謝玲，龍?jiān)懒?，鐘曉紅，張大淼

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝園林學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128)

居室藥用植物種類選擇初探△

謝玲，龍?jiān)懒?，鐘曉紅，張大淼

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝園林學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128)

目的：對(duì)幾種草本類藥用植物揮發(fā)油體外抑制金黃色葡萄球菌的活性進(jìn)行研究，初步篩選出可應(yīng)用于居室園藝的藥用植物種類。方法：以薄荷、紫蘇、黃花蒿、芫荽4種藥用植物鮮株中揮發(fā)油為試材，采用牛津杯法考察其揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步考察了最低抑菌濃度和最低殺菌濃度，并自制模擬裝置初步探討薄荷鮮株植物對(duì)空氣凈化效果及抑制金黃色葡萄球菌情況。結(jié)果：薄荷揮發(fā)油和紫蘇揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制活性較強(qiáng)，芫荽揮發(fā)油、黃花蒿揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌抑制活性較弱。結(jié)論：薄荷鮮株植物對(duì)金黃色葡萄球菌和空氣中的微生物均具有一定抑制效果，可應(yīng)用于居室園藝。

藥用植物；居室園藝；揮發(fā)油；牛津杯法；金黃色葡萄球菌；空氣凈化

居室園藝(Domestic horticulture)是在以居室建筑為主的室內(nèi)外鄰近空間范圍內(nèi)開(kāi)展的園藝植物繁育、栽培、養(yǎng)護(hù)和植物景觀營(yíng)造等活動(dòng)。居室園藝植物主要包括觀賞植物，果樹(shù)、蔬菜、茶葉和藥用植物[1]。藥用植物在居室園藝中有極大的保健價(jià)值、實(shí)用價(jià)值與觀賞價(jià)值，尤其是含有揮發(fā)性物質(zhì)的藥用植物，如薄荷MenthahaplocalyxBriq.，紫蘇Perillafrutescens(L.)Britt.等，它們主要通過(guò)地上部分釋放揮發(fā)性物質(zhì)起到抑制或殺滅空氣中的有害微生物從而改善空氣質(zhì)量或達(dá)到保健防病的作用[2]。本文旨在對(duì)幾種含揮發(fā)油的草本類藥用植物在居室園藝中的應(yīng)用進(jìn)行研究，探討其揮發(fā)油體外抑制金黃色葡萄球菌的活性，并模擬鮮株對(duì)室內(nèi)空氣的凈化作用，初步篩選出可應(yīng)用于居室園藝的藥用植物種類。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

儀器：揮發(fā)油提取器(南京金正玻璃儀器廠)，PL602-S電子精密天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)，LDZX-50FAS立式壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠)，SW-CJ-2F雙人雙面凈化工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司)，ZHWY-2102C恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司)，DHG-9246A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

材料、菌種與試劑：4種新鮮藥用植物地上部分由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院花圃提供，經(jīng)湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生科院蔣道松教授鑒定分別為唇形科(Labiatae/Lamiaceae)植物薄荷MenthahaplocalyxBriq.、唇形科(Labiatae/Lamiaceae)植物紫蘇Perillafrutescens(L.)Britt.、菊科(Compositae/Asteraceae)植物黃花蒿ArtemisiaannuaL.、傘形科(Umbelliferae/Apiaceae)植物芫荽CoriandrumsativumL.；金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus，G+)由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食科院微生物實(shí)驗(yàn)室提供；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(蛋白胨 10 g、牛肉膏 3 g、瓊脂粉 15 g、水1000 mL、 氯化鈉5 g)調(diào)節(jié)pH 7.2～7.6，121 ℃高壓滅菌20 min，備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 揮發(fā)油的提取 用揮發(fā)油測(cè)定器分別提取薄荷、紫蘇、黃花蒿、芫荽鮮品中揮發(fā)油成分。取干凈全株鮮植物切成小段，長(zhǎng)度大約1 cm，分別放入圓底燒瓶，揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油。當(dāng)流出液無(wú)明顯油珠，澄清透明時(shí)，停止蒸餾。將得到的揮發(fā)油用石油醚(30 ℃～60 ℃沸程)分多次萃取，得粗產(chǎn)品，經(jīng)氯化鈣干燥后，控制溫度蒸餾得揮發(fā)油，將揮發(fā)油用吐溫-80進(jìn)行乳化，備用。

1.2.2抑菌活性試驗(yàn) 分別取乳化后的薄荷揮發(fā)油、紫蘇揮發(fā)油、黃花蒿揮發(fā)油、芫荽揮發(fā)油，取其中的一部分配制成5%的受試液；取山梨酸鉀配制成5%的山梨酸鉀水溶液，作為陽(yáng)性對(duì)照；取氯化鈉用蒸餾水配制成0.9%的氯化鈉水溶液，作為陰性對(duì)照。上述受試液，均用濾膜孔徑為0.22 μm 的濾器過(guò)濾除菌，4 ℃冰箱保存，備用。另取一定量培養(yǎng)好的金黃色葡萄球菌加入0.9%濃度生理鹽水配制成菌懸液，備用[3]。

采用牛津杯法測(cè)定抑菌活性[4，5]。用移液槍移取100 μL菌液均勻涂布于已凝固備用的培養(yǎng)基上。每個(gè)平板上放置3個(gè)牛津杯，其中兩個(gè)牛津杯中加入200 μL同種揮發(fā)油稀釋液，另外一個(gè)加入相應(yīng)溶劑作為陰性對(duì)照。同種揮發(fā)油設(shè)置4個(gè)重復(fù)。將20個(gè)培養(yǎng)皿密封后置于37 ℃培養(yǎng)24 h。游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈，計(jì)算平均值，進(jìn)行對(duì)比研究。抑菌環(huán)直徑≥10mm者為具備抑菌活性，記為“+”。抑菌環(huán)<10 mm者為無(wú)抑菌活性，記為“-”。

1.2.3 最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)測(cè)定 采用雙倍試管稀釋法測(cè)定[6]。首先將抑菌活性較好的薄荷和紫蘇揮發(fā)油分別配制成下列濃度的受試液：50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.56 mg·m L-1，備用。另將山梨酸鉀配制成下列濃度溶液：400、200、100、50、25、12.5 mg·m L-1，作為對(duì)照。將每種揮發(fā)油編為一組，每組13支編號(hào)無(wú)菌試管，共3組。1～11為倍稀釋管，第12號(hào)管為不含藥物只含等量菌液的對(duì)照管，第13號(hào)管為不含藥物不含菌液的陰性對(duì)照管。將各管充分混勻后置于恒溫培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果，以無(wú)菌生長(zhǎng)的藥物最高稀釋管中的藥物濃度為最低抑菌濃度(MIC)。兩種提取液各重復(fù)一次。從無(wú)菌生長(zhǎng)的試管中分別移取100 μL均勻涂布于平板培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。含藥量最少且平板上無(wú)菌生長(zhǎng)的試管中藥液濃度為最低殺菌濃度(MBC)。

1.2.4 薄荷鮮株植物對(duì)空氣凈化效果模擬 將鮮株植物根莖、培養(yǎng)土及容器用密封袋包裝并封口，用自來(lái)水清洗植物地上部分及密封袋表面數(shù)遍，再用70%酒精消毒，后用無(wú)菌蒸餾水清洗并擦干水分，備用。取消毒和滅菌處理過(guò)的干凈干燥器，暴露在空氣中24 h接收空氣中的微生物，備用。取上述處理好的薄荷鮮株植物放入干燥器，同時(shí)將不含任何微生物的純培養(yǎng)基平板開(kāi)蓋置于干燥器中，用凡士林密封。同組設(shè)一對(duì)照，不放入薄荷鮮株植物，其余同上。重復(fù)試驗(yàn)3次。12 h后，取出培養(yǎng)基放入37℃恒溫恒濕箱培養(yǎng)24 h。裝置見(jiàn)圖1。統(tǒng)計(jì)各個(gè)培養(yǎng)基的可見(jiàn)細(xì)菌菌落數(shù)，計(jì)算抑制率。

圖1 模擬裝置

1.2.5 薄荷鮮株植物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制效果模擬 裝置同圖1。將培養(yǎng)好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)皿置于滅菌處理后的干燥器中，放入薄荷鮮株植物數(shù)株。同組設(shè)一對(duì)照，不放入薄荷鮮株植物，其余同上。重復(fù)試驗(yàn)3次。12 h后，取出培養(yǎng)基放入37 ℃恒溫恒濕箱培養(yǎng)24 h。計(jì)算菌落抑制率。

2 結(jié)果與分析

2.1薄荷、紫蘇、黃花蒿、芫荽等4種揮發(fā)油體外抑菌活性測(cè)定結(jié)果

抑菌活性結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，薄荷和紫蘇揮發(fā)油稀釋液對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯的抑制活性，且抑菌活性：薄荷>紫蘇。黃花蒿、芫荽兩種揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用不明顯。

表1 四種藥用植物揮發(fā)油稀釋液對(duì)金黃色葡萄球菌的體外抑菌活性(mm)

2.2薄荷和紫蘇揮發(fā)油最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)測(cè)定結(jié)果

兩種揮發(fā)油稀釋液MIC和MBC結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 薄荷和紫蘇揮發(fā)油最低抑菌濃度和最低殺菌濃度(mg·m L-1)

2.3 薄荷鮮株植物對(duì)空氣凈化效果模擬結(jié)果

由圖2可以看出，培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后，試驗(yàn)組菌落總數(shù)明顯少于對(duì)照組，對(duì)空氣中微生物的平均抑制率達(dá)到67.9%，并且?guī)缀鯚o(wú)真菌生長(zhǎng)，可以認(rèn)為薄荷鮮株植物對(duì)空氣中的微生物有較好的抑制效果。

圖2 24小時(shí)后兩組對(duì)比圖(左邊為試驗(yàn)組，右邊為對(duì)照組)

2.4薄荷鮮株植物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制效果模擬結(jié)果

結(jié)果顯示，培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后，試驗(yàn)組菌落總數(shù)少于對(duì)照組，對(duì)空氣中金黃色葡萄球菌的平均抑制率達(dá)到51.2%，可以認(rèn)為薄荷鮮株植物對(duì)空氣中的金黃色葡萄球菌有有一定的抑制效果。

3 討論

從環(huán)境保護(hù)方面考慮，薄荷鮮株植物對(duì)空氣中雜菌與金黃色葡萄球菌均有抑制作用，可以考慮將其用于居室園藝。本研究顯示，薄荷和紫蘇揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌均有抑制作用，且薄荷鮮株植物對(duì)空氣當(dāng)中的微生物和金黃色葡萄球菌均有一定的抑制作用，其對(duì)空氣當(dāng)中的微生物的生長(zhǎng)抑制效果尤其明顯，且能抑制真菌生長(zhǎng)，提示薄荷中含有抑制病原微生物的活性成分，還可以作為一種較佳的細(xì)菌及真菌抑制劑應(yīng)用。

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DomesticHorticultureMedicinalPlantsSelection

XIE Ling，LONG Yue-lin*，ZHONG Xiao-hong，ZHANG Da-miao

(Horticulture&LandscapeCollege，HunanAgriculturalUniversity，Changsha410128，China)

Objective：To study inhibition activity of several medicinal plants volatile oil againstStaphylococcusaureus，choose which can be used for domestic horticulture.Methods：Four kinds volatile oil from fresh plants ofMenthahaplocalyxBriq.，Perillafrutescens(L.)Britt.，ArtemisiaannuaL.andCoriandrumsativumL.，were used as test materials.Their antibacterial activity toStaphylococcusaureuswere detected by Oxford Cup method，MIC & MBC were investigated in further study.In addition，inhibition effect againstStaphylococcusaureusand air purification effectiveness ofMenthahaplocalyxBriq.were studied by a self-made simulation device.Results：Antibacterial activity of volatile oil fromMenthahaplocalyxBriq.andPerillafrutescens(L.)Britt.againstStaphylococcusaureusare better，and fromArtemisiaannuaL.andCoriandrumsativumL.are weak.Conclusion：MenthahaplocalyxBriq.fresh plant could inhibit growth ofStaphylococcusaureusand microorganisms in air，could be applied to domestic horticulture.

Medicinal plant；Domestic horticulture；Volatile oil；Oxford Cup method；Staphylococcusaureus；Air purification

2013-04-26)

湖南省科技廳計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目“居室園藝產(chǎn)業(yè)化關(guān)鍵技術(shù)及體系研究”(2010NK2007)

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龍?jiān)懒郑┦?，教授，博士生?dǎo)師，研究方向:園林景觀設(shè)計(jì),E-mail：27991288@qq.com