高莉囡，王海波，吳 丹，淡以銳 (吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林 吉林 132013)

化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，是 Schrpeder等學(xué)者于1978年將放射免疫分析(RIA)和酶聯(lián)免疫分析(EIA)的基本原理相結(jié)合，應(yīng)用吖啶酯化學(xué)發(fā)光信號(hào)作為示蹤建立和發(fā)展起來(lái)的分析法，具有超微量分析的靈敏度和高強(qiáng)度的特異性，以其方法的靈敏性和特異性獨(dú)領(lǐng)風(fēng)騷于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的各種方法之中［1］。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用CLIA法檢測(cè)3組(甲亢組40人、甲低組40人和甲功正常組40人)病人血清游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、血清游離四碘甲狀腺原氨酸(FT4)、促甲狀腺素(TSH)、甲狀腺球蛋白(TG)、甲狀腺微粒體抗體(TMA)和甲狀腺球蛋白抗體(TGA)的含量，探討檢測(cè)結(jié)果的臨床意義。同時(shí)將3組血清在RIA法儀器上進(jìn)行再檢測(cè)，觀察兩種儀器之間的差異性。兩種儀器和兩種方法均為全自動(dòng)封閉式檢測(cè)?，F(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 資料

收集吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科住院或門(mén)診病人血清標(biāo)本，先經(jīng)CLIA法檢測(cè)甲狀腺激素和抗體(FT3、FT4、TSH、TG、TMA 和 TGA)的含量。挑選其結(jié)果正常范圍和甲亢、甲低的標(biāo)本在同日用RIA法測(cè)定同樣項(xiàng)目，整理收集檢測(cè)結(jié)果。

1.2 方法

將所選擇樣本由具有專(zhuān)業(yè)資質(zhì)的技術(shù)人員按RIA法和CLIA法分別進(jìn)行操作，以保證結(jié)果的一致性與方法操作的可靠性。儀器及試劑分別為RIA分析儀(西安核醫(yī)學(xué)儀器廠，F(xiàn)J2003PS r放射免疫分析儀，試劑由山東3V生物試劑公司提供);CLIA分析儀(意大利產(chǎn)化學(xué)發(fā)光自動(dòng)分析儀MAGLUMI 2000型，試劑為原廠配套產(chǎn)品)。

2 結(jié)果

用RIA法和CLIA法同時(shí)測(cè)定甲亢、甲低及甲功正常組各40人，共計(jì)120人份甲狀腺激素和抗體的含量，將檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用SPSS11.0軟件進(jìn)行處理，結(jié)果以平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見(jiàn)表1。

兩種方法檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析，采用線性回歸分析。以兩種方法間相關(guān)系數(shù)r2作為判斷兩種測(cè)定方法一致性的標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel表以X-Y作圖，添加趨勢(shì)線，得出線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)r2值，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析得出，用CLIA法與RIA法檢測(cè)甲亢組、甲低組和正常組甲狀腺激素及相關(guān)抗體，兩種方法其結(jié)果具有高度的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)(r)均值為0.982。

表1 兩種方法分別檢測(cè)三組病人甲狀腺激素及抗體結(jié)果的比較(s，n=40)

表1 兩種方法分別檢測(cè)三組病人甲狀腺激素及抗體結(jié)果的比較(s，n=40)

*:與CLIA組比較，P＜0.05

組 別 FT3(pg/mL)FT4(pg/mL)TSH(uIU/mL)TG(ng/mL)TMA(IU/mL)TGA(IU/mL)RIA甲亢組 12.6±2.9* 68.6±11.5* 0.04±0.01* 6.7±1.3* 13.1±1.8* 21.4±3.6*9.4±1.8 RIA甲低組 1.9±1.1* 6.5±1.9* 98.7±25.6* 7.3±1.6* 11.5±1.3* 18.5±3.0*RIA正常組 3.8±1.4* 14.9±2.8* 4.73±1.08* 4.4±1.0* 10.5±1.4* 9.9±1.7*CLI甲亢組 11.7±2.7 67.5±12.8 0.03±0.01 6.6±1.4 12.9±1.8 20.5±3.3 CLIA甲低組 1.9±1.2 5.9±2.1 96.6±26.8 7.2±1.6 10.9±1.3 18.1±3.1 CLI正常組 3.7±1.5 13.7±2.2 4.46±1.05 4.5±1.1 10.0±1.4

3 討論

CLIA法具有RIA和EIA法的超微量分析的靈敏度與高強(qiáng)度的特異性，實(shí)現(xiàn)了對(duì)人類(lèi)內(nèi)分泌激素及一切具有生物活性物質(zhì)的微量分析的崇高愿望。超微量檢測(cè)分析法源于20世紀(jì)60年代和70年代著名學(xué)者Yalow、Berson和Schrpeder等的貢獻(xiàn)。該方法具有簡(jiǎn)便、快捷、靈敏、準(zhǔn)確、可定位、定量、定性等優(yōu)點(diǎn)，開(kāi)創(chuàng)了超微量檢測(cè)技術(shù)的新紀(jì)元［2］。該方法具有最佳的檢測(cè)效果、最高的檢測(cè)精度、最快的檢測(cè)速度，是承繼放射免疫、酶聯(lián)免疫、普通化學(xué)發(fā)光技術(shù)之后的新一代標(biāo)記免疫分析技術(shù)。由于檢測(cè)的靈敏度高，適合于人體內(nèi)分泌激素、腫瘤標(biāo)志物、生殖激素等微量物質(zhì)的檢測(cè)，檢測(cè)量可達(dá)到微微克(pg)水平。由于激素的微小變化都會(huì)導(dǎo)致人體功能性或病理性改變，盡早發(fā)現(xiàn)它們的某種微妙變化，對(duì)于疾病的早期診斷、治療方案的確定或療效的評(píng)估與預(yù)后判定都具有重要的臨床意義和預(yù)測(cè)價(jià)值。

CLIA法具有比RIA和IRMA法更高的分析性能［3-4］，CLIA法所用標(biāo)記物相當(dāng)穩(wěn)定，有效期可達(dá)一年，檢測(cè)過(guò)程為全自動(dòng)化運(yùn)行。人為因素等操作誤差相對(duì)非常低。這樣即顯示了該方法的靈敏性、特異性和全自動(dòng)化分析儀的先進(jìn)性，成為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)超微量分析領(lǐng)域的領(lǐng)頭軍，具有里程碑意義［2］。

由于CLIA法具有自動(dòng)檢測(cè)運(yùn)行快、耗時(shí)短、檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，方便了急診或門(mén)診病人及時(shí)得到結(jié)果。對(duì)于一些懷疑患有甲狀腺功能異常又伴隨低鉀血癥或房顫的病人，若能快速有效的檢測(cè)甲狀腺功能與激素含量并及時(shí)發(fā)出報(bào)告，則可以為臨床醫(yī)生盡早做出鑒別診斷，為確診與避免誤診提供了可靠的依據(jù)。對(duì)曾經(jīng)患甲亢或甲低的病人，由于長(zhǎng)期用藥，而出現(xiàn)用藥過(guò)量或用藥不足時(shí)，應(yīng)用CLIA法可提供快速檢測(cè)通道，在1～1.5 h后出報(bào)告，為及時(shí)給予患者調(diào)整用藥劑量提供了極大幫助，同時(shí)也幫助醫(yī)院緩解了看病難、看病慢的呼聲，提供及時(shí)服務(wù)。

文獻(xiàn)指出，由于CLIA法的定量精細(xì)、靈敏度高、檢測(cè)范圍廣(20～300，10～1000 IU/mL)從而更有利于病情判斷和療效觀察，表1結(jié)果表明，在甲功亢進(jìn)病人中，F(xiàn)T3、FT4結(jié)果明顯升高，而TSH結(jié)果小于正常范圍時(shí)，一部分患者TMA和TGA結(jié)果升高值在10% ～20%之間;甲低病人中，F(xiàn)T3、FT4結(jié)果明顯降低，TSH結(jié)果大于正常值6～10倍或以上者占30% ～40%。甲功正常無(wú)明顯癥狀的人群中抗體陽(yáng)性率約為3.5% ～4.5%，女性高于男性，與文獻(xiàn)報(bào)道很接近［5］。一般資料認(rèn)為甲狀腺自身抗體的產(chǎn)生與甲狀腺內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)，是發(fā)生甲狀腺功能損傷的重要危險(xiǎn)因素［6］。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，抗體陽(yáng)性者中甲亢或甲低的比率顯著高于抗體陰性者。彩超檢查甲狀腺正常，而甲狀腺抗體出現(xiàn)陽(yáng)性同時(shí)伴隨TSH檢測(cè)值異常的病人，5年隨訪發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)甲功能異常的發(fā)生率顯著增加。甲狀腺激素抗體陽(yáng)性者而甲功能正常人群中，預(yù)示著有潛在的甲狀腺功能異常的病人出現(xiàn)。文獻(xiàn)指出，TGA的升高主要見(jiàn)于自身免疫性甲狀腺疾病，如橋本甲狀腺炎、Graves病等［7］。風(fēng)濕和類(lèi)風(fēng)濕性疾病也有升高現(xiàn)象。

綜合分析認(rèn)為，CLIA法檢測(cè)甲狀腺激素及其抗體，對(duì)單純性甲狀腺疾病或合并其他疾病的診斷與鑒別診斷，是一項(xiàng)快捷、精確的檢測(cè)方法，它完全避免了RIA法的廢棄物污染、試劑有效期短等缺點(diǎn)。CLIA法是當(dāng)今超微量檢測(cè)法中的較好方法。

［1］李 龍，杜明華.檢驗(yàn)核醫(yī)學(xué)［M］.南京:東南大學(xué)出版社:2009:2-3.

［2］尹伯元.放射免疫分析在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用［M］.北京:原子能出版社，2010:1-2.

［3］Iervasi A，Zucchelli G C，Turchi S，et al.Analytical and clinical performance of an automated chemiluminescent immunoassay for direct renin measurement:comparison with PRA and aldosterone assays［J］.Immuno-anal Biol Special，2005，20(4):257-262.

［4］Zhang Y X，Zhang Z J，Yang F.A sensitive immunoassay for determination of hepatitis B surface antigen and antibody in human serum using capillary electrophoresis with chemiluminescence detection［J］.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2007，857(1):100-107.

［5］李玉珠，單忠艷，吳海燕，等.甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體和甲狀腺球蛋白抗體陽(yáng)性臨界值的確定及其臨床意義［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006.29(9):780-783.

［6］Brown T R，Zhao G，Palmer K C，et al.Thyroid injury，autoantigen availability，and the initiation of autoimmune thyroiditis.Autoimmunity，1998，27(1):1-12.

［7］盧桂芝.甲狀腺結(jié)節(jié)［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，34(10):957-959.