崔旭光，杜立娟，徐茂偉，陳艷紅

(吉林華康藥業(yè)股份有限公司，吉林 敦化 133700)

HPLC測定活力源片中人參皂苷Rg1、Re含量

崔旭光*，杜立娟，徐茂偉，陳艷紅

(吉林華康藥業(yè)股份有限公司，吉林 敦化 133700)

目的：建立高效液相色譜法測定活力源片中人參皂苷Rg1、Re的含量。方法：采用Agilent TC C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈-水(20∶80)；流速：0.8 mL·min-1，檢測波長：203 nm。結(jié)果：人參皂苷Rg1在0.120～2.040 μg呈良好線性關(guān)系，r=0.999 6，平均回收率為97.1%，RSD=0.7%(n=6)；人參皂苷Re在0.297～5.049 μg呈良好線性關(guān)系，r=0.999 8，平均回收率為97.4%，RSD=0.3%(n=6)。結(jié)論：本方法分離效果好、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；人參皂苷Rg1；人參皂苷Re；活力源片

活力源片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》[1]，是由人參莖葉皂苷、黃芪、麥冬等5味中藥組成的復(fù)方制劑，具有益氣養(yǎng)陰、強心益腎的功效。方中人參莖葉皂苷為君藥，原方法采用高效液相色譜測定其中人參皂苷Re(C48H82O18)含量，要求每片不得少于5.0 mg。為了提高對產(chǎn)品質(zhì)量的控制，作者采用高效液相色譜法同時測定人參皂苷Re和Rg1含量。

1 儀器與試藥

LC-2010 A HT高效液相色譜儀、 LC solution色譜工作站；Sartorius BP211D 電子天平；CQX25-06型超聲波清洗器(250W，50 kHz)。

人參皂苷Rg1對照品(批號：110703-200322)、人參皂苷Re對照品(批號：110754-200421)，含量測定用，購于中國食品藥品檢定研究院。活力源片(天津和治藥業(yè)有限公司，批號：080101，080102，080103)。乙腈為色譜純；水為經(jīng)SG型超純水器制備的純化水；其他試劑均為分析醇。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent TC C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(20∶80)；流速：0.8 mL·min-1；柱溫：35 ℃；檢測波長：203 nm；進樣量5 μL。理論板數(shù)按人參皂苷Re計算應(yīng)不低于2 500。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約0.5 g，精密稱定，置容量瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理(250 W，25 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.1 mg、人參皂苷Re 0.3 mg的混合溶液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按照處方配比投入除人參莖葉總皂苷之外的其余中藥和輔料，制成陰性對照品，按供試品溶液的制備方法制備。

2.3 檢測波長的選擇

分別取人參皂苷Rg1、Re對照品的甲醇溶液，經(jīng)紫外分光光度計在190～400 nm掃描，人參皂苷Rg1與Re均在204 nm波長處有最大吸收，并參照《中國藥典》2010年版一部中收載的人參與人參葉含量測定項下方法，選擇203 nm波長處，作為測定波長。

2.4 陰性干擾試驗

在2.1色譜條件下，分別取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各5 μL注入色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。由測定結(jié)果可見，陰性對照溶液及空白溶劑溶液對測定無干擾。

1.人參皂苷Rg1 2.人參皂苷ReA.人參皂苷Rg1、Re對照品 B.供試品 C.陰性對照品圖1 活力源片及對照品HPLC圖

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱量人參皂苷Rg1對照品6.00 mg、人參皂苷Re對照品14.85 mg，分別置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得人參皂苷Rg1對照品溶液(0.120 mg·mL-1)和人參皂苷Re對照品溶液(0.297 mg·mL-1)。分別精密吸取1，5，9，13，17 μL，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對照品進樣量(μg)為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，得人參皂苷Rg1回歸方程為Y=427 053X-3 233.2，線性范圍0.120～2.040 μg，r=0.999 6；人參皂苷Re回歸方程為Y=406 812X-1 847.5，線性范圍0.297～5.049 μg，r=0.999 8。

2.6 精密度試驗

取0.103 mg·mL-1的人參皂苷Rg1對照品溶液和0.307 mg·mL-1的人參皂苷Re對照品溶液，分別重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，結(jié)果人參皂苷Rg1峰面積RSD=0.5%，人參皂苷Re峰面積RSD=0.1%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，10，12 h注入高效液相色譜儀，測定人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量，計算人參皂苷Rg1的RSD=0.6%(n=6)和人參皂苷Re的RSD=1.2%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

精密稱取同一批號的樣品6份，按2.2供試品溶液制備方法制備，按2.1色譜條件測試，測定人參皂苷Rg1峰面積的RSD=1.1%(n=6)，人參皂苷Re峰面積RSD=1.0%(n=6)，結(jié)果表明本法的重復(fù)性好。

2.9 回收率試驗

采用加樣回收測定法，精密稱取已知含量的樣品(批號：080101)約0.25 g，分別精密加入人參皂苷Rg1對照品溶液、人參皂苷Re對照品溶液各10 mL，依法測定，結(jié)果見表1，表明方法可靠，回收率符合要求。

表1 活力源片中人參皂苷Re、Rg1加樣回收率試驗

2.10 樣品含量測定

分別精密稱取3批活力源片，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取對照品溶液及供試品溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量，結(jié)果見表2。

表2 活力源片中人參皂苷Re、Rg1含量測定 mg/片

3 討論

3.1 流動相的選擇

參考有關(guān)文獻(xiàn)[2-5]，分別選擇乙腈-水(20∶80)、乙腈-0.05%磷酸溶液(20∶80)為流動相，均可用于該含量測定，乙腈-水配制起來更為方便。

3.2 供試品制備方法的選擇

實驗比較了甲醇超聲提取、甲醇回流提取兩種制備方法，結(jié)果兩種方法無顯著差異，但甲醇超聲提取更為快捷、簡便，故選擇甲醇超聲提取。

3.3 色譜柱的選擇

選擇3種品牌的色譜柱試驗，(1)Agilent TC-C18；(2)Diamonsil(R)鉆石 C18；(3)Agilent ZORBAX Extend-C18。結(jié)果表明人參皂苷Rg1與Re的結(jié)構(gòu)相似，分離比較難，但還是能適用多種品牌的色譜柱，只是當(dāng)色譜柱被較長時間使用后，色譜柱的柱效降低，使分離變得比較困難。

實驗建立的含量測定方法操作簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為控制活立源片內(nèi)在質(zhì)量的方法。

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S].第十七冊.1998：186.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：8.

[3] 劉建順，徐春波，溫艷，等.丹莪婦康顆粒中人參皂苷Rg1、Rb1含量測定[J].中國藥師，2007,(3)：262-263.

[4] 于桂蘭，楊建春，王春艷，等.阿參養(yǎng)血膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥業(yè)，2008,17(7)：29-30.

[5] 劉文啟.HPLC法測定消渴降糖片中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量[J].山東中醫(yī)雜志，2007,26(9)：637-639.

HPLCDeterminationofGinsenosideRg1andGinsenosideReinHuoliyuanTablet

CUI Xu-guang*，DU Li-juan,XU Mao-wei,CHEN Yan-hong

(JiLinHuakangPharmceuticalCo.，Ltd，Dunhua133700，China)

Objective：To establish HPLC method for determination of Ginsenoside Rg1 and Ginsenoside Re in Huoliyuan tablet.Methods：The Agilent TC-C18 column(4.6 mm×250 mm，5 μm)，acetonitrile-Water(20∶80)as the mobile phase.Flow rate 0.8 mL·min-1，the detection wavelength was 203 nm.Results：Ginsenoside Rg1on 0.120～2.040 μg showed good linear relationship，r=0.999 6，the average recovery was 97.1%，RSD=0.7(n=6)；Ginsenoside Re in 0.297～5.049 μg showed good linear relationship，r=0.999 8，the average recovery was 97.4%，RSD=0.3(n=6).Conclusion：This method is good in separation effect，accurate，and with good reproducibility，can be used for Huoliyuan tablet quality control.

HPLC；Ginsenoside Rg1；Ginsenoside Re；Huoliyuan tablet

2013-03-04)

*

崔旭光，E-mail：hkyycxg@163.com