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        貴州省煙草黑脛病菌對烯酰嗎啉的敏感性

        2013-09-28 01:33:52桑維鈞張新強潘滴滴
        植物保護 2013年1期
        關(guān)鍵詞:孢子囊嗎啉游動

        蘇 凱, 桑維鈞*, 張新強, 潘滴滴, 王 慧

        (1.貴州大學農(nóng)學院,貴州山地農(nóng)業(yè)病蟲害重點實驗室,貴陽 550000;2.甘肅省天水市秦州縣林業(yè)局,天水 741000;3.貴州省鎮(zhèn)遠縣農(nóng)業(yè)局,鎮(zhèn)遠 557700)

        煙草黑脛病是由煙草疫霉煙草變種(Phytophthoranicotianaevar.nicotianae)引起的毀滅性病害,是世界煙草生產(chǎn)中危害最為嚴重的病害。該病在我國各煙草產(chǎn)區(qū)大量發(fā)生,是僅次于煙草病毒病的病害,嚴重影響了煙草的產(chǎn)量和品質(zhì)。該病害通常在潮濕、多雨條件下發(fā)病重,潛育期短,再次侵染次數(shù)多,傳播與蔓延迅速,嚴重時煙株常成片死亡。目前,防治煙草黑脛病主要通過采用抗病品種、栽培防治、化學防治等措施,其中化學防治是最普遍且實用的方法,但是病菌極易對殺菌劑產(chǎn)生抗性。

        烯酰嗎啉是防治疫霉屬病害的高效內(nèi)吸性殺菌劑,其作用為保護、治療和抑制孢子產(chǎn)生[1],對農(nóng)作物上產(chǎn)生的霜霉病、疫霉病有很好的防治作用,其防治范圍為馬鈴薯、番茄晚疫病,黃瓜、油菜霜霉病和辣椒疫病,煙草黑脛病等由鞭毛菌亞門卵菌綱引起的病害。該藥對卵菌綱的作用特點是首先影響細胞壁分子結(jié)構(gòu)的重新排列,然后干擾病原菌細胞壁聚合體的組裝,從而干擾細胞壁的形成和促使孢子囊壁的分解,使病原菌出現(xiàn)自動死亡[2],因此分析研究對貴州省煙草黑脛病病菌烯酰嗎啉的敏感性,明確貴州省各煙草產(chǎn)區(qū)抗藥菌的分布和抗藥性水平,為煙草黑脛病的防治提供科學依據(jù)具有重要的實踐意義。

        1 材料與方法

        1.1 病原菌的分離與純化

        將貴州省境內(nèi)各煙區(qū)采集的新鮮煙草黑脛病標本用自來水沖洗干凈,晾干,剖開莖基部發(fā)病部位,取病健交界處的病組織切成2 mm×2 mm左右大小,沿培養(yǎng)皿周緣直接置于含抗菌素的V8汁選擇性培養(yǎng)基表面,每皿(直徑9 cm)6~10塊。在28℃下培養(yǎng)3~7 d,待菌落形成后,進行鏡檢,選擇菌絲無隔膜的繼續(xù)培養(yǎng),待產(chǎn)生孢子囊后,鏡檢觀察,鑒定。然后再從菌落邊緣切取2 mm×2 mm的菌絲塊轉(zhuǎn)移至盛有V8培養(yǎng)基的試管斜面上,25℃黑暗培養(yǎng)7 d后,常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

        按照鄭小波的方法[3],將產(chǎn)生有大量孢子囊的菌絲或菌絲塊挑入盛有10 mL左右滅菌自來水的培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)皿置于4~10℃冰箱中10 min左右后,取出置于適溫(20~25℃)下20 min,在顯微鏡下可以看到有大量游動孢子釋放。在冷卻凝固的0.2%V8培養(yǎng)基平板上(培養(yǎng)皿直徑9 cm)滴加游動孢子懸浮液100~200μL,約含游動孢子200~500個,均勻涂布于培養(yǎng)基平板表面。培養(yǎng)皿置于室溫下(25℃左右)、黑暗中培養(yǎng)24 h左右,使游動孢子休止萌發(fā),并在培養(yǎng)基上形成微小菌落。并在顯微鏡下觀察;然后在顯微鏡下用滅菌刀片切取帶有單個已萌發(fā)游動孢子的瓊脂塊于選擇性培養(yǎng)基平板上,在25℃黑暗條件下培養(yǎng)2~3 d后可獲得單游動孢子的無性系。

        1.2 煙草黑脛病菌菌絲生長對烯酰嗎啉的敏感性測定

        供試烯酰嗎啉由江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn),有效成分為50%水分散粒劑;先用無菌水配成濃度為10 mg/m L的母液備用。

        將黑脛病菌接種于V8培養(yǎng)基上,25℃下黑暗培養(yǎng)5 d后,用直徑5 mm的滅菌打孔器在近菌落邊緣處打孔。取適量已配好的烯酰嗎啉母液,加入融化后即將凝固的V8培養(yǎng)基中,混勻,分別配制成濃度為0、0.5、1.0、2.0、4.0μg/m L V8培養(yǎng)基平板。待培養(yǎng)基冷凝后用接種針挑取菌碟,菌面向下接于含烯酰嗎啉的培養(yǎng)基中心,每皿1塊。接種后放入恒溫箱中,每處理4皿,試驗重復3次,25℃下培養(yǎng)5 d后用十字交叉法測量菌落直徑。

        按下式計算不同濃度藥劑對黑脛病菌菌絲生長的抑制率:

        計算抑制率幾率值和濃度對數(shù)值并建立毒力回歸方程,計算烯酰嗎啉對黑脛病菌各菌株的抑制中濃度EC50及相關(guān)系數(shù)R[4]。數(shù)據(jù)統(tǒng)計用農(nóng)藥室內(nèi)生物測定數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(武漢市蔬菜科學研究所,農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所)。對42個菌株的EC50用SPSS程序進行正態(tài)分布檢驗,是否符合正態(tài)分布。根據(jù)王文橋等[5]的方法將菌株分為抗性菌株(EC50>10μg/m L)、中間型菌株(0.1μg/m L≤EC50≤10μg/m L)和敏感菌株(EC50<0.1μg/m L)。

        1.3 煙草黑脛病菌游動孢子囊形成對烯酰嗎啉的敏感性測定

        參照Matheron等[6]的方法,從生長在V8平板上的黑脛病菌落邊緣處打直徑為5 mm的菌碟4塊,然后分別置于含有0.0、0.5、1.0、2.0、4.0μg/mL烯酰嗎啉的9 cm培養(yǎng)皿中(加入藥液時要使液面剛剛沒過菌碟塊),25℃下光暗交替培養(yǎng)4 d后倒去無菌水,在菌碟上滴加少量酸性品紅,1 min之后從菌碟的一側(cè)慢慢滴加乳酸直至洗去大量品紅[7]。在顯微鏡下可以看到游動孢子囊呈現(xiàn)紅色,在菌碟上隨機選取3個視野,在顯微鏡下對游動孢子囊進行計數(shù)(包括少量未被染紅的游動孢子已出來的孢子囊),每處理3皿,重復3次,數(shù)據(jù)處理方法同菌絲生長抑制試驗,計算菌株的EC50并進行正態(tài)分布檢驗。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 煙草黑脛病菌的分離

        從貴州省興仁市屯腳鎮(zhèn)、雨樟鎮(zhèn),興義烏沙鎮(zhèn)、白碗窯,晴隆縣光照鎮(zhèn),開陽縣羊場鎮(zhèn),福泉市黎山鄉(xiāng),余慶縣松煙鎮(zhèn)、熬溪鎮(zhèn),湄潭縣抄樂鄉(xiāng)、興隆鎮(zhèn),遵義縣三岔鎮(zhèn),銅仁市,大方縣雙山鎮(zhèn),納雍縣,長順縣,安龍縣,水城縣,黔西縣林泉鎮(zhèn),畢節(jié)市等煙草黑脛病經(jīng)常發(fā)生地區(qū)采集發(fā)病樣本,經(jīng)分離、純化和鑒定后,總共得到47個煙草黑脛病菌菌株。

        2.2 煙草黑脛病菌對烯酰嗎啉的敏感性水平

        2.2.1 煙草黑脛病菌菌絲生長對烯酰嗎啉的敏感性

        采用菌絲生長速率法測定單孢分離得到的47個單孢菌株的EC50,結(jié)果(表1)發(fā)現(xiàn)大多數(shù)菌株屬于中間型菌株,煙草黑脛病菌自然種群對烯酰嗎啉沒有明顯的抗藥性。

        在黑脛病菌對藥劑的敏感性變化范圍內(nèi),將EC50等分為8個階段,統(tǒng)計出每個階段菌株的個數(shù)和頻率,然后以每個階段EC50的中值為橫坐標,頻率為縱坐標,作出頻率分布圖(圖1),圖中的峰代表病原菌群體對藥劑的敏感性分布,發(fā)現(xiàn)煙草黑脛病菌絲對烯酰嗎啉的敏感性呈單峰曲線,采用SPSS敏感性分布進行了K-S正態(tài)性檢驗,得到Z=0.784,P=0.571,表現(xiàn)連續(xù)性,則表明47個煙草黑脛病菌株對烯酰嗎啉敏感性的頻率分布符合正態(tài)分布。

        表1 煙草黑脛病菌菌絲生長對烯酰嗎啉的敏感性(貴州,2011年)Table 1 Sensitivity of mycelial growth of Phytophthora nicotianae var.nicotianae to dimethomorph(Guizhou,2011)

        圖1 煙草疫霉病菌47個菌株菌絲生長對烯酰嗎啉敏感性的頻率分布Fig.1 Frequency distribution of sensitivity of 47 P.nicotianae var.nicotianae isolates to dimethomorph

        2.2.2 不同地區(qū)煙草黑脛病菌菌株對烯酰嗎啉敏感性差異

        采用Duncan氏新復極差法檢驗了烯酰嗎啉對47個不同地區(qū)菌株EC50值的差異顯著性。結(jié)果顯示:47個菌株之間EC50值有極顯著性差異(見表2)。EC50最高為興仁屯腳的TJ1菌株,為4.232 7μg/mL,而開陽的KY2菌株EC50最低,只有0.792 6μg/mL,最高值與最低值相差5.34倍,供試47個菌株的平均EC50為2.476 8μg/m L(見表1)。表明貴州不同地區(qū)的黑脛病菌菌株對烯酰嗎啉的敏感性不同。當烯酰嗎啉的濃度為0、0.5、1.0、2.0、4.0μg/m L時,對耐藥性最強菌株TJ1的抑制率分別為9.28%、21.20%、36.72%、46.00%,而對最敏感菌株 KY2的抑制率分別為:47.40%、51.39%、53.65%、60.59%,差異顯著。

        表2 烯酰嗎啉對不同地區(qū)煙草黑脛病菌菌株EC50值的比較1)Table 2 The EC50 values of dimethomorph to different isolates of P.nicotianae var.nicotianae

        2.2.3 不同地理來源菌株對烯酰嗎啉敏感性水平的系統(tǒng)聚類分析

        烯酰嗎啉對47個供試菌株EC50值的離差平方和系統(tǒng)聚類分析結(jié)果(圖2)表明:47個菌株的EC50值可分為由低到高的4個聚類組,第1組包括11個菌株(林泉2個,烏沙2個,屯腳3個,興隆2個,遵義三岔1個);第2組包括3個菌株(開陽2個,抄樂的1個);第3組包括10個菌株(水城2個,長順1個,遵義三岔1個,大方雙山1個,屯腳2個,白碗窯1個,松煙1個,雨樟1個);第4組包括23個菌株(雨樟1個,安龍2個,大方雙山2個,福泉3個,畢節(jié)1個,白碗窯3個,松煙3個,晴隆2個,長順2個,光照2個,抄樂1個)。大部分菌株出現(xiàn)在第3、4聚類組中,只有少部分菌株單獨成一類,表明菌株對烯酰嗎啉的敏感性和其地理來源有一定的相關(guān)性,從各系列菌株對烯酰嗎啉敏感性的變化程度看,福泉、大方雙山最大,林泉、開陽、屯腳、烏沙、興隆的變化幅度最小,與Duncan新復極差法的分析結(jié)果一致[8]。

        2.2.4 煙草黑脛病菌游動孢子囊形成對烯酰嗎啉的敏感性

        烯酰嗎啉對47個煙草黑脛病菌游動孢子囊形成的EC50為0.394 5~4.625 3μg/m L(表3),平均EC50為2.040 0μg/m L。不同濃度的烯酰嗎啉對煙草黑脛病菌孢子囊形成的影響表明:當烯酰嗎啉濃度較低時,對不同菌株的產(chǎn)孢抑制率差異明顯,如當烯酰嗎啉濃度為0.5μg/m L時對菌株BWY3的抑制率為26.3%,而對菌株FQ4的抑制率則為40.4%。隨著烯酰嗎啉濃度的提高,菌株之間對烯酰嗎啉的敏感性差異縮小。當烯酰嗎啉濃度為8μg/m L時,其對煙草黑脛病菌的產(chǎn)孢抑制率已達100%,表明其可以完全抑制孢子囊的形成,隨著處理濃度的提高,其抑制率差異逐漸縮小,結(jié)果見表3。

        圖2 不同地理來源菌株對烯酰嗎啉敏感性水平的系統(tǒng)聚類分析Fig.2 Systemic cluster analyses of sensitivity level of isolates with different geographical origin to dimethomorph

        采用SPSS敏感性分布進行了K-S正態(tài)性檢驗,得Z=1.127,P=0.076,同樣表明游動孢子囊對烯酰嗎啉的敏感性呈現(xiàn)出正態(tài)分布,結(jié)果表明烯酰嗎啉對黑脛病菌的游動孢子囊有抑制作用,比對黑脛病菌菌絲的活性低或大致相等,但也出現(xiàn)了值相反的情況,其中BWY3、FQ1、KY1、QL1和全部的CL系列對游動孢子的EC50值明顯大于對菌絲的,初步判斷煙草黑脛病菌部分菌株的游動孢子已在低濃度下產(chǎn)生了耐藥性。

        表3 煙草黑脛病菌游動孢子囊形成對烯酰嗎啉的敏感性(貴州,2011年)Table 3 Sensitivity of zoosporangia formation of P.nicotianae var.nicotianae to dimethomorph(Guizhou,2011)

        圖3 煙草黑脛病菌47個菌株游動孢子囊形成對烯酰嗎啉敏感性的頻率分布Fig.3 Sensitivity frequency distribution of zoosporangia formation of 47 P.nicotianae var.nicotianae isolates to dimethomorph

        3 結(jié)論與討論

        試驗結(jié)果表明:絕大部分菌株為烯酰嗎啉一般耐藥型,表明貴州煙草黑脛病菌對烯酰嗎啉已產(chǎn)生了不同程度的耐藥性,推測有2種可能:一種是該地區(qū)煙田間存在天然的耐藥性菌株;另一種是由于煙農(nóng)單一使用烯酰嗎啉,導致病原菌產(chǎn)生適應性變異而出現(xiàn)了耐藥性群體。烯酰嗎啉作為生產(chǎn)上單一使用防治煙草黑脛病的藥劑具有一定的風險性,建議采用新型殺菌劑,同時開展其他殺菌劑的敏感性試驗,為減少病菌抗藥性的產(chǎn)生提供理論依據(jù)。

        對來自貴州省主要煙區(qū)47個菌株抗性的差異顯著性檢驗結(jié)果及菌株的抗性系統(tǒng)聚類分析結(jié)果均表明,不同地區(qū)的煙草黑脛病菌對烯酰嗎啉敏感性存在顯著差異。

        煙草黑脛病發(fā)病初期病部在高濕條件下可形成大量游動孢子囊并釋放游動孢子,所以在田間易形成發(fā)病中心。游動孢子囊和游動孢子都可成為再侵染源侵染健康煙株。試驗結(jié)果表明,烯酰嗎啉對黑脛病菌菌絲生長的抑制效果與對游動孢子囊的抑制效果基本相同或略好,當烯酰嗎啉的濃度達到8.0μg/mL時可以完全控制煙草黑脛病菌孢子囊的形成。因此,發(fā)病初期,在田間使用8.0μg/m L以上濃度的烯酰嗎啉可及時對游動孢子囊及游動孢子的萌發(fā)起抑制作用,進而有效地抑制病原菌的再侵染,并對病害的傳播和流行起到較好的控制作用。

        [1]黃青春,葉鐘音.烯酰嗎啉(DMM)的特性及其作用機制[J].農(nóng)藥科學與管理,2000,21(5):28-31.

        [2]Stein J M,Kirk W W.The generation and quantification of resistance to dimethomorph inPhytophthorainfestans[J].Plant Disease,2004,88(9):930-934.

        [3]鄭小波,陸家云.建立掘氏疫霉單游動孢子無性系方法的研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學學報,1991,14(4):135.

        [4]趙善歡.植物化學保護[M].第2版.北京:農(nóng)業(yè)出版社,1983:518-520

        [5]王文橋,馬志強,張小風,等.致病疫霉抗藥性、交配型和適合度[J].植物病理學報,2002,32(3):278-283.

        [6]Matheron M E,Porchas M.Impact of azoxystrobin,dimethom orph,fluazinam,fosetylal,and metalaxyl on growth,sporulation,and zoospore cyst germ ination of threePhytophthoraspp.[J].Plant Disease,2000,84(4):454-458.

        [7]鄭小波.疫霉菌及其研究技術(shù)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1997.

        [8]馬國勝.煙草黑脛病菌生理生態(tài)及對甲霜靈抗性監(jiān)測與遺傳研究[D].合肥:安徽農(nóng)業(yè)大學,2002:86-87.

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