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        黃花鐵線蓮中香豆乙酸的抗炎活性研究△

        2013-09-26 06:40:24涂院海楊曉軍
        中國(guó)現(xiàn)代中藥 2013年1期
        關(guān)鍵詞:鐵線蓮風(fēng)濕病黃花

        涂院海,楊曉軍

        (1.延安大學(xué)附屬醫(yī)院,陜西 延安 716000;2.延安大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院,陜西 延安 716000)

        黃花鐵線蓮中香豆乙酸的抗炎活性研究△

        涂院海1*,楊曉軍2

        (1.延安大學(xué)附屬醫(yī)院,陜西 延安 716000;2.延安大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院,陜西 延安 716000)

        目的:研究延安本地植物黃花鐵線蓮化學(xué)成分香豆乙酸在風(fēng)濕病治療中的藥用價(jià)值。方法:在獲得的5種化合物中,選香豆乙酸進(jìn)行動(dòng)物急性毒性及抗炎活性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:化合物香豆乙酸無(wú)急性毒性反應(yīng),且具有良好的抗炎活性。結(jié)論:延安本地生長(zhǎng)植物黃花鐵線蓮所提取化學(xué)成分香豆乙酸具有良好的抗炎活性,對(duì)治療風(fēng)濕病關(guān)節(jié)炎有很好的藥用價(jià)值。

        黃花鐵線蓮;化學(xué)成分;香豆乙酸;抗炎活性;風(fēng)濕病

        黃花鐵線蓮Clematis intricata Bunge是毛茛科鐵線蓮屬野生草本植物,在我國(guó)北方各省普遍生長(zhǎng),別名狗豆蔓、蘿蘿蔓,商品名透骨草,以全草及葉入藥。夏秋采全草,曬干,摘葉曬干。味辛,性溫,有微毒,具有祛風(fēng)除濕,活血止痛,消腫作用。外用主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,民間常有用鮮草搗爛外敷治療關(guān)節(jié)、軟組織腫痛[1-2]。

        為了進(jìn)一步挖掘中草藥在風(fēng)濕病治療中的有效途徑,提高臨床療效,減少化學(xué)藥帶來(lái)的不良反應(yīng),最終為進(jìn)入臨床應(yīng)用研究奠定理論基礎(chǔ),作者采集位于延安地區(qū)的野生植物黃花鐵線蓮全草,通過(guò)硅膠和凝膠柱色譜分離,利用多種波譜技術(shù)鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu)[3-4],獲得5種化合物。選擇其中3種成分進(jìn)行了動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)和抗炎活性實(shí)驗(yàn),結(jié)果3種成分均未發(fā)現(xiàn)急性毒性反應(yīng),且均具有良好的抗炎消腫作用。本文僅對(duì)香豆乙酸(結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1)的動(dòng)物急性毒性、抗炎活性作單獨(dú)報(bào)道,探討其對(duì)風(fēng)濕病的藥用價(jià)值。

        圖1 香豆乙酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

        1 材料

        1.1 藥物與試劑

        復(fù)方七葉皂苷鈉凝膠(山東綠葉制藥有限公司,批號(hào):20100953,陽(yáng)性對(duì)照用),交叉菜膠(美國(guó)Sigma公司),二甲苯(北京益利精細(xì)化學(xué)有限公司)。

        香豆乙酸的制備:黃花鐵線蓮(采集自陜西省志丹縣,由延安大學(xué)生命科學(xué)院劉世鵬老師鑒定為Clematis intricata Bunge,自然曬干至恒重,粉碎。在超聲波輻射下用70%乙醇提取,提取液減壓濃縮得暗褐色浸膏。暗褐色浸膏用硅膠柱層析分離得到香豆乙酸組分。

        1.2 動(dòng)物與儀器

        1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:ICR小鼠,體重18~22g;SD大鼠,體重80~110g,由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):0003240,許可證號(hào):SCXK(陜)2007-001。

        1.2.2 儀器 1012-P電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);YLS-7A足趾容積測(cè)量?jī)x(山東醫(yī)科大學(xué));YLS-Q4耳腫打耳器(山東醫(yī)科大學(xué))。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

        取ICR小鼠2只,給藥前禁食12h,按16.67mg·mL-1最大濃度,按 0.4mL·(10g)-1的最大給藥體積(折算給藥劑量:666.8mg·kg-1),24h內(nèi)灌藥2次,給藥后觀察小鼠一般情況。2只小鼠給藥后大便正常,無(wú)死亡,活動(dòng)自如,進(jìn)食、飲水正常,也無(wú)明顯中毒反應(yīng),提示本品難以測(cè)出LD50,故選擇最大受試藥物量實(shí)驗(yàn)[5]。

        最大受試藥物量實(shí)驗(yàn):取小鼠40只,雌雄各半,體重18~22g,隨機(jī)分為正常對(duì)照組及給藥組,每組各20只小鼠(雌雄各半),給藥前禁食12h,給藥組以33.3mg·mL-1濃度的香豆乙酸乳懸液,按0.4mL·(10g)-1(折算給藥劑量:1 333.6mg·kg-1),24h內(nèi)2次灌胃給藥,給對(duì)照組同體積色拉油,連續(xù)觀察14d,詳細(xì)記錄小鼠行為活動(dòng)、狀態(tài)、飲食、大小便及毛色、分泌物等。

        結(jié)果給藥后0.5~3h,小鼠出現(xiàn)大汗、蜷縮等現(xiàn)象,隨后觀察,小鼠大便正常呈濕潤(rùn)顆粒狀,無(wú)死亡,活動(dòng)自如,進(jìn)食、飲水均正常,皮毛光潔,口、鼻、眼及肛門清潔無(wú)分泌物,連續(xù)觀察兩周,體重有增加,給藥前體重、第7d、第14d體重見(jiàn)表1,給藥組體重與對(duì)照組體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。解剖小鼠,發(fā)現(xiàn)胸腔、腹腔未見(jiàn)異常液體,腸管未見(jiàn)脹氣,心、肝、脾、肺、腎等重要臟器未見(jiàn)顏色、形態(tài)異常,沒(méi)有出血點(diǎn)或其他病理改變,胃黏膜顏色紅潤(rùn),無(wú)出血點(diǎn)或潰瘍,尸檢無(wú)異常。在此劑量下未觀察到香豆乙酸的急性毒性反應(yīng)。/g

        表1 香豆乙酸急性毒性小鼠體重(±s,n=20)

        表1 香豆乙酸急性毒性小鼠體重(±s,n=20)

        注:給藥組與對(duì)照組比較,P>0.05

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        2.2 抗炎活性實(shí)驗(yàn)

        實(shí)驗(yàn)組通過(guò)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹及二甲苯致小鼠耳腫脹,利用復(fù)方七葉皂苷鈉乳膏作對(duì)照,觀察香豆乙酸外涂致炎部位對(duì)腫脹的減輕程度。

        2.2.1 對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響 按方法[6]取SD大鼠40只,體重80~110g,雌雄各半。隨機(jī)分為4組,每組10只。分別為模型組,陽(yáng)性藥組,香豆乙酸大、小劑量組。每鼠采用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量標(biāo)記位置以下右后肢的容積(mL),作為致炎前正常值,然后分別在大鼠右后肢足跖皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.1mL/只致炎,即可涂藥:大劑量組每鼠右后肢足跖皮膚涂0.4mL(濃度16.67mg·mL-1),小劑量組每鼠右后肢足跖皮膚涂0.2mL,陽(yáng)性對(duì)照組每鼠右后肢足跖皮膚涂0.4mL。給藥后1h,采用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量標(biāo)記位置以下的右后肢的容積(mL),以后每隔1h用以上方法測(cè)右后肢足跖容積,共測(cè)量5h。計(jì)算腫脹度,腫脹度(mL)=給藥后足容積-給藥前足容積,各組與模型對(duì)照組比較,組間進(jìn)行t檢驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn),與模型組比較,陽(yáng)性藥,香豆乙酸大、小劑量組從致炎后1~5h均能明顯抑制角叉菜膠致大鼠足跖腫脹,提示香豆乙酸對(duì)化學(xué)性致炎有抑制作用。

        2.2.2 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 按文獻(xiàn)方法[7],取健康ICR小鼠40只,體重18~22g,雌雄各半,隨機(jī)分為4組,每組10只,分別為模型組,陽(yáng)性藥組(復(fù)方七葉皂苷鈉凝膠),香豆乙酸大、小劑量組。給小鼠右耳前后兩面涂二甲苯約50μL,左耳作為正常對(duì)照。即可涂藥:大劑量組每小鼠右耳前后兩面皮膚涂100μL,小劑量組每小鼠右耳前后兩面皮膚涂50μL,陽(yáng)性對(duì)照組每小鼠右耳前后兩面皮膚涂100μL。給藥后1h后,將小鼠脫頸椎處死,沿耳廓基線剪下兩耳,用9mm打孔器在左右耳同一位置打孔,電子天平上稱重,右耳重量減去左耳重量為腫脹度,計(jì)算腫脹百分率,腫脹百分率=(右耳重量-左耳重量/左耳重量)×100,組間比較,進(jìn)行t檢驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可以看出,香豆乙酸大、小劑量組均能明顯抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹,提示香豆乙酸對(duì)急性炎癥有一定的抑制作用。

        表2 KSHT-II對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(±s,n=10)/mL

        表2 KSHT-II對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(±s,n=10)/mL

        注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

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        表3 KSHT-II對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(±s,n=10)

        表3 KSHT-II對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(±s,n=10)

        注:與對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01

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        3 結(jié)果

        黃花鐵線蓮中提取的香豆乙酸通過(guò)動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn),顯示均無(wú)明顯的毒性反應(yīng),給藥組與對(duì)照組比較,P>0.05。通過(guò)大鼠耳腫實(shí)驗(yàn)和小鼠足跖腫實(shí)驗(yàn),與復(fù)方七葉皂苷鈉凝膠模型對(duì)照組對(duì)比,有良好的抗炎消腫作用。與模型對(duì)照組比較,急性毒性實(shí)驗(yàn)P>0.05;抗炎活性大鼠足跖腫實(shí)驗(yàn)P<0.05,P<0.01;小鼠耳腫實(shí)驗(yàn)P<0.01。

        4 討論

        風(fēng)濕病涉及醫(yī)學(xué)多學(xué)科領(lǐng)域,病因復(fù)雜,病程長(zhǎng),療效慢,且多數(shù)伴隨骨關(guān)節(jié)、滑膜腫脹,屬于一組疑難雜癥。臨床治療中因長(zhǎng)期口服用藥導(dǎo)致肝腎及血液系統(tǒng)和胃腸道損害,是臨床醫(yī)生難于顧全的疑難問(wèn)題[8]。作者在多年風(fēng)濕病臨床工作中,通過(guò)民間調(diào)查走訪,翻閱資料,挑選陜北延安野生植物黃花鐵線蓮為研究對(duì)象,著手開(kāi)展了對(duì)其化學(xué)成分、急性毒性和抗炎活性研究,分析黃花鐵線蓮單體化合物在風(fēng)濕病治療中的作用。

        黃花鐵線蓮屬于透骨草體系的1種,不同來(lái)源的透骨草,其療效不完全一致[9-11]。資料調(diào)查有不少學(xué)者應(yīng)用黃花鐵線蓮植物外敷或配伍煎汁儀器導(dǎo)入治療風(fēng)濕病及關(guān)節(jié)炎、腰腿痛、頸椎病等[1-2]。但是將提純的單體化學(xué)成分研究應(yīng)用于風(fēng)濕病臨床尚未見(jiàn)報(bào)道。通過(guò)對(duì)黃花鐵線蓮提取的化學(xué)成分香豆乙酸進(jìn)行動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)和抗炎活性實(shí)驗(yàn),結(jié)果證明未發(fā)現(xiàn)急性毒性反應(yīng)。通過(guò)大、小鼠耳腫和足跖腫實(shí)驗(yàn),與復(fù)方七葉皂苷鈉凝膠對(duì)比,有良好的抗炎活性。

        研究結(jié)果表明,延安本地野生黃花鐵線蓮植物中提純的單體化學(xué)成分香豆乙酸無(wú)毒性,且具有良好的抗炎活性,在風(fēng)濕病治療方面有較高的藥用價(jià)值,并消除了局部起水泡的不良反應(yīng),為進(jìn)一步實(shí)施我國(guó)黃花鐵線蓮中單體化合物體內(nèi)外用藥研究與開(kāi)發(fā)提供了有利的依據(jù),有可能成為高效、低毒、無(wú)內(nèi)臟損害的治療風(fēng)濕病的理想藥物。

        [1]全國(guó)中草藥匯編編寫(xiě)組.全國(guó)中草藥匯編[M].下冊(cè).北京:人民衛(wèi)生出版社,1976:173-175.

        [2]王文采,李良千.鐵線蓮屬—新分類系統(tǒng)[J].植物分類學(xué)報(bào),2005,43(5):431.

        [3]石鉞,王慧麗.黃花鐵線蓮化學(xué)成分研究[J].中草藥雜志,1997,28(6):329-330.

        [4]宋志宏,趙玉英,段京莉.黃花鐵線蓮化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志,1995,20(10):613-614.

        [5]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則[M],2004.

        [6]陳奇.中藥藥理研究方法[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:353-354.

        [7]李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1991:300.

        [8]蔣世銀,葉桂存.透骨草品種鑒定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2005,16(10):1014-1015.

        [9]王璇,蔡少青,陳虎彪,等.鐵線蓮屬透骨草的鑒別研究[J].中國(guó)中藥雜志,1998,23(4):198-254.

        [10]金延明,李勝華,樓之岑.中藥透骨草的形態(tài)組織學(xué)研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),1982,(12):928-941.

        [11]楊少輝,喬志芳,侯玉義.威靈仙及其制劑在骨傷科中的應(yīng)用及研究進(jìn)展[J].中醫(yī)正骨雜志,2008,20(12):59-60.

        《自然保護(hù)區(qū)展望:以歷史使命、生存戰(zhàn)略為視覺(jué)》簡(jiǎn)介

        陶思明的《自然保護(hù)區(qū)展望:以歷史使命、生存戰(zhàn)略為視覺(jué)》一書(shū)由科學(xué)出版社出版發(fā)行。作者以自己從事中藥材生產(chǎn)管理的十年親歷體驗(yàn),在“人的生存保障”、“康體健身”等多個(gè)章節(jié)涉及到對(duì)中藥材的論述,認(rèn)為追根溯源,振興中醫(yī)藥事業(yè)的基本問(wèn)題之一就是要保護(hù)好中藥材的天然來(lái)源——?jiǎng)游?、植物、微生物,發(fā)展生產(chǎn),保障供給,通過(guò)自然保護(hù)區(qū)加強(qiáng)保護(hù),首先保證種源不滅絕,資源量也會(huì)隨之增加,不只是后代人,現(xiàn)在的人就可以大受其益。

        作者闡述了自然保護(hù)區(qū)的歷史使命和生存戰(zhàn)略兩大基本問(wèn)題,試圖建立自然保護(hù)區(qū)與經(jīng)濟(jì)、社會(huì)、文化、教育、科學(xué)以及人們?nèi)粘Ia(chǎn)、生活等廣泛領(lǐng)域的密切聯(lián)系,認(rèn)為大力增強(qiáng)社會(huì)各界和廣大公眾對(duì)保護(hù)區(qū)多種功能的更全面了解,積極發(fā)展公民參與決策,永存人民心中的自然保護(hù)區(qū),才能永遠(yuǎn)立于不敗之地;揭示了自然保護(hù)區(qū)以“自然為本”的本質(zhì)和“以人為本”社會(huì)中“人”在捍衛(wèi)自然生態(tài)利益上的局限性,認(rèn)為每個(gè)保護(hù)區(qū)的每一天都受到經(jīng)濟(jì)利益的覬覦和挑戰(zhàn),必須始終堅(jiān)持生態(tài)優(yōu)先的思想和決策方向,始終追求有利于落實(shí)保護(hù)的管理制度和措施,以實(shí)現(xiàn)國(guó)家保護(hù)目標(biāo)為導(dǎo)向,真正管住有明顯危害的開(kāi)發(fā)建設(shè)活動(dòng),真正避免人主動(dòng)施加的不可控威脅,解放自然力,從而展現(xiàn)自然保護(hù)區(qū)事業(yè)樂(lè)觀的未來(lái)。

        該書(shū)可供各級(jí)政府經(jīng)濟(jì)發(fā)展、自然保護(hù)、公共服務(wù)、財(cái)政支持等部門,國(guó)土規(guī)劃、產(chǎn)業(yè)布局、區(qū)域發(fā)展、資源環(huán)境等研究單位,以及涉及自然保護(hù)區(qū)政策法規(guī)制定、開(kāi)發(fā)建設(shè)管理、社區(qū)工作、公眾傳媒、環(huán)保志愿者和大專院校相關(guān)專業(yè)師生等閱讀和參考。

        Study on Anti-inflammatory Activity of Coumadin Acetic Acid in Clematis intricata

        TU Yuan-hai1,YANG Xiao-jun2
        (1.Yanan University Affiliated Hospital,Yanan 716000,China;2.Yanan University Chemistry and Chemical Engineering Institute,Yanan 716000,China)

        Objective:To study coumadin acetic acid in Clematis intricata on the treatment of rheumatism medicinal value.M ethods:Choose coumadin acetic acid from the 5 kinds of compound to observe effects on animal acute toxicity and anti-inflammatory activity experiment.Results:Compound coumaric acid had no acute toxicity reaction,and had good anti-inflammatory activity.Conclusion:Coumadin acetic acid has good anti-inflammatory in the treatment of rheumatism arthritis,which had very good medicinal value.

        Clematis intricata;Coumadin acetic acid;Anti-inflammatory;Activity rheumatism

        2011-12-12)

        延安市科技局資助科研項(xiàng)目(2008年)

        *[通訊作者]涂院海,E-mail:qifengqi@163.com

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