翁志聰，朱中元，蔣艷琴，李 敏

(1.海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，海南?？?70228;2.海南省農(nóng)墾總醫(yī)院 檢驗(yàn)科，海南?？?70311)

人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一種主要通過性傳播的致癌病毒，在分類學(xué)上，它隸屬乳多空病毒科(Papovaviridae)的乳頭瘤病毒屬，常侵染人生殖道，引起人類上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasias，CIN)，最終可能導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生.根據(jù)DNA堿基序列的差異，大約可分為200多種基因分型［1］. 與人類疾病相關(guān)的主要有 HPV 6，11，16，18，31，33，35，39，42，43，44，45，51，52，56，58，66，68，70，73，83等型別，不同型別對(duì)人的致癌性不同.研究表明，對(duì)于不同地區(qū)的不同人群，其感染HPV的型別有較大的差異性.這不利于正式上市的HPV6，11，16，18四種型別疫苗的使用.因此，對(duì)本地區(qū)進(jìn)行HPV型別的篩查，確定主要的流行型別，有利于研發(fā)適合的HPV疫苗，從而促進(jìn)海南國際旅游島的健康發(fā)展.

1 材料與方法

1.1 樣本來源 抽取2010－10－18～2012－05－10送至海南省農(nóng)墾總醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)的樣本，樣本總數(shù)為1 045份，女性為宮頸脫落細(xì)胞，男性為精液，剔除二次復(fù)查數(shù)據(jù).

1.2 儀器及試劑 PCR儀為Applied Biosystems 2720 Thermal Cycler，雜交儀為Robbins Scientific Model 1000;人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒為深圳亞能公司生產(chǎn).

1.3 樣本采集及保存 以專用宮頸脫落細(xì)胞采集器采集.使用陰道張開器暴露宮頸，用棉拭子去除過多的分泌物.利用宮頸刷于宮頸口單方向旋轉(zhuǎn)數(shù)周后，放入洗脫管中，折斷刷柄，擰緊管蓋，做好樣本標(biāo)識(shí);2～8℃保存不超過7 d，－20℃保存不超過3個(gè)月.

1.4 HPV分型 根據(jù)人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒操作.首先進(jìn)行HPV DNA提取;以DNA提取物為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增;產(chǎn)物進(jìn)行Southern雜交;最后洗膜顯色判斷結(jié)果.

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)利用SPSS 16.0和SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.

2 結(jié)果

2.1 不同性別感染HPV的情況 在檢測(cè)的1 045份樣本中，男性樣本為16份，陽性率為31.25%(5/16);其余均為女性樣本，陽性率為41.89%(431/1 029).

2.2 不同年齡組比例 將所有陽性標(biāo)本檢測(cè)者的年齡分成:30歲以下，30～40歲和40歲以上3個(gè)年齡組，結(jié)果30歲以下131人，30～40歲有118人，40歲以上107人(注:80個(gè)受感染樣本的年齡不詳)，比例分別為30.05%，27.06%和24.54%.30歲以下與30～40歲年齡組比較;30歲以下與40歲以上年齡組比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.809 5，P ＞0.05;χ2=3.057 1，P ＞0.05)，受感染人群不同年齡組比例見圖1.

圖1 受感染人群不同年齡組比例

2.3 總陽性率和多重侵染情況 抽取的1 045份樣本中，有436份檢出HPV，總陽性率為41.72%(436/1045);其中有337份只檢出1種型別感染(單侵染)，65份檢出受2種型別感染(二重侵染)，34份檢出受3種或3種以上型別感染(三重或三重以上侵染)，分別占感染樣本的77.29%，14.91%和7.80%，見圖2.另外，在單侵染中，高危型所占比例為74.78%(252/337)，主要型別為 HPV16，18，33，52，56，58，83 等 .

2.4 不同HPV型別檢出情況 436份樣本一共檢測(cè)出21種不同的 HPV型別，主要的型別有 HPV16，HPV58，HPV43，HPV52 和 HPV6，分別占 22.25%，17.89%，16.74%，16.06% 和8.94%，見表 1.

圖2 單侵染、二重侵染和多重侵染的結(jié)果

表1 不同HPV型別的陽性率 n=436

3 討論

李曉陽［2］報(bào)道北京石景山地區(qū)20.8%的感染者為多重侵染(非單侵染)，高危型感染率為64.4%.CLIFFORD［3］等對(duì)全球各大洲HPV型別作了篩查分析，總感染率為83% ～89%;HPV16，HPV18為主要的感染型別，分別占45.9% ～62.6%和10% ～14%.而在亞洲，HPV58，HPV52型別的感染率緊隨其后，分別占 5.8%和4.4%.陳汶［4］在我國篩查總結(jié)報(bào)告中指出:HPV6(46.6%)和 HPV11(42.4%)是最常見的HPV型別，其次是HPV16(11.8%).廣州地區(qū)尖銳濕疣患者HPV單侵染以HPV6，HPV11和HPV16型別為主［5］. 深圳地區(qū)主要的高危型別是 HPV 16(22.4%)，HPV52(12.1%)，HPV58(11.3%)［6］. 浙江地區(qū)感染率前 5 位的型別分別為 HPV52(3.1%)，HPV16(2.5%)，HPV58(2.1%)，HPV68(1.0%)及 HPV81(0.9%)［7］.

男女都可以受到HPV的感染，本次檢測(cè)以女性占絕大部分，主要原因有:1)現(xiàn)今缺乏明顯可靠的方法檢測(cè)男性是否攜帶HPV;2)感染HPV后，在免疫力正常的情況下很少出現(xiàn)臨床癥狀;3)尖銳濕疣等HPV感染癥狀也可以完全治愈.雖然男性樣本少，但是陽性率為31.25%(5/16)，因此，尋找可靠有效的檢測(cè)男性攜帶HPV的方法有利于提前發(fā)現(xiàn)疾病，維持健康.

HPV的傳播主要是通過性行為，首次性行為的年齡和性伴侶的數(shù)量也與感染率相關(guān).從本次檢測(cè)的不同年齡組可以看出，雖然3個(gè)年齡組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是感染最多的是年齡在30歲以下性行為活躍的人群;隨著年齡的增長，感染率有下降的趨勢(shì).宮頸癌多發(fā)生在年輕時(shí)受高危型HPV重復(fù)感染的人群，隨著年齡的不斷演變，在35歲以后為宮頸癌發(fā)病高峰期.因此，要重點(diǎn)篩查30歲以下性行為活躍的人群.

高危型HPV感染是子宮頸癌變的必要條件，但不是充分條件.從宮頸癌前病變到宮頸癌是一個(gè)量變到質(zhì)變的過程，其持續(xù)時(shí)間長，是多基因、多因素綜合作用的結(jié)果，因此，要早發(fā)現(xiàn)早治療，避免重復(fù)侵染.本次檢測(cè)的所有樣本中，總陽性率為41.72%，不同型別的檢出率從高到低分別是 HPV16，HPV58，HPV43，HPV52 和 HPV6，分別占22.25%，17.89%，16.74%，16.06%和8.94%. 受感染樣本中有22.71%的受感染者感染了2種或者2種以上型別，并且在77.29%的單侵染人群中，有74.78%的人受到高危型HPV的感染.在檢測(cè)出的前5名中，高危型HPV16，HPV58和HPV52占有3個(gè)席位，高危型檢出率高，與北京石景山地區(qū)相似.從地區(qū)分布情況上看，與全國相比，?？诘貐^(qū)的HPV11檢出率相對(duì)低，HPV58，HPV43，HPV52檢出率相對(duì)較高，但是HPV58和HPV52皆為亞洲地區(qū)常感染的型別.而HPV18檢出率為4.13%(18/436)，與亞洲其他地區(qū)相比，其檢出率較低，因此，?？诘貐^(qū)HPV的分布具有一定的區(qū)域性.

目前，正式上市的疫苗主要是用于預(yù)防HPV6，11，16，18四種型別.因此，了解不同地區(qū)不同HPV型別的分布情況，有利于疫苗的研發(fā).?？诘貐^(qū)型別分布表明，上市疫苗不能預(yù)防HPV58，HPV43和HPV52的感染，不利于宮頸癌的控制和治療，為此，應(yīng)該根據(jù)型別分布情況來研發(fā)適合本地區(qū)的新型疫苗，繼續(xù)加強(qiáng)對(duì)不同地區(qū)的HPV型別分布進(jìn)行調(diào)查研究，以提高人群健康水平.

［1］EILEEN M B.Human papillomavirus and cervical cancer［J］.Clin Microb Reviews，2003，16:1 －17.

［2］李曉陽，郭學(xué)青.北京石景山地區(qū)人乳頭瘤病毒HPV感染的分子流行病學(xué)研究［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(8):866－868.

［3］CLIFFORD G M，SMITH J S，PLUMMER M，et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide:a metaanalysis［J］.Br J Cancer，2003，88(1):63 －73.

［4］陳汶.中國生殖器疣和子宮頸癌HPV感染型別流行病學(xué)研究［D］.北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2010:15－16.

［5］馮瓊，肖青，邱秀.廣州地區(qū)尖銳濕疣患者人乳頭瘤病毒檢測(cè)與基因分型［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2010，10(2):142－143.

［6］王月云，彭績，周海濱，等.深圳市婦女子宮頸人乳頭瘤病毒感染分子流行病學(xué)分析［J］.中國慢性病預(yù)防與控制，2012，20(3):293－295.

［7］葉菁.浙江地區(qū)HPV流行病學(xué)調(diào)查及宮頸癌危險(xiǎn)因素在HPV篩查中的作用［D］.杭州:浙江大學(xué)，2010:16－17.