王望寶，劉占斌，包喜軍，劉文春，葉俊華

（1．江西農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，江西 南昌330045；2．公安部南昌警犬基地，江西 南昌330100）

蜱（Ticks）是依賴吸取動物血液為生的節(jié)肢動物，目前被認為除蚊子之外最為重要的人及動物疾病傳播媒介，此外，蜱也是動物病原的攜帶和傳播者［1］。通過蜱叮咬吸血，能夠使人及動物感染多種病原，包括細菌、蠕蟲、原蟲、病毒等［2］，引起人和動物萊姆病、斑點熱、Q熱、森林腦炎、出血熱、巴貝斯蟲病和邊蟲病等一系列疾?。?］。此外，蜱寄生于動物皮膚，能吸食大量的血液，刺激叮咬部位發(fā)炎、過敏，有時候宿主還會因為神經(jīng)毒素而呈現(xiàn)運動功能麻痹性癱瘓［3－5］。蜱科分為3個科：軟蜱科（Argasidae）、硬蜱科（Ixodidae）、納蜱科（Nuttalliellidae），其中在中國分布有軟蜱科和硬蜱科［6］。其中最常見、危害最大的為硬蜱科，其次為軟蜱科。不同硬蜱種有著不同的生物學特性和生態(tài)學特性，此外，不同的蜱媒疾病的傳播需要不同的蜱種［7］。因此了解不同地區(qū)警犬蜱種分布和蜱攜病原對保證警犬健康極為重要。

近年來，有關(guān)警犬感染硬蜱的情況有些報道［8－10］，但是調(diào)查都是集中在某些地區(qū)，調(diào)查的區(qū)域比較狹窄；對蜱攜帶巴貝斯蟲的研究也比較少。為更全面了解警犬感染蜱和蜱攜帶巴貝斯蟲的情況，筆者對2007年～2011年間全國20個省、4個自治區(qū)、2個直轄市的32個警犬技術(shù)工作單位的警犬進行了流行病學初步調(diào)查，并將調(diào)查材料進行了整理。此外，為有效地防治蜱病及蜱媒疾病提供參考依據(jù)，采集了21個單位的犬蜱進行了蜱種鑒定；對所采集的20個單位的犬蜱運用巢式PCR方法檢測巴貝斯蟲。

1 材料與方法

1．1 調(diào)查范圍 全國20個省、4個自治區(qū)、2個直轄市的32個警犬技術(shù)工作單位的全部警犬。

1．2 調(diào)查方法 以問卷調(diào)查方式及實地調(diào)查方式對32個警犬技術(shù)工作單位感染蜱情況進行初步調(diào)查。

1．3 調(diào)查內(nèi)容 調(diào)查的32個單位中，以各單位為獨立調(diào)查對象。對各單位所在地理位置，近5年來警犬感染蜱存續(xù)的月份，每年感染最嚴重月份，以及每年感染最嚴重月份的感染率和帶蜱指數(shù)進行流行病學初步調(diào)查。其中，以警犬體表發(fā)現(xiàn)蜱為感染陽性；感染率＝各單位感染蜱警犬總數(shù)／各單位警犬總數(shù)，帶蜱指數(shù)＝各單位警犬感染蜱總數(shù)／各單位感染蜱警犬總數(shù)；每月感染嚴重情況以每月感染率和帶蜱指數(shù)為評定標準。調(diào)查問卷中，感染率分為0%、0%～50%、50%～100%3個范圍，分別用A、B、C表示；帶蜱指數(shù)分為0、0～30、30～100、100以上，分別用a、b、c、d表示。

1．4 蜱種采集、保存和鑒定 2011年3～9月間選取了有蜱感染的21個警犬單位，每個單位隨機挑選8頭警犬及相應(yīng)的犬舍，每頭警犬或相應(yīng)犬舍采集蜱數(shù)不少于20只，各單位采集1次，采集到的蜱放于75%酒精中，帶回實驗室進行蜱種鑒定。采集到的蜱在顯微鏡下，參照陳澤等［6］、鄧國藩等［7］蜱屬、種檢索表從形態(tài)學上進行鑒定。

1．5 巴貝斯蟲檢測 2011年3～9月間選取12個省份有蜱感染的20個警犬單位，各單位采集蜱蟲1次，每個單位采集飽血雌蜱30只。采集的飽血雌蜱，運用試劑盒提取DNA，針對巴貝斯蟲屬18SrDNA，參照文獻［11］合成引物，首輪引物：Bab5（5′－AATTACCCAATCCTGACACAGG－3′）和 Bab8（5′－TTTCGCAGTAGTTCGTCTTTAAACA －3′），次 輪 引 物：Bab6（5′－GACACAGGGAGGTAGTGACAAGA －3′）和 Bab7（5′－CCCAACTGCTCCTATTAACCATTAC －3′）。運用巢式PCR擴增，PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，測序，并將測序結(jié)果在NCBI上進行序列比對，確定巴貝斯蟲種。

2 結(jié)果

2．1 感染蜱單位概況 于2007年～2011年間，調(diào)查的32個警犬單位中只有3個單位的警犬沒有蜱感染史，所在地理位置為：云南省昆明市盤龍區(qū)、遼寧省沈陽市黃河北大街白山路和黑龍江省哈爾濱市香坊區(qū)珠江路。其他29個單位的警犬都有不同程度感染。其所在地理位置為：海南省?？谑心隙山?、三亞市迎賓路，廣東省佛山市南海區(qū)、深圳市羅湖區(qū)，廣西壯族自治區(qū)南寧市興寧區(qū)、福建省福州市晉安區(qū)、廈門市后溪新村、泉州市豐澤區(qū)，浙江省杭州市西湖區(qū)，江西省南昌市新建縣、贛州市章貢區(qū)，湖南省長沙市經(jīng)濟開發(fā)區(qū)，貴州省貴陽市云巖區(qū)，安徽省合肥市肥西路，湖北省武穴市棲賢路，重慶市江北區(qū)，四川省成都市金牛區(qū)，江蘇省南京市安德門，河南省鄭州市金水大道，陜西省西安市學士路，寧夏自治區(qū)銀川市北京東路，山西省太原市五一路，河北省石家莊市鹿泉市寺家莊鎮(zhèn)，山東省濟南市區(qū)馬鞍山路，北京市東城區(qū)，吉林省長春市朝陽區(qū)，內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市新城區(qū)、黑龍江省伊春市烏馬河區(qū)和新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市爐院街。2007年～2011年間29個單位警犬感染蜱的單位數(shù)為8～11個不等，具體情況見表1。

表1 32個警犬技術(shù)工作單位2007年～2011年蜱感染情況調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計

2．2 感染蜱存續(xù)的月份及每月感染單位數(shù) 2007年～2011年間，在有感染史的29個單位中，蜱最早在3月份出現(xiàn)蜱，最遲在11月份才消失；其中感染單位數(shù)較多的月份集中在5～10月。具體各月份感染蜱的單位數(shù)見圖1。

2．3 五年間各單位感染最嚴重月份分布及感染最嚴重月份的感染率和帶蜱指數(shù) 調(diào)查統(tǒng)計結(jié)果表明，感染最為嚴重月份從5月份到10月份都有分布，其中5、6、7、8、9、10月份為感染最為嚴重月份的單位數(shù)分別為5、7、14、13、5、3個，由此可知蜱在夏季和秋季感染最為嚴重。此外，各年份最為嚴重月份的感染率、帶蜱指數(shù)大部分在0%～50%、0～30和50%～100%、30～100范圍內(nèi)。各年份及各年份中蜱感染最為嚴重月份具體情況見表1。

2．4 蜱種鑒定 從21個單位采集到的蜱進行了蜱種鑒定，分為3個種，分別為血紅扇頭蜱（Rhipicephalussanguineus）、鈴頭血蜱（Haemaphyszliscampanulata）和草原血蜱（Haemsphysalisverticalis）。各蜱種地理分布如下，血紅扇頭蜱：福建省福州市、廈門市、廣東省廣州市、深圳市、四川省成都市、重慶市、湖南省長沙市、山西省太原市、河南省鄭州市、江西省南昌市、海南省三亞市、萬寧市、樂東縣、瓊中縣、?？谑?、白沙縣、廣西壯族自治區(qū)南寧市；鈴頭血蜱：江蘇省南京市、河北省石家莊市、江西省南昌市；草原血蜱：江西南昌市。不同蜱種低倍顯微鏡下的形態(tài)如圖2所示。

圖1 2007年～2011年間每月感染單位數(shù)

圖2 三蜱種在低倍顯微鏡下的形態(tài)圖 （40×）

2．5 巴貝斯蟲感染情況 以巴貝斯蟲屬18SrDNA為目的片段序列進行比對，巴貝斯蟲檢測結(jié)果表明，20個單位采集的飽血雌蜱中，有8個單位的蜱蟲攜帶巴貝斯蟲，經(jīng)基因比對確定巴貝斯蟲均為韋氏巴貝斯蟲。這8個單位所在地理位置及檢出率為：海南省3．33%、廣東省3．33%、廣西壯族自治區(qū)13．3%、浙江省6．67%、重慶市26．67%。從河北省、河南省、湖南省、江蘇省、山西省、福建省和江西省的12個單位采集到的蜱蟲中未檢測到巴貝斯蟲。

3 分析與討論

從感染單位數(shù)、各單位警犬感染率和帶蜱指數(shù)來看，所調(diào)查的32個單位在2007年～2011年間警犬感染蜱蟲已相當嚴重。在調(diào)查中我們還了解到，所調(diào)查的有感染蜱史的29個單位都采取了手抓蜱、犬身殺蟲劑浸泡、犬舍及犬身殺蟲劑噴霧等方法相結(jié)合進行滅蜱。其中有21個單位警犬蜱得到有效的控制，8個單位蜱控制效果一般，不能徹底的殺滅蜱蟲，在停藥后容易再次暴發(fā)。這可能跟用藥劑量、用藥頻率和蜱耐藥株產(chǎn)生有關(guān)，其原因有待進一步研究。

全國21個省、4個自治區(qū)、2個直轄市的32個警犬技術(shù)工作單位中，18個省、4個自治區(qū)、2個直轄市的29個單位的警犬近5年來有蜱蟲感染史，說明蜱在我國大部分地區(qū)都有分布。蜱能適應(yīng)不同氣候，在不同地區(qū)生存，這同時也說明了蜱有很強的適應(yīng)能力。因此為更好的控制蜱，對蜱自然條件下的生活習性的研究是很有必要的。

蜱類的生活史受多種生態(tài)因子的影響，其中溫度和濕度對發(fā)育和生殖的影響研究較多。在適宜的溫度范圍內(nèi)，溫度升高可以提高蜱的代謝速度，增強對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用，溫度降低使代謝率下降，發(fā)育緩慢；濕度是影響蜱類發(fā)育的又一因子，適宜的濕度對于蜱類的發(fā)育具有重要意義［12］。而本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，感染次數(shù)較多的月份集中在5～10月；感染最為嚴重的季節(jié)為夏季和秋季，這可能是因為夏季和秋季溫度較高，濕度較大，促進了蜱的發(fā)育和生殖，從而使得警犬在夏季和秋季暴發(fā)蜱蟲感染流行。

國內(nèi)外蜱分類方法主要有形態(tài)學分類、細胞學分類、遺傳雜交試驗、生物化學分類、化學分類和分子生物學分類等方法［13］，用形態(tài)學分類方法基本上可以把蜱種鑒定出來。但在運用形態(tài)學分類硬蜱屬時，應(yīng)該采用最新的陳澤等［6］的蜱屬檢索表，而鄧國藩等［7］描述的蜱種檢索表可以借鑒。所以本次試驗中采用陳澤等［6］的蜱屬檢索表和鄧國藩等［7］的蜱種檢索表相結(jié)合用于蜱種鑒定。

從21個有感染史的警犬單位中，采集到3種蜱，分別為血紅扇頭蜱、鈴頭血蜱和草原血蜱。其中不同地區(qū)的17個單位的優(yōu)勢蜱種為血紅扇頭蜱，這也進一步證明了血紅扇頭蜱是一種全球分布的喜好犬為宿主的硬蜱［14］。血紅扇頭蜱也是一種喜好室內(nèi)環(huán)境生存的蜱［15］，所以在感染血紅扇頭蜱的單位應(yīng)該著重進行犬舍的滅蜱工作。此外，在其他4個單位中3個單位采集到鈴頭血蜱，另一單位采集到草原血蜱，說明犬是多種蜱種的宿主。由于工作量較大，人員有限，所以此次我們只采集了21個單位的蜱進行鑒定，其他的警犬單位的蜱種有待研究。

從12個省份20個單位采集到的蜱蟲體內(nèi)檢測巴貝斯蟲，有8個單位的蜱蟲檢測到巴貝斯蟲，12個單位的蜱蟲體內(nèi)未檢測到，說明警犬感染巴貝斯蟲的風險比較大。8個單位采集蜱蟲體內(nèi)檢測到的巴貝斯蟲均為韋氏巴貝斯蟲，表明韋氏巴貝斯蟲為優(yōu)勢蟲種。重慶市、廣西壯族自治區(qū)、浙江省、廣東省、海南省的8個單位蜱蟲檢測到巴貝斯蟲，因此這些單位的警犬應(yīng)加強滅蜱，防止巴貝斯蟲在警犬中擴散；同時應(yīng)對已感染巴貝斯蟲的警犬做到早隔離，早治療。

［1］ Coddingtonja J A，Colwell R K，Arachnida．In：Levin SA（ed）Encyclopedia of biodiversity［M］．Academic Press，New York，2001：199－218．

［2］ Jongejan F，Uilenberg G．The global importance of ticks［M］．Parasitology 2004：129（Suppl 1）：53－514．

［3］ 譚善杰．硬蜱的危害及防治［J］．山東畜牧獸醫(yī)，2011（4）：39．

［4］ 孔繁瑤．家畜寄生蟲學［M］．2版．北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，1997：240．

［5］ 包喜軍，葉俊華．蜱感染致犬麻痹的診斷與治療［J］．中國獸醫(yī)雜志，2011，47（5）：64．

［6］ 陳澤，李思思，劉敬澤．蜱總科新分類系統(tǒng)的科、屬檢索表［J］．中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志，2011，29（4）：302－305．

［7］ 鄧國藩，姜在階．中國經(jīng)濟昆蟲志［M］．北京：科學出版社，1991：5－350．

［8］ 葉俊華，劉文春，馬長書，等．某警犬場犬蜱的調(diào)查與綜合防制報告［J］．中國養(yǎng)犬雜志，1997，8（4）：19－20．

［9］ 馬玉海，杜衛(wèi)東，佟衛(wèi)東，等．華南軍警犬體表寄生蟲蜱調(diào)查及防治［J］．中國獸醫(yī)科技，1998（8）：34．

［10］朱鳴．上海地區(qū)警犬蜱流行病學調(diào)查和防控技術(shù)的研究［D］．上海：上海交通大學，2009．

［11］Wei Q，T suji M，Zamoto A，etal．Human babesiosis in Japan：isolation ofBabesiamicroti－like parasites from an asymptomatic transfusion donor and from a rodent from an area where babesiosis is endmic［J］．J Clin Microbiol，2001，39（6）：2178．

［12］鄭洪遠．長角血蜱的野外生態(tài)學研究［D］．石家莊：河北師范大學，2008．

［13］范雄林，朱朝君．蜱分類研究進展［J］．中國媒介生物學及控制雜志，1998，9（5）：385－387．

［14］Elen Anatriello，JoséM C Ribeiro，etal．An insight into the sialotranscriptome of the brown dog tick，Rhipicephalus sanguineus［J］．BMC Genomics，2010，11：450－467．

［15］Filipe Dantas－Torres．Biology and ecology of the brown dog tick，Rhipicephalus sanguineus［J］．Parssites＆Vectors，2010，3：26－37．