高文學，劉斌

(山東省泰安市食品藥品檢驗中心，山東 泰安 271000)

HPLC測定前列安通膠囊中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量

高文學1*，劉斌1

(山東省泰安市食品藥品檢驗中心，山東 泰安 271000)

目的：建立高效液相色譜法測定前列安通膠囊中芍藥苷和鹽酸小檗堿含量的方法。方法：采用ZORBAX SB-C18色譜柱，流動相為乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)pH值至3.0)(16∶84)(A)-乙腈(B)采用梯度洗脫(0～10 min，A 100%；10～20 min，A 100%～90%；20～30 min，A 90%～85%；30～35 min，A 85%)；檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL·min-1。結(jié)果：芍藥苷在7.7～192 μg·mL-1線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為99.6%，RSD=1.1%；鹽酸小檗堿在7.2～180 μg·mL-1線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為99.8%，RSD=0.5%。結(jié)論：實驗結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，可用于前列安通膠囊的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；前列安通膠囊；鹽酸小檗堿；芍藥苷；含量

前列安通膠囊為黃柏、赤芍、丹參、桃仁、澤蘭、烏藥、王不留行、白芷組成的復(fù)方制劑，具有清熱利濕，活血化瘀之功效。用于尿頻，尿急，排尿不暢，小腹脹痛等濕熱瘀阻證。其中赤芍和黃柏為主藥，其有效成分分別為芍藥苷和鹽酸小檗堿。該藥質(zhì)量標準[1]只有原兒茶醛的含量測定方法，為了控制其產(chǎn)品質(zhì)量，作者采用高效液相色譜法測定前列安通膠囊中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量，實驗結(jié)果準確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260 Series高效液相色譜儀(Agilent 1200 四元泵，VWD檢測器)，Agilent Chemstation工作站；十萬分之一電子天平(Mettler Toledo XS205)。

1.2 試藥

芍藥苷對照品(批號：110736-201136)、鹽酸小檗堿對照品(批號：110713-200911),購自中國食品藥品檢定研究院；前列安通膠囊(赤峰天奇制藥有限責任公司，0.38g/粒，批號：20120103，20120302，20120902)。乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)pH值至3.0)(16∶84)(A)-乙腈(B)采用梯度洗脫(0～10 min，A 100%；10～20 min，A 100%～90%；20～30 min，A 90%～85%；30～35 min，A 85%)；檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于6 000；理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于8 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液和對照品溶液 精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為384 μg·mL-1的芍藥苷對照品貯備液；精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為361 μg·mL-1的鹽酸小檗堿對照品貯備液。再精密量取貯備液適量，加甲醇制成含芍藥苷76.8 μg·mL-1和鹽酸小檗堿72.2 μg·mL-1的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品，研細，精密稱定0.2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液100 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300 W，頻率50 KHz)30 min，放冷，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液制備 按制劑制備方法，制備不含赤芍和黃柏的陰性樣品，按2.2.2項下的制備方法制備陰性對照溶液。

2.3 空白試驗

按上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明陰性對照溶液在與芍藥苷和鹽酸小檗堿峰對照品溶液相同保留時間處無干擾峰出現(xiàn)，處方中其他藥味對測定結(jié)果無影響。HPLC圖譜見圖1。

1.芍藥苷；2.鹽酸小檗堿A.混合對照品 B.樣品 C.陰性樣品圖1 前列安通膠囊及對照品HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取芍藥苷和鹽酸小檗堿對照品儲備液各1，2，3，5，10，25 mL分別置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成不同濃度的混合對照品溶液，依法測定，記錄色譜圖，量取峰面積。以濃度(X，μg·mL-1)對峰面積(Y)進行線性回歸。芍藥苷回歸方程為：Y=15.211X-11.501，r=0.999 9，芍藥苷在7.7～192 μg·mL-1呈良好的線性關(guān)系；鹽酸小檗堿的回歸方程為：Y=49.903X-25.457，r=0.999 9，鹽酸小檗堿在7.2～180 μg·mL-1呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

分別取混合對照品溶液，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，以峰面積考察精密度，計算芍藥苷RSD=0.4%，鹽酸小檗堿RSD=0.5%。

2.6 重復(fù)性試驗

按供試品溶液制備方法項下，平行制備同一樣品(批號：20120103)6份，依上述色譜條件依法進行測定，并分別計算含量，芍藥苷RSD=0.7%，鹽酸小檗堿RSD=0.7%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取供試品(批號：20120103)，按照供試品溶液制備項下方法處理，依上述色譜條件分別在0，2，4，6，8，10，12，14 h依次進行測定，記錄峰面積，計算芍藥苷RSD=0.7%，鹽酸小檗堿RSD=0.9%。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取芍藥苷對照品23.5 mg置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為芍藥苷加樣對照品溶液；精密稱取鹽酸小檗堿對照品77.7 mg置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為鹽酸小檗堿加樣對照品溶液。精密稱取已知含量的樣品(批號：20120103)0.08 g，0.10 g，0.12 g，分別精密加入芍藥苷和鹽酸小檗堿加樣對照品溶液0.8，1.0，1.2 mL，平行2份，照2.2.2項下方法制成加樣回收供試液，依上述色譜條件依法進行測定，并分別計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗

2.9 樣品測定

取本品3批樣品及對照品，依法制備供試品溶液和對照品溶液，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用外標法分別計算樣品中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果見表2。

表2 前列安通膠囊中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量測定 mg/粒

3 討論

對芍藥苷和鹽酸小檗堿在190～360 nm的紫外吸收光譜進行考察，結(jié)果芍藥苷在230 nm波長處有最大吸收，鹽酸小檗堿在231，265，351 nm波長處有最大吸收，二者在230 nm處均有較高吸收，故選擇230 nm作為檢測波長。

參照相關(guān)文獻[2-7]，比較了乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸和0.1%十二烷基磺酸鈉混合溶液、乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖溶液3種流動相分別進行試驗考察，結(jié)果以乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)pH值至3.0)(16∶84)與乙腈為流動相，并進行梯度洗脫時，芍藥苷和鹽酸小檗堿均峰形良好，保留時間適宜，不受雜質(zhì)峰的影響。

分別以甲醇、鹽酸-甲醇(1∶100)溶液為溶劑，采取超聲提取方法處理樣品，比較發(fā)現(xiàn)芍藥苷和鹽酸小檗堿在酸性甲醇溶液中均較穩(wěn)定，提取效果好。使用本法測定的結(jié)果準確，重復(fù)性好，基線平穩(wěn)，可有效地控制前列安通膠囊的質(zhì)量。

[1] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.前列安通膠囊質(zhì)量標準[S].YBZ03292009.2009.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：286，1069.

[3] 丁仕強.HPLC測定前列安通膠囊中芍藥苷的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18(23)：61-63.

[4] 王媛，崔彥.HPLC法測定前列安通膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].淮海醫(yī)藥，2012，30(2)：163-165.

[5] 唐洪梅，廖小紅，何嘉侖.HPLC法測定腸激安制劑中芍藥苷、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿[J].中成藥，2012，34(5)：853-857.

[6] 楊燕飛.RP-HPLC同時測定坤泰膠囊中芍藥苷、黃芩苷、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿含量[J].中成藥，2010，32(6)：958-960.

[7] 劉惠軍，楊駿，謝燕.HPLC法分別測定芍連胃樂片中芍藥苷與鹽酸小檗堿含量[J].中國藥師，2008，11(7)：810-812.

DeterminationofPaeoniflorinandBerberineHydrochlorideinQianlieantongCapsulesbyHPLC

GAO Wen-xue*，LIU Bin

(TaianCenterforFoodandDrugControl，Taian271000)

Objective：To establish HPLC method for determination of paeoniflorin and berberine hydrochloride in Qianlieantong capsules.Methods：A stable HPLC method was established and the chromatography was accomplished on a ZORBAX SB-C18column，the mobile phase consisted of acetonitrile-0.05mol·L-1dipotassium hydrogen phosphate solution(adjusted pH to 3.0 with phosphoric acid)(16∶84)(A)- acetonitrile(B)in a gradient mode)0-10 min，A100%；10-20 min，A100%-90%；20-30 min，A90%～85%； 30～35min，A85%)，the detection wavelength was 230 nm and the flow rate was 1.0 mL·min-1.Results：The calibration curve of paeoniflorin was linear within a range of 7.7-192 μg·mL-1(r=0.999 9)，and the average recovery was 99.6% with a corresponding RSD of 1.1%；The calibration curve of berberine hydrochloride was linear in range 7.2-180 μg·mL-1(r=0.999 9)，and the average recovery was 99.8%，with a corresponding RSD of 0.5%.Conclusion：The method is accurate and reproducible，which can be used for the quality control of Qianlieantong capsules.

HPLC；Qianlieantong capsules；Paeoniflorin；Berberine hydrochloride；Content

2013-04-25)

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高文學，副主任藥師，Tel：(0538)8334565，E-mail：liubin8247@sina.com