表2 流動(dòng)相配比對(duì)保留時(shí)間及峰面積的影響

2.1.3 流動(dòng)相流速對(duì)鹽酸芬氟拉明保留時(shí)間及峰面積的影響

鹽酸芬氟拉明的質(zhì)量濃度為0.3 mg/mL，柱溫為20 ℃，流動(dòng)相為甲醇∶乙腈+乙酸鈉溶液(75∶25).隨著流動(dòng)相流速的減小鹽酸芬氟拉明的峰面積顯著增加，保留時(shí)間也顯著增加.這是由于流速的減小使溶質(zhì)的縱向擴(kuò)散加大，使譜峰出現(xiàn)區(qū)域現(xiàn)象和托尾情況，導(dǎo)致積分面積增大.因此要嚴(yán)格控制流速，本實(shí)驗(yàn)確定流速為1.0 mL/min，見表3.

表3 流動(dòng)相流速對(duì)保留時(shí)間及峰面積的影響

鹽酸芬氟拉明液相色譜圖見圖1.

圖1 鹽酸芬氟拉明HPLC 圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及最低檢出限

在0.1～0.6 mg/mL 范圍內(nèi)，鹽酸芬氟拉明的色譜分面積與質(zhì)量濃度的線性回歸方程為y=2 345x－31.856，相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 6，見圖2.根據(jù)色譜圖基線噪聲值的3 倍對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度為儀器最低檢出限，最低檢出限分別為0.034 mg/mL.

圖2 鹽酸芬氟拉明標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 樣品測(cè)定結(jié)果

市售減肥膠囊鹽酸芬弗拉明質(zhì)量比為0.073 mg/g，加標(biāo)回收率為87.6%;減肥咖啡未檢出，加標(biāo)回收率為92.8%.

3 結(jié)語

使用自制苯乙烯/甲基丙烯酸－二氧化鈦復(fù)合材料固相萃取柱對(duì)鹽酸芬氟拉明吸附能力強(qiáng)，雜質(zhì)去除效果好.SPE/HPLC 測(cè)定減肥食品中鹽酸芬氟拉明方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確.

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