程鎖明，李國(guó)玉，王航宇，黃健，王金輝,*

(1.石河子大學(xué)藥學(xué)院 新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832000；2.沈陽(yáng)藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016)

中藥科技

白僵蠶化學(xué)成分的基礎(chǔ)研究△

程鎖明1，李國(guó)玉1，王航宇1，黃健2，王金輝1,2*

(1.石河子大學(xué)藥學(xué)院 新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832000；2.沈陽(yáng)藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016)

目的：對(duì)白僵蠶的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定。方法：采用溶劑提取、萃取、反復(fù)硅膠柱色譜(ODS、制備液相色譜法)等方法進(jìn)行分離純化，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和譜學(xué)數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從白僵蠶分離得到4個(gè)化合物，分別鑒定為3β,5α-二羥基-(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-6-酮(1)、(22E,24S)-5α,8α-環(huán)二氧-24-甲基-膽甾-6,9(11),22-三烯-3β-醇(2)、高精氨酸(3)、β-谷甾醇(4)。結(jié)論：化合物1～3為首次從該藥材中分離得到。

白僵蠶；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

白僵蠶BombyxBatryticatus，異名僵蠶、天蟲、僵蟲、白僵蟲[1]，為蠶蛾科昆蟲家蠶BombyxmoriL.4～5齡的幼蟲感染(或人工接種)白僵菌[Beauveriabassiana(Bals.)Vuillant]而致死的干燥體，多于春、秋季生產(chǎn)，將感染白僵菌病死的蠶干燥。白僵蠶味咸、辛，性平；歸肝、肺、胃經(jīng)；具有息風(fēng)止痙、祛風(fēng)止痛、化痰散結(jié)功能；用于肝風(fēng)夾痰、驚癇抽搐、小兒急驚、破傷風(fēng)、中風(fēng)口、風(fēng)熱頭痛、目赤咽痛、風(fēng)疹瘙癢、發(fā)頤痄腮[2]。白僵蠶主要分布于四川、廣西、江蘇、浙江、安徽、山東、甘肅等省，且以四川省質(zhì)量最優(yōu)[3]。

目前，關(guān)于白僵蠶藥理活性的研究，國(guó)內(nèi)外已有大量文獻(xiàn)報(bào)道，但對(duì)其化學(xué)成分的研究報(bào)道還比較少，為進(jìn)一步開發(fā)利用白僵蠶，作者對(duì)白僵蠶的化學(xué)成分進(jìn)行了分離、純化和鑒定，得到4個(gè)化合物，其中化合物1～3為首次從該藥材中分離所得，結(jié)構(gòu)式見圖1。

1 材料與儀器

X-5顯微熔點(diǎn)測(cè)試儀(北京泰克儀器有限公司)；Shimadzu UV-2401紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；IRAffinity-1 FTIR紅外光譜儀(Shimadzu)，Varian Vnmrs 600型核磁共振光譜儀(TMS作內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker公司生產(chǎn))，Waters 600高效液相色譜儀；Waters 2489紫外檢測(cè)器，Waters LCT Premier XE time-of-flying質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司)。

薄層色譜硅膠GF254和柱色譜硅膠(200～300目，青島海洋化工廠有限公司)，ODS(30～50 m，日本YMC株式會(huì)社)，甲醇(色譜純，J.T Baker生產(chǎn))；石油醚(沸程60～90 ℃)、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等試劑均為市售分析純。

白僵蠶于2010年購(gòu)于沈陽(yáng)藥材市場(chǎng),經(jīng)石河子大學(xué)藥學(xué)院譚勇教授鑒定為白僵蠶BombyxBatryticatus，標(biāo)本號(hào)為No.20101001，標(biāo)本存于石河子大學(xué)藥學(xué)院。

圖1 化合物1～3結(jié)構(gòu)

2 提取分離

白僵蠶10 kg，用95%乙醇水溶液回流提取3次，濃縮得浸膏810 g，將浸膏混懸于水中，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物376 g。該萃取物經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(100∶0～0∶100)系統(tǒng)梯度洗脫，所得流分經(jīng)TLC分析合并相同組分后，運(yùn)用反復(fù)硅膠柱色譜、開放式ODS柱色譜、RP-HPLC及重結(jié)晶等方法分離得到化合物1(14.2 mg)、2(19.5 mg)、3(20.3 mg)、4(103.4 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)顯示有2個(gè)單峰的甲基質(zhì)子信號(hào)δ0.52和0.81；4個(gè)雙峰的甲基質(zhì)子信號(hào)δ0.77,0.79,0.88,0.98；3個(gè)含氧質(zhì)子信號(hào)δ3.69；1個(gè)三元取代的烯鍵質(zhì)子信號(hào)δ5.15；1組烯鍵質(zhì)子信號(hào)δ5.15,5.23。13C-NMR(150 MHz,DMSO-d6)顯示有28個(gè)碳信號(hào)，1個(gè)酮羰基信號(hào)δ198.7；2組雙鍵碳信號(hào)δ119.4和131.6及δ135.1和163.3；23個(gè)sp3雜化的碳信號(hào)δ12.4,15.8,17.3,19.5,19.8,20.9,22.0,21.3,27.6,30.0,30.4,32.5,34.4,35.9,40.0,40.2,42.0,44.0,43.2,54.8，55.2,65.5,76.0，見表1。

波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4-5]報(bào)道基本一致，結(jié)合IR，HR-ESI-TOF-MS數(shù)據(jù)最終確定其結(jié)構(gòu)為3β,5α-二羥基-(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-6-酮[3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-diene-6-one]。

表1 化合物1和2的1H-NMR(600 MHz)和13C-NMR(150 MHz)數(shù)據(jù)

3.2 化合物2

1H-NMR(600 MHz,CDCl3)顯示有2個(gè)單峰的甲基質(zhì)子信號(hào)δ0.71,1.09；4個(gè)雙峰的甲基質(zhì)子信號(hào)δ0.81,0.82,0.89,1.00；1個(gè)含氧質(zhì)子信號(hào)δ3.99；1個(gè)三元取代的烯鍵質(zhì)子信號(hào)δ3.99；2組烯鍵質(zhì)子信號(hào)δ5.14,5.17和δ6.27,6.59。13C-NMR(150 MHz,CDCl3)顯示有29個(gè)碳信號(hào)，包括3組雙鍵碳信號(hào)δ142.4和119.6、δ135.0和132.2、δ135.4和130.5；3個(gè)含氧碳信號(hào)δ66.0,78.2,82.7；19個(gè)sp3雜化的碳信號(hào)δ12.8,17.5,19.5,19.9,20.6,20.8,25.4,28.5,30.3,32.4,32.9,35.9,37.8,39.8,41.0,42.6,43.5,48.0,55.8,見表1。

波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道基本一致，結(jié)合IR,HR-ESI-TOF-MS數(shù)據(jù)最終確定其結(jié)構(gòu)為(22E,24S)-5α,8α-環(huán)二氧-24-甲基-膽甾-6,9(11),22-三烯-3β-醇[(22E,24S)-5α,8α-epidioxy-24-methyl-cholesta-6,9(11),22-trien-3β-ol]。

3.3 化合物3

1H-NMR(600 MHz,CD3OD)顯示有1個(gè)與-NH-相連的質(zhì)子信號(hào)δ2.84 (2H,td,H-6)；1個(gè)與-NH2相連的質(zhì)子信號(hào)δ3.91(1H,dd,H-2)；13C-NMR(150 MHz,CD3OD)顯示有6個(gè)碳信號(hào)，其中有1個(gè)羰基碳信號(hào)δ176.9；1個(gè)與NH相連的雙鍵碳信號(hào)δ156.6；5個(gè)sp3雜化的碳信號(hào)δ23.6,26.0,28.7,39.9，59.8。HMBC譜顯示δ3.91 (1H,dd,H-2)與C-1,3,5遠(yuǎn)程相關(guān)，δ2.11(2H,dd,H-3)與C-2,4,5相關(guān)，δ1.72 (2H,H-4)與C-3,5相關(guān)，δ1.95 (2H,H-5)與C-2,3,4,6相關(guān)，δ2.84 (2H,td,H-6)與C-4,5,6′相關(guān)，具體數(shù)值見表2。

波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，結(jié)合UV,IR,HR-ESI-TOF-MS數(shù)據(jù)最終確定其結(jié)構(gòu)為高精氨酸(Homoarginine)。

表2 化合物3的1H-NMR(600 MHz)和13C-NMR(150 MHz)數(shù)據(jù)

3.4 化合物4

無(wú)色針狀結(jié)晶(石油醚-丙酮)，不溶于冷甲醇,可溶于三氯甲烷和熱甲醇,mp 136～137 ℃。Liebermann-Burchard反應(yīng)呈污綠色，示存在甾體母核。與已知對(duì)照品β-谷甾醇共薄層檢測(cè)，在3種溶劑系統(tǒng)下TLC分析，二者薄層色譜行為完全一致，在紫外燈(254 nm)下觀察無(wú)熒光斑點(diǎn),10%硫酸乙醇溶液105 ℃加熱顯紫紅色斑點(diǎn)，香草醛-濃硫酸顯紫紅色，鑒定其為β-谷甾醇(β-sitosterol)[9]。

4 討論

白僵蠶為中國(guó)中醫(yī)臨床常用的中藥材，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)具有抗凝、抗血栓、抗驚厥、抗癌、降糖、降脂等作用，目前多用于治療癲癇、頑固性頭痛等疾病[3],含有的化學(xué)成分比較復(fù)雜，主要有甾體、生物堿、環(huán)肽、氨基酸等，對(duì)白僵蠶化學(xué)成分的研究有助于我們發(fā)現(xiàn)其中的活性成分，為白僵蠶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立和進(jìn)一步開發(fā)打下基礎(chǔ)。

致謝：感謝石河子大學(xué)譚勇教授鑒定藥材； 感謝新疆大學(xué)分析測(cè)試中心、新疆理化所分析測(cè)試中心、新疆醫(yī)科大學(xué)分析測(cè)試中心在測(cè)試時(shí)給予的大力幫助。

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué). 中藥大辭典[M]. 第二版.上冊(cè).上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006：1020-1022.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：352.

[3] 黃曉雪. 僵蠶的生藥學(xué)及藥理活性研究[D]. 長(zhǎng)春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[4] Ishizuka T,Yaoita Y,Kikuchi M. Streol constituents from the fruit bodies ofGrifolafrondosa(Fr.) S. F. Gray[J]. Chem Pharm Bull，1997,45(11)： 1756-1760.

[5] Valisolalao J,Luu B,Ourisson G. Steroides cytotoxiques dePolyporusversicolor[J]. Tetrahedron,1983,39(17)：2779-2785.

[6] Ioannou E,Abdel-Razik AF,Zervou M,et al. 5α,8α-Epidioxysterols from the gorgonianEunicellacavoliniand the ascidianTrididemnuminarmatum： Isolation and evaluation of their antiproliferative activity [J]. Steroids,2009,74(1)：73-80.

[7] Gauvin A,Smadja J,Aknin M,et al. Isolation of bioactive 5α,8α-epidioxy sterols from the marine spongeLuffariellacf.variabilis[J]. Can J Chem， 2000,78(7)： 986-992.

[8] Assmann M,Lichte E,Van Soest RWM,et al. New bromopyrrole alkaloid from the marine spongeAgelaswiedenmayeri[J]. Org Lett,1999,1(3)： 455-457.

[9] 王琿,高慧媛,吳立軍,等. 中藥迷迭香化學(xué)成分的分離與鑒定[J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥,2011,13(1)： 23-25.

StudyonChemicalConstituentsofBombyxBatryticatus

CHENG Suo-ming1,LI Guo-yu1,WANG Hang-yu1,HUANG Jian2,WANG Jin-hui1,2*

(1.SchoolofPharmacy,ShiheziUniversity/KeyLaboratoryofPhytomedicineResources&ModernizationofTCM,ShiheziXinjiang832002,China；2.SchoolofTraditionalChineseMatericaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,ShenyangLiaoning110016,China)

Objective： To investigate the chemical constitutents ofBombyxbatryticatus.Methods： The compounds were isolated by means of solvent extraction,abstraction,chromatography on silica gel,ODS,and preparative RP-HPLC. The structures were identified by spectral analysis and physicochemical evidence.Results： Four compounds were isolated from theBombyxBatryticatusand identified as 3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-diene-6-one (1),(22E,24S)-5α,8α-epidioxy-24-methylcholesta-6,9(11),22-trien-3β-ol (2),homoarginine (3),andβ-sitosterol (4).Conclusion： Compounds1～3were isolated fromB.Batryticatusfor the first time.

Bombyxbatryticatus； Chemical constituents； Structure identification

2013-03-28)

△

國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2012BAI30B02),石河子大學(xué)科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(ZRKX2009ZD05)

*

王金輝，E-mail：tcm_shz@yahoo.cn