北京市第二醫(yī)院（100031）高美景 吳玉林

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院（100050）李虹偉

冠心病存在多種危險(xiǎn)因素，如糖尿病、高血壓等。炎癥如CRP、白細(xì)胞亦參與了動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展過(guò)程。近期研究發(fā)現(xiàn)，脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）是一慢性炎癥指標(biāo)，在動(dòng)脈粥樣硬化早期血管內(nèi)膜就出現(xiàn)Lp-PLA2的聚集。Lp-PLA2

[1]主要由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞生成分泌。Lp-PLA2可以水解磷脂甘油sn-2位上的短鏈?；缢庋“寤罨蜃邮怪セ钚?，同時(shí)也可以水解氧化的磷脂，生產(chǎn)溶血卵磷脂及非氧化的游離脂肪酸，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。Lp-PLA2[2]在血循環(huán)中約80%與低密度脂蛋白結(jié)合，僅占10%與高密度脂蛋白膽固醇結(jié)合，剩余的部分與極低密度脂蛋白結(jié)合。

糖尿病是冠心病的等危癥，血糖升高通過(guò)炎癥反應(yīng)也促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。合并糖代謝異常的冠心病患者血Lp-PLA2是否升高的更明顯目前并不明確。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 入選2007年10月～2008年2月在北京友誼醫(yī)院心血管中心住院的患者。入選標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～85歲；②所有入選患者均行冠脈造影、OGTT檢查（已確診糖尿病患者無(wú)需行OGTT檢查）；③簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡＜18歲或＞85歲；②急性ST抬高型心肌梗死、穩(wěn)定性心絞痛；③既往有瓣膜性心臟病、心肌病、惡性腫瘤、急慢性感染性疾病、嚴(yán)重肝功能不全、腎功能不全（血肌酐超過(guò)115μmol/L）、甲狀腺功能不全、銀屑病、COPD、自身免疫性疾病、陳舊心肌梗死、慢性心功能不全（左室EF＜0.4）、急性心功能不全等；④入院前服用他汀類降脂藥物；⑤拒絕簽署知情同意書(shū)。符合條件的入組患者共78例，男性45例，女性33例，平均年齡（61.6±10.9）歲。

附表 四組患者一般臨床情況比較

1.2 方法 入院后收集患者一般情況，包括性別、年齡、入院收縮壓、舒張壓、吸煙史、糖尿病病史等，入院第二天抽取靜脈血保存以測(cè)Lp-PLA2活性，擇期行冠脈造影及OGTT檢查。根據(jù)冠脈造影劑OGTT試驗(yàn)結(jié)果分組：第一組為合并糖代謝異常（AG）的NSTEACS組（NSTEACSAG）34例，第二組為不合并糖代謝異常的NSTEACS組（NSTEACS）20例，第三組為單純糖代謝異常的非冠心病組（AG）12例，第四組為不合并糖代謝異常的非冠心病組（CONTROL）12例。

1.3 Lp-PLA2檢測(cè)方法 入院后第二天取肝素抗凝的空腹靜脈血3mL，置入4℃冰箱中，1h內(nèi)以3000rpmin低溫（4℃）離心20min，取上層血漿置于-80℃冰箱中保存。標(biāo)本測(cè)定應(yīng)用美國(guó)Cayman公司提供的PAF Acetylhydrolase Assay Kit，利用酶水解底物方法測(cè)量Lp-PLA2的活性。具體步驟包括：第一步配液：①Assay Buffer1：3mL Assay Buffer1加27mL HPLC水，最終配成Assay Buffer[0.1M Tris-HCL（pH值7.2）包括1mM EGTA]，用于重組底物和稀釋樣本。②DTNB：在每個(gè)瓶?jī)?nèi)加1.0mL HPLC水。保存條件：冰上，黑暗，8h內(nèi)用完。③2-Thio PAF：用氮流將2-Thio PAF中的乙醇釋放。每一個(gè)瓶?jī)?nèi)加12mL稀釋的Assay Buffer1，最終為200μM。④Human PAF-AH（標(biāo)準(zhǔn)）。第二步分析細(xì)胞外PAF-AH活性：設(shè)空白孔（無(wú)酶的對(duì)照組）：10μL DTNB＋15μL Assay Buffer，2孔。陽(yáng)性對(duì)照組（Human PAF-AH）：10μL DTNB＋10μL PAHAH＋5μL Assay Buffer，2孔。樣本孔：10μL DTNB＋10μL 樣本＋5μL Assay Buffer，2孔。所有孔中均加200μL底物啟動(dòng)反應(yīng)。仔細(xì)搖動(dòng)96孔板30s混合。應(yīng)用酶標(biāo)儀在414nm條件下，每分鐘讀取吸光度，取10個(gè)時(shí)間點(diǎn)。利用直線回歸求取光密度變化率ΔD414/分，根據(jù)說(shuō)明書(shū)提供的公式計(jì)算[Lp-PLA2（μmol?min-1?mL-1）離心機(jī)：BFX5-320型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)；酶標(biāo)儀：

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)兩獨(dú)立樣本比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，多組間比較應(yīng)用F檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)組間比較用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者一般情況 如性別、吸煙、入院時(shí)收縮壓、舒張壓各組無(wú)明顯差異（P＞0.05），見(jiàn)附表。

2.2 入選患者血漿Lp-PLA2活性比較

2.2.1 NSTEACS患者與非冠心病患者Lp-PLA2活性比較 NSTEACS患者與非冠心病患者血漿Lp-PLA2活性分別為0.021931±0.006768827及0.01424±0.005142258（μmol?min-1?mL-1），經(jīng)兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)P＝0.000，Lp-PLA2活性在NSTEACS患者中明顯升高，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2.2 糖代謝異常與Lp-PLA2活性 ①四組患者Lp-PLA2活性分別為0.020897±0.006758、0.023688±0.006583、0.012938±0.005785、0.015542±0.005126（μmol?min-1?mL-1），組間均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.00）。②NSTEACSAG及NSTEACS患者血Lp-PLA2活性均較CONTROL組患者高（P＜0.05），說(shuō)明不論合并或不合并糖代謝異常，Lp-PLA2活性在NSTEACS患者中均升高；③AG組患者較CONTROL組血Lp-PLA2活性低，NSTEACS-AG組較NSTEACS組，血Lp-PLA2活性也低，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），糖代謝異常對(duì)Lp-PLA2活性無(wú)明顯影響；④NSTEACS-AG及NSTEACS組患者Lp-PLA2活性均較AG組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

冠心病發(fā)病率高，死亡率高，能及早發(fā)現(xiàn)并干預(yù)冠心病的危險(xiǎn)因素可預(yù)防急性心肌梗死及猝死等嚴(yán)重心血管事件的發(fā)生。目前，臨床比較重視血脂、急性炎癥標(biāo)記物等問(wèn)題，但佛明翰研究發(fā)現(xiàn)僅約50%冠心病患者血脂升高，且臨床經(jīng)強(qiáng)化抗脂治療并未完全阻止冠心病的發(fā)生。因此，人們尋找其他有關(guān)冠心病發(fā)病的相關(guān)因素。目前，越來(lái)越多研究提示冠心病是一慢性炎癥過(guò)程，而Lp-PLA2是冠心病慢性炎癥指標(biāo)，參與冠心病的發(fā)展過(guò)程。劉甲興[3]發(fā)現(xiàn)冠心病患者較非冠心病患者Lp-PLA2活性高，且其活性與冠脈病變嚴(yán)重程度相關(guān)。本研究同樣發(fā)現(xiàn)Lp-PLA2活性在NSTEACS患者中明顯升高，較非冠心病患者明顯升高，提示Lp-PLA2存在促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成而非抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。Lp-PLA2不僅是炎癥標(biāo)記物，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，而且通過(guò)服用降脂藥物[4]或其特異性抑制劑可降低Lp-PLA2活性，從而能為臨床治療冠心病提供新的治療靶點(diǎn)。

最近，在歐洲和中國(guó)分別開(kāi)展的兩項(xiàng)研究得出了相似的結(jié)果：在冠心病病人中，1/3患有糖尿病，另還有1/3出現(xiàn)糖耐量異常，即約2/3的冠心病患者同時(shí)合并糖代謝異常。K.Julier[5]等胰島素依賴組與對(duì)照組（年齡和性別相匹配的非糖尿病者），Lp-PLA2無(wú)差異，但非胰島素依賴的糖尿病患者，Lp-PLA2活性較對(duì)照組升高。曾有學(xué)者觀察初發(fā)2型糖尿病患者血清Lp-PLA2（PAF-AH）活性與白三烯B4的水平。研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者血清Lp-PLA2較對(duì)照組升高（P＜0.05）。但本研究通過(guò)對(duì)比糖代謝異常的患者與普通患者血清Lp-PLA2活性發(fā)現(xiàn)，即使合并糖代謝異常，但Lp-PLA2并無(wú)升高，結(jié)果提示糖代謝異常對(duì)Lp-PLA2并無(wú)明顯影響?？紤]糖代謝異常的患者引起血管內(nèi)皮損傷與Lp-PLA2無(wú)相關(guān)性。