李 桃 齊潔敏 (承德醫(yī)學(xué)院病理教研室，河北 承德 067000)

胃癌是世界范圍內(nèi)高發(fā)的惡性腫瘤之一，也是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率和病死率居我國(guó)消化道惡性腫瘤之首〔1〕，5年生存率徘徊在20% ～30%，主要死亡原因是腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，研究胃癌的發(fā)生機(jī)制及尋找胃癌的早期診斷指標(biāo)成為目前的研究熱點(diǎn)。胃癌和其他惡性腫瘤一樣有著共同的轉(zhuǎn)移機(jī)制，是一個(gè)多步驟、多階段的復(fù)雜過程，胃癌細(xì)胞的黏附力變化以及胃癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)、基底膜(BM)的相互作用是惡性腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的首要步驟〔2，3〕，所以作為細(xì)胞黏附分子(CAM)的整合素α5β1在胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用非常重要。CD151作為四次跨膜結(jié)構(gòu)超家族(TM4SF)中新近發(fā)現(xiàn)的一員，被發(fā)現(xiàn)其胞外大環(huán)可與一些整合素家族成員相結(jié)合形成整合素——CD151復(fù)合體，在整合素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面起著跨膜轉(zhuǎn)換器的作用。在胃癌中整合素α5β1、CD151的表達(dá)及意義尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法檢測(cè)整合素α5β1、CD151在胃癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)，分析其相互關(guān)系并闡述其在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年10月至2012年3月承德市多家醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷確診為胃癌的組織80例，男51例，女29例，平均年齡64歲，其中高分化19例，中分化28例，低分化33例。癌灶＞10 cm處癌旁正常組織50例，男31例，女19例，平均年齡61歲。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩組之間年齡及性別構(gòu)成無(wú)明顯差異。全組病例術(shù)前均未行化療和放療。所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片。

1.2 試劑和方法

1.2.1 試劑 兔抗整合素 α5β1多克隆 IgG抗體和兔抗CD151多克隆IgG抗體，購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，兔免疫組化試劑盒為北京四正柏生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2.2 免疫組織化學(xué)SP法 實(shí)驗(yàn)步驟如下:(1)切片常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水;(2)3%H2O2去離子水，37℃，孵育30 min，PBS洗3次;(3)抗原修復(fù):切片置入預(yù)先煮沸的0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)中，置微波爐內(nèi)中低火加熱2 min，低火加熱6 min，之后自然冷卻至室溫;(4)滴加一抗:10%山羊血清，37℃，孵育30 min，傾去多余血清，加入1∶100稀釋的一抗(兔抗整合素α5β1多克隆IgG抗體和兔抗CD151多克隆IgG抗體)4℃過夜;(5)復(fù)溫30 min后滴加二抗，37℃，30 min，PBS洗 3次;(6)加入 HRP標(biāo)記鏈親和素，37℃，30 min，PBS洗3次;(7)配制DAB顯色液，邊顯色邊用顯微鏡觀察，約6 min，自來水終止顯色;(8)蘇木素復(fù)染細(xì)胞核8 min，常規(guī)脫水、透明、中性樹膠封片。用已知陽(yáng)性切片組織作陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照用PBS代替一抗。

1.2.3 結(jié)果評(píng)定 整合素α5β1陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜，呈黃色顆粒狀，強(qiáng)陽(yáng)性染色者細(xì)胞質(zhì)內(nèi)也有著色，CD151的陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，位于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。表達(dá)水平采用陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分綜合確定。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:0分等于陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于10%;1分等于陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于25%;2分等于陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于50%;3分等于陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于等于50%。陽(yáng)性染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:0分等于陰性，與背景色完全一致;1分等于弱陽(yáng)性染色，呈淡黃色，略深于背景色;2分等于陽(yáng)性染色，呈中等黃色，明顯深于背景色;3分等于強(qiáng)陽(yáng)性染色，呈棕黃色或棕褐色，胞漿內(nèi)也可見著色。每張切片總評(píng)分等于陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分+陽(yáng)性染色強(qiáng)度評(píng)分，積分0～2分為低表達(dá)(-/+)，3～4分為中度表達(dá)(?)，5～6分為高表達(dá)(?)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 整合素α5β1、CD151在胃癌組織、癌旁正常組織中的表達(dá) 整合素α5β1、CD151均在陰性對(duì)照片中無(wú)表達(dá)。陽(yáng)性產(chǎn)物分別定位于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆?；蚓€網(wǎng)狀分布。整合素α5β1、CD151在胃癌組織中的陽(yáng)性率分別為60%、63.75%，高于癌旁正常組織(22%、18%)(P＜0.05)。見表1，圖1，圖2。

2.2 胃癌組織中不同分化程度之間的整合素α5β1、CD151的表達(dá) 整合素α5β1在胃癌組織中不同分化程度之間表達(dá)陽(yáng)性率的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。CD151在胃癌組織中不同分化程度之間表達(dá)陽(yáng)性率的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。整合素α5β1、CD151在胃癌組織的表達(dá)與胃癌的不同分化程度密切相關(guān)。

圖1 各組胃組織α5β1表達(dá)(DAB，×200)

圖2 各組胃組織中CD151表達(dá)(DAB，×200)

表1 胃癌組織和癌旁正常組織中整合素 α5β1、CD151 的表達(dá)

表2 胃癌組織中不同分化程度癌組織整合素 α5β1、CD151 的表達(dá)

2.3 整合素α5β1、CD151在胃癌組織中表達(dá)強(qiáng)度的相關(guān)性整合素α5β1、CD151在胃癌中的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.428，P＜0.05)。見表 3。整合素 α5β1、CD151 在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有協(xié)同作用。

表3 胃癌組織中整合素α5β1、CD151表達(dá)相關(guān)性分析(n)

3 討論

惡性腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞之間相互作用的一個(gè)復(fù)雜、多步驟的過程，該過程主要包括細(xì)胞黏附、基質(zhì)分解和細(xì)胞轉(zhuǎn)移三個(gè)步驟。腫瘤細(xì)胞在向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時(shí)首先要脫離原發(fā)灶，黏附在細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)并降解ECM和BM，然后再降解的ECM中移動(dòng)。在此過程中細(xì)胞黏附分子及各種降解酶類發(fā)揮了重要作用。

整合素是黏附分子的一大類，最早由Richand于1987年提出，主要介導(dǎo)細(xì)胞之間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)間的黏附。大量研究表明整合素家族中的整合素α5β1在腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起著非常重要的作用。首先整合素α5β1能使腫瘤的同質(zhì)性黏附下降，促使腫瘤細(xì)胞從瘤體上脫落，然后再使腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性黏附增強(qiáng)，加強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與宿主非腫瘤細(xì)胞之間的黏附。另外整合素α5β1可與ECM的主要組成成分纖維結(jié)合蛋白(FN)結(jié)合，將胞內(nèi)細(xì)胞骨架成分定位于局部的黏著位點(diǎn)，并引起一系列胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等生物學(xué)功能，從而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用〔4〕。目前已有研究表明整合素α5β1在肝癌、肺癌、腸癌等腫瘤細(xì)胞中都有表達(dá)，其蛋白表達(dá)水平或極性分布隨著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展而變化，這可能與腫瘤的細(xì)胞起源、惡性程度和整合素α5β1作用的多樣性相關(guān)。然而整合素α5β1在胃癌組織中的表達(dá)及意義的研究很少。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)整合素α5β1在胃癌組織中的陽(yáng)性率均高于癌旁正常胃組織，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，整合素α5β1在胃癌組織的表達(dá)與胃癌的不同分化程度密切相關(guān)，說明整合素α5β1在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用。

CD151是四次跨膜結(jié)構(gòu)超家族(TM4SF)中新近發(fā)現(xiàn)的一員，被發(fā)現(xiàn)與腫瘤進(jìn)展及預(yù)后呈正相關(guān)〔5，6〕，在多種人類腫瘤組織中過表達(dá)，如前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、唾液腺癌等，目前在胃癌中也有報(bào)道CD151有異常高表達(dá)〔7〕。本研究也證實(shí)CD151在胃癌組織中高表達(dá)，并與胃癌的分化程度密切相關(guān)。說明整合素α5β1、CD151在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起著協(xié)同作用。

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