張 瑜 張?之 毛新民

本實(shí)驗(yàn)旨在觀察胡蘆巴總皂苷（Trigonella foenum greacum，L Saponin，TFGs）對非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平的影響。

材料與方法

一、動(dòng)物與試劑 健康Wister大鼠，雌雄各半，體重180～220g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。TGFs干燥粉末（昌吉衛(wèi)生學(xué)校藥學(xué)組提供），易善復(fù)（北京安萬特制藥有限公司提供），膽固醇（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所提供），豬膽酸（北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司提供），丙二醇（天津市化學(xué)試劑三廠提供），吐溫-80（上海山浦化工有限公司提供）。

二、非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立[1～7]將大鼠按體重和性別均衡地隨機(jī)分為6組，即鹽水組（10只）、模型組（10只）、易善復(fù)組（10只）和小、中、大劑量TFGs組（各10只）。易善復(fù)治療組大鼠給予易善復(fù)（142.5 mg.kg-1.d-1）灌胃，TFGs組大鼠給予不同劑量的 TFGs（60mg.kg-1.d-1、90mg.kg-1.d-1、120mg.kg-1.d-1）灌胃。鹽水組大鼠給予生理鹽水15ml.kg-1灌胃，其余各組大鼠給予高脂乳劑[8，9]（脂肪乳成分：每100ml脂肪乳中含10g膽固醇，30g豬油，3g膽酸，10ml吐溫-80，20ml丙二醇，蒸餾水加至 100ml）15ml.kg-1灌胃，每日下午一次，連續(xù)70天。自第71天起，對鹽水組和模型組大鼠在繼續(xù)每天下午給予高脂乳劑的同時(shí)，每天上午給予生理鹽水15ml.kg-1.d-1灌胃，易善復(fù)組大鼠給予易善復(fù)（142.5 mg.kg-1.d-1）灌胃，小、中、大劑量TGFs組給予胡蘆巴總皂苷60mg.kg-1.d-1、90mg.kg-1.d-1、120mg.kg-1.d-1灌胃，持續(xù) 35天。實(shí)驗(yàn)周期共105天。

三、肝指數(shù)測定 在末次給藥后，動(dòng)物禁食（不禁水）12小時(shí)。在稱體重后處死動(dòng)物，打開腹腔，取出完整肝臟，用生理鹽水沖洗干凈，隨后稱重，以肝臟重量（g）/大鼠體質(zhì)量（g）作為肝指數(shù)（g/g）。

四、血清和肝勻漿脂質(zhì)測定 采用酶比色法檢測（上?？迫A生物工程股份有限公司）。

五、肝組織病理學(xué)檢查 常規(guī)進(jìn)行。

六、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以（±s）表示，各組間均數(shù)的比較采用方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α＝0.05。

結(jié)果

一、胡蘆巴總皂苷對大鼠肝脂肪變的影響 肉眼觀，模型組動(dòng)物肝臟體積增大，顏色淺黃，切面油膩感。在光鏡下，可見肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大小、數(shù)量不等的類圓形脂滴，呈灶狀或片狀分布，占50%～60%，肝小葉中央?yún)^(qū)肝細(xì)胞脂肪變性嚴(yán)重，出現(xiàn)肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，有嗜中性粒細(xì)胞浸潤（圖1、2）。

圖1 模型組大鼠肝組織病理學(xué)表現(xiàn)（HE，250×）

圖2 大劑量TFGs處理組大鼠肝組織病理學(xué)表現(xiàn)（HE，250×）

二、胡蘆巴總皂苷對非酒精性脂肪肝大鼠肝指數(shù)及肝勻漿脂質(zhì)的影響 見表1。

表1 TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠肝指數(shù)及肝勻漿脂質(zhì)（±s）的影響

表1 TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠肝指數(shù)及肝勻漿脂質(zhì)（±s）的影響

與鹽水組比，①P<0.01；與模型組比，②P<0.01

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三、TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠血脂含量的影響 見表2。

表2 TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠血脂（±s）的影響

表2 TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠血脂（±s）的影響

與鹽水組比，①P<0.01；與模型組比，②P<0.05

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討論

非酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今尚缺乏充分解釋其所有臨床現(xiàn)象的理想學(xué)說，目前的研究認(rèn)為主要與脂肪代謝異常、胰島素抵抗、脂肪異位、脂肪激素和脂肪因子、游離脂肪酸、線粒體功能障礙、氧應(yīng)激、腸道菌群紊亂和遺傳等因素有關(guān)[10，11]。其中脂肪代謝異常與飲食誘發(fā)的非酒精性脂肪肝密切相關(guān)。肝合成游離脂肪酸增加或由碳水化合物合成TG，脂肪酸在肝線粒體β氧化減少，極低密度脂蛋白合成和分泌減少均可破壞脂肪組織及脂肪細(xì)胞與肝細(xì)胞之間脂肪代謝的動(dòng)力循環(huán)平衡[12]，使脂肪在肝臟中異常沉積，而血脂與脂肪肝的關(guān)系密切已經(jīng)成為共識。血脂升高以TG升高為主[13～15]，而TG升高與脂肪肝的程度無明確的線性關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)采用的高脂乳劑灌胃制造大鼠非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型，說明與飲食誘發(fā)的非酒精性脂肪肝關(guān)系密切。

模型組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大小和數(shù)量不等的類圓形脂滴，呈灶狀或片狀分布，肝小葉中央?yún)^(qū)肝細(xì)胞脂肪變性明顯，出現(xiàn)肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，有嗜中性粒細(xì)胞浸潤，說明建立的非酒精性脂肪肝模型成功。我們還直接檢測了大鼠肝組織脂質(zhì)含量，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠肝組織TC和TG含量顯著高于正常組大鼠，血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量均明顯高于正常組大鼠，提示該模型為伴有高脂血癥性非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型。

TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠的治療作用表明，TFGs能顯著降低模型組大鼠肝指數(shù)，且隨劑量的增加有劑量依賴的趨勢，說明TFGs能減輕肝腫大。TFGs能顯著降低模型組大鼠血清 TC、HDL-C、LDL-C含量，同時(shí)病理結(jié)果發(fā)現(xiàn)TFGs可使模型組肝細(xì)胞脂肪變在程度和范圍上均較模型組大鼠明顯減輕，且肝細(xì)胞水腫亦減輕，說明TFGs主要通過改善機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂，改善大鼠肝臟中脂質(zhì)沉積，但TFGs不能降低血清TG，原因不清。

本模型中存在高密度脂蛋白升高的問題，可從以下兩個(gè)方面考慮：①據(jù)許敏等報(bào)道，高密度脂蛋白可分為5種亞型，即 HDL-2a、HDL-2b、HDL-3a、HDL-3b、HDL-3c[17]。而徐燕華等報(bào)道，高脂血癥患者血清中前 β-1HDL、前 β-2HDL、HDL-3c、HDL-3a、HDL-3b含量顯著增加，而HDL-2a、HDL-2b含量顯著減少。高脂血癥患者血清TG含量與前β-1HDL、前β-2HDL、HDL-3a、HDL-3b水平呈正相關(guān)，而與HDL-2a、HDL-2b水平呈負(fù)相關(guān)；TC含量與前β-1HDL、HDL-3b水平呈正相關(guān)，而與HDL-2b水平呈負(fù)相關(guān)；LDLC含量與HDL-3b水平呈正相關(guān)[15]。高脂乳劑造成大鼠血清TC、TG、LDLC含量顯著增加，會(huì)引起 β-1HDL、前 β-2HDL、HDL-3a、尤其 HDL-3b的增加，使總膽固醇增加。而可能大鼠血清中這些HDL亞型的比例與人不同，HDL-2a、HDL-2b比例偏低，兩者的減少量不能抵消其它HDL亞型的增加量。②血清中TC含量的升高，能上調(diào)高密度脂蛋白受體，使肝細(xì)胞膜高密度脂蛋白受體活性升高[18]，從而反饋調(diào)節(jié)使血清高密度脂蛋白升高，以便更多地把體內(nèi)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟代謝。

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